Caldo de ureia: fundação, preparação e usos

O caldo de ureia é uma solução aquosa de ureia, um composto orgânico nitrogenado. Esta solução é utilizada em diversas áreas, como na agricultura, na indústria química e na medicina. Neste artigo, discutiremos a fundação do caldo de ureia, como ele é preparado e seus principais usos em diferentes setores. A ureia é uma substância amplamente utilizada devido à sua capacidade de fornecer nitrogênio de forma eficaz para as plantas, ser um componente essencial de fertilizantes e ter propriedades cosméticas na medicina. Vamos explorar mais sobre esse composto versátil e suas aplicações práticas.

Agar com Ureia: Uma técnica eficaz para identificação de microrganismos patogênicos.

O uso de Agar com Ureia é uma técnica eficaz para identificação de microrganismos patogênicos. A ureia é uma substância que pode ser utilizada para diferenciar bactérias com capacidade de hidrolisar ureia, liberando amônia.

A preparação do Caldo de Ureia é simples e envolve a adição de ureia ao meio de cultura, permitindo a detecção da enzima urease produzida por certas bactérias. A mudança de cor do meio indica a presença da enzima e, portanto, a identificação do microrganismo.

O Caldo de Ureia é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia para identificar bactérias como Proteus, Klebsiella e Citrobacter, que são capazes de hidrolisar a ureia. Essa técnica é especialmente útil na diferenciação de enterobactérias e no diagnóstico de infecções bacterianas.

Em resumo, o Agar com Ureia é uma ferramenta importante para identificação de microrganismos patogênicos, proporcionando resultados precisos e confiáveis no diagnóstico de infecções. É uma técnica simples, porém eficaz, que auxilia os profissionais de saúde na escolha do tratamento adequado para os pacientes.

Avaliação da eficácia da ureia de Christensen como fertilizante em experimento agrícola.

Caldo de ureia: fundação, preparação e usos. A ureia de Christensen é um fertilizante amplamente utilizado na agricultura devido ao seu alto teor de nitrogênio. No entanto, é importante avaliar sua eficácia em experimentos agrícolas para garantir a sua aplicação correta e maximizar os resultados.

Um experimento foi realizado para avaliar a eficácia da ureia de Christensen como fertilizante em plantações de milho. Foram selecionadas diferentes áreas de cultivo, sendo que em algumas áreas a ureia foi aplicada conforme as recomendações de dosagem, enquanto em outras áreas foi utilizado um fertilizante convencional.

Os resultados do experimento mostraram que as plantações que receberam a ureia de Christensen apresentaram um aumento significativo na produção de milho em comparação com as plantações que receberam o fertilizante convencional. Além disso, a ureia de Christensen também mostrou uma maior eficiência na absorção de nitrogênio pelas plantas, contribuindo para um crescimento mais saudável e vigoroso.

Portanto, a ureia de Christensen se mostrou uma opção eficaz como fertilizante em experimentos agrícolas, proporcionando um aumento na produtividade das plantações e uma melhor absorção de nutrientes pelas plantas. Seu uso adequado e em doses recomendadas pode trazer benefícios significativos para os agricultores, contribuindo para uma agricultura mais sustentável e produtiva.

Qual a importância da prova de catalase na identificação de bactérias aeróbias?

A prova de catalase é uma importante ferramenta utilizada na identificação de bactérias aeróbias. A enzima catalase é responsável por decompor o peróxido de hidrogênio em água e oxigênio, o que é crucial para a sobrevivência de bactérias aeróbias. Ao adicionar peróxido de hidrogênio a uma cultura bacteriana e observar a formação de bolhas de oxigênio, podemos concluir que a bactéria é catalase positiva, ou seja, possui a enzima catalase em sua estrutura.

Essa informação é fundamental na identificação de bactérias, pois nos permite diferenciar entre bactérias aeróbias e anaeróbias. As bactérias aeróbias precisam da enzima catalase para neutralizar o oxigênio tóxico gerado durante o processo de respiração celular, enquanto as bactérias anaeróbias não possuem essa capacidade. Portanto, a prova de catalase nos ajuda a determinar se uma bactéria é capaz de sobreviver em ambientes ricos em oxigênio.

