Ágar Salmonella-Shigella: fundação, preparação e usos

O ágar Salmonella Shigella também conhecido como ágar SS é um meio moderadamente selectivo e diferencial, especialmente concebidos para o isolamento de bactérias enteropatogénicas dos géneros Salmonella e Shigella, tanto amostras ambientais, tais como um ensaio clínico.

O ágar SS tem uma composição complexa; Consiste em extrato de carne, peptona, lactose, sais biliares, citrato de sódio, tiossulfato de sódio, citrato férrico, ágar, vermelho neutro, verde brilhante e água destilada . Dada sua grande seletividade, amostras com abundante flora mista podem ser semeadas.

Ágar Salmonella-Shigella: fundação, preparação e usos 1

Ágar SS com colônias de Salmonella sp. Fonte: Manurx27 [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], do Wikimedia Commons

Nos laboratórios de microbiologia, o meio Salmonella-Shigella é amplamente utilizado para investigar a presença de Salmonella e Shigella em amostras de fezes diarreicas, esgoto, água potável e alimentos.

Às vezes é necessário usar caldos de pré-enriquecimento (caldo de lactose) e enriquecimento (caldo de selenita cistina) para recuperar cepas de Salmonella.

Essas etapas são necessárias quando se suspeita da existência de Salmonella em uma quantidade muito baixa ou quando a cepa pode ser maltratada por processos de produção industrial, principalmente alimentos processados.Também é aconselhável enriquecer as amostras de fezes de pacientes que foram tratados com antibióticos.

Posteriormente, o caldo enriquecido pode ser semeado no ágar Salmonella-Shigella e outros meios semelhantes, como o ágar xilose, o desoxicolato de lisina (XLD) e o ágar Hektoen entérico (HE).

Fundação

Cada componente do meio de cultura Salmonella-Shigella tem uma função específica e toda a mistura fornece as propriedades que o caracterizam.

Poder nutricional

O extrato de carne e peptona (digerido de caseína e tecido animal) fornece os nutrientes necessários (nitrogênio, carbono e vitaminas) para o desenvolvimento de microrganismos capazes de tolerar o restante dos componentes.

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Consistência

O ágar-ágar é responsável por fornecer consistência sólida ao meio ambiente.

Seletiva

Este meio é altamente seletivo porque contém sais biliares, citrato de sódio e verde brilhante. Portanto, inibe o crescimento de todas as bactérias Gram-positivas e da maioria dos bacilos Gram-negativos, incluindo alguns coliformes.

Enquanto as bactérias do gênero Salmonella e algumas cepas de Shigella suportam esses compostos.

Principalmente, o gênero Salmonella é muito resistente aos sais biliares, tanto que é capaz de viver na vesícula biliar de alguns pacientes portadores que constantemente expelem a bactéria através das fezes.

Diferencial

A lactose é o carboidrato fermentável que ajuda a diferenciar a lactose das cepas de fermentação que não fermentam. Essa propriedade é evidenciada pela presença do indicador de pH, que neste meio é vermelho de fenol.

As cepas fermentadoras de lactose dão colônias vermelhas, enquanto as cepas não fermentativas são incolores.Essa característica é importante, uma vez que Salmonella e Shigella não fermentam lactose.

Por outro lado, este meio contém tiossulfato de sódio como fonte de sulfeto e citrato férrico como fonte de ferro.Ambos os compostos conseguem diferenciar as bactérias capazes de produzir sulfeto de hidrogênio. Estes reagem para formar um precipitado preto de sulfureto férrico insolúvel e visível.

Esta propriedade possui algumas linhagens do gênero Salmonella. Normalmente, suas colônias são planas e incolores, com um ponto preto no centro. Outros Salmonella não produzir H 2 S e desenvolver colias incolores.

Por outro lado, as colônias do gênero Shigella são planas e incolores, sem escurecer.

Preparação

Este meio é muito simples de preparar.

Pesar 63 g do meio comercial seco e dissolver em um litro de água destilada. Aqueça a solução e mexa. A mistura pode ferver por alguns minutos.

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Este meio não deve ser autoclavado. Após a dissolução, é servido diretamente em placas estéreis simples ou duplas.

Ao solidificar, eles são encomendados invertidos em plaquetas e armazenados em uma geladeira (2-8 ° C) até o uso.

O meio após a preparação deve estar em pH 7,2 ± 0,2 e com a cor vermelho alaranjado.

É importante deixar as placas temperarem antes de semear as amostras. A amostra original pode ser semeada diretamente, descarregando o material em uma parte do ágar e, a partir daí, buscando exaustão.

No caso de usar caldos enriquecidos, passe uma porção do caldo de selenito e semeie com uma espátula drigalski.

Incubar a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

Lembre-se de que a quantidade de gramas a pesar e o pH final do meio podem variar de uma casa comercial para outra. A placa do meio sempre traz as indicações para sua preparação.

Use

É frequentemente utilizado na análise de coproculturas e no estudo microbiológico de amostras de água residual, água potável e alimentos.

Frequentemente são preparadas placas duplas, de um lado é colocado o ágar Salmonella-Shigella e do outro o ágar XLD.

Limitações

-Algumas cepas de Shigella não crescem neste meio. Portanto, não é recomendado para o isolamento primário desse gênero.

-Nem todas as colônias transparentes com centro preto são indicativas de Salmonella; Testes bioquímicos devem ser realizados para fazer uma identificação correta, uma vez que as colônias de algumas cepas de Proteus são indistinguíveis das de Salmonella.

-O meio desidratado deve cuidar da exposição ao meio ambiente, pois é muito higroscópico. Portanto, deve ser mantido em ambiente seco e bem fechado. Aberto por períodos muito curtos.

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– Com o tempo, os sais biliares do meio podem precipitar, formando uma imagem semelhante a uma emaranhada dentro do ágar, mas isso não afeta os resultados.

-Algumas cepas de Shigella podem fermentar lentamente a lactose.

Controle de qualidade

Para provar que o meio está funcionando corretamente, é aconselhável semear cepas de controle conhecidas ou certificadas e ver se o crescimento atende às características esperadas.

Para isso, podem ser utilizadas linhagens de E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium ou Enterococcus faecalis.

Os resultados esperados são:

Escherichia coli —————————- Colônias convexas rosa .

Enterobacter e Klebsiella – grandes colônias e mucoóides vermelhos ou rosa.

Shigella flexneri —————————- Colônias planas transparentes ou incolores.

Salmonella typhimurium – colônias incolores com centro preto.

Enterococcus faecalis – inibição total.

Referências

  1. Laboratórios Difco Francisco Soria Melguizo. Agar Salmonella-Shigella. 2009. Disponível em: f-soria.es
  2. Laboratório BD. Agar BD Salmonella-Shigella. 2013. Disponível em: bd.com
  3. Laboratórios britânicos. Ágar Salmonella-Shigella. 2015. Disponível em: britanialab.com
  4. Diagnóstico da Valtek. Ágar Salmonella-Shigella (SS Agar) .2010. Disponível em: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

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