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Além disso, a prova de catalase pode ser um indicativo de patogenicidade bacteriana. Algumas bactérias patogênicas possuem a enzima catalase em sua estrutura, o que lhes confere a capacidade de resistir ao sistema imunológico do hospedeiro. Portanto, ao identificar a presença de catalase em uma cultura bacteriana, podemos inferir sobre o potencial patogênico da bactéria em questão.

Em resumo, a prova de catalase desempenha um papel crucial na identificação de bactérias aeróbias, permitindo diferenciar entre bactérias aeróbias e anaeróbias, além de fornecer informações sobre a patogenicidade bacteriana. É uma ferramenta essencial na microbiologia que nos ajuda a compreender melhor a diversidade e a capacidade das bactérias de sobreviver em diferentes ambientes.

Técnica de Urease em Meio Agar Base para Identificação de Microrganismos.

Uma das técnicas mais utilizadas na identificação de microrganismos é a técnica de Urease em Meio Agar Base. A urease é uma enzima que catalisa a hidrólise da ureia, produzindo amônia e dióxido de carbono como subprodutos. Esta reação é utilizada para distinguir microrganismos capazes de produzir a enzima urease dos que não possuem essa capacidade.

Para realizar o teste de Urease em Meio Agar Base, primeiro é preparado um meio de cultura contendo ureia como substrato. Os microrganismos a serem testados são inoculados no meio e incubados a uma temperatura adequada por um período de tempo determinado. Após a incubação, o meio é observado para verificar a presença de alcalinização, indicando a produção de amônia pela ação da urease.

Os microrganismos que produzem urease irão alcalinizar o meio, resultando em uma mudança de cor devido ao aumento do pH. Esta mudança de cor é um indicativo positivo para a presença da enzima urease na amostra testada. Microrganismos como Proteus vulgaris e algumas espécies de Klebsiella são conhecidos por serem positivos para o teste de urease.

O teste de Urease em Meio Agar Base é uma ferramenta importante na identificação de microrganismos, auxiliando na diferenciação entre diferentes espécies bacterianas. Além disso, é uma técnica simples, rápida e de baixo custo, sendo amplamente utilizada em laboratórios de microbiologia.

Caldo de ureia: fundação, preparação e usos

O caldo de ureia é um meio de cultura líquido, utilizado para detectar a presença de enzima urease em certos microorganismos. A urease é uma enzima microbiana produzida constitutivamente, ou seja, é sintetizada independentemente de o substrato em que atua estar ou não presente.

A função urease está relacionada à decomposição de compostos orgânicos. Nem todos os microrganismos são capazes de sintetizar essa enzima, portanto, sua determinação em laboratório permite identificar certas cepas bacterianas e até diferenciar entre espécies do mesmo gênero.

Caldo de ureia: fundação, preparação e usos 1

Teste de uréia negativo e positivo. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Existem dois tipos de teste de uréia: Stuart e Christensen. Eles diferem em sua composição e sensibilidade.O primeiro é especial para mostrar uma grande quantidade de urease produzida por espécies do gênero Proteus.

O segundo é mais sensível e pode detectar pequenas quantidades de urease gerada tardiamente por outros gêneros bacterianos, como Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter e Mycobacterium.

O caldo de uréia Stuart é composto de uréia, cloreto de sódio, fosfato dipotássico, fosfato monopotássico, extrato de levedura, vermelho de fenol e água destilada.

Enquanto isso, o caldo de ureia ou ágar de Christensen é composto de peptonas, cloreto de sódio, fosfato monopotássico, glicose, uréia, vermelho de fenol, água destilada e ágar de ágar. Este último apenas se for o meio sólido.

Fundação

A enzima urease hidrolisa a uréia para formar anidrido carbônico, água e duas moléculas de amônia. Esses compostos reagem para formar o produto final chamado carbonato de amônio.

Caldo de ureia de stuart

O caldo de stuart ureia é mais tamponado com um pH de 6,8. Portanto, o microorganismo deve ser capaz de formar grandes quantidades de amônio para tornar o fenol vermelho. O pH deve subir acima de 8.

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Portanto, o caldo de uréia de Stuart é seletivo para espécies de Proteus, apresentando resultados positivos em 24 a 48 horas de incubação e não é eficaz para bactérias que produzem pequenas quantidades de urease ou que hidrolisam lentamente a uréia.

Isso ocorre porque as espécies de Proteus são capazes de usar a uréia como fonte de nitrogênio. Em contraste, outras bactérias produtoras de urease precisam de uma fonte adicional.

No entanto, Pérez et al. (2002) determinaram que o caldo de uréia de Stuart era tão eficiente quanto o ágar de Christensen, para determinar a urease em linhagens de leveduras dos gêneros Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon e Saccharomyces.

Os autores do estudo afirmam ter alcançado 100% de coincidência com os dois meios (Stuart e Christensen) incubando por 24 e 48 horas; com exceção de que as linhagens que conseguiram transformar a mídia em uma cor rosa-fúcsia forte foram positivas.

Esse esclarecimento é necessário, uma vez que Lodder (1970) afirmou que quase todas as leveduras conseguem colocar o chanfro do ágar Christensen de uréia em rosa pálido. Isso ocorre porque eles podem hidrolisar a uréia em quantidades mínimas e a formação de aminas por descarboxilação oxidativa dos aminoácidos de superfície. Isso não deve ser interpretado como positivo.

Caldo de ureia ou ágar Christensen

O caldo de Christensen ou o ágar de uréia é menos tamponado, podendo detectar pequenas quantidades de amônio. Além disso, este meio é enriquecido com peptonas e glicose. Esses compostos causam o desenvolvimento de outros microorganismos produtores de urease que não crescem no caldo de Stuart.

Da mesma forma, o teste de uréia de Christensen oferece resultados mais rápidos, especialmente para Proteus, sendo capaz de dar um forte positivo em apenas 30 minutos no mínimo e até 6 horas no máximo.

O restante dos microrganismos produtores de urease consegue mudar a cor do meio levemente após 6 horas, e fortemente após 24, 48, 72 horas ou mais, e até algumas cepas podem apresentar reações fracas após 5 ou 6 dias.

Interpretação dos dois meios de comunicação (Stuart e Christensen)

O meio é originalmente amarelo-laranja e uma reação positiva mudará a cor do meio para rosa-fúcsia. A intensidade da cor é diretamente proporcional à quantidade de amônio produzido.

Uma reação negativa deixará o meio da cor original, exceto as leveduras, que podem dar um rosa pálido com o meio de ureia de Christensen.

Preparação

Caldo de ureia de stuart

Pese os gramas necessários de acordo com as indicações da casa comercial. Dissolver em água destilada, de preferência estéril. Não use calor para dissolver, porque a uréia é sensível ao calor.

Para esterilizar, é utilizado o método de filtração por membrana. Para isso, é utilizado um filtro Millipore com poros de 0,45 µ de diâmetro. Não use autoclave. Uma vez filtrada, a solução é distribuída em tubos estéreis. Para obter resultados confiáveis, deve-se transferir entre 1,5 ml como quantidade mínima para 3 ml como quantidade máxima por tubo.

Guarde na geladeira e tempere antes de usar.

Se o método de filtragem não estiver disponível, o meio deve ser usado imediatamente para obter resultados confiáveis.

Outra maneira de preparar o caldo de uréia de Stuart é a seguinte:

Algumas casas comerciais vendem o meio básico para testes de uréia, sem incluir a uréia.

A quantidade indicada pela casa comercial é pesada. É dissolvido em água destilada e esterilizado na autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe descansar um pouco e quando o meio estiver quente, adicione 100 ml de uma solução de uréia preparada a 20% e esterilizada por filtração.

É distribuído em tubos estéreis, como descrito acima.

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Caldo de ureia ou ágar Christensen

-Preparação da solução de uréia

Pesar 29 g de ureia desidratada e dissolver em 100 ml de água destilada. Use o método de filtragem para esterilizar. Não autoclave.

– Agar à base de ureia

Dissolver 24 g do ágar base seco em 950 ml de água destilada. Esterilizar na autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe repousar até atingir uma temperatura de 50 ° C e adicione a ureia previamente preparada assepticamente.

Despeje 4 a 5 ml em tubos estéreis e incline-os até solidificarem. Deve haver um pico longo da flauta.

Este meio também pode ser preparado na forma líquida.

Usos

O teste da ureia é extremamente eficaz para distinguir o gênero Proteus de outros gêneros da família Enterobacteriaceae, dada a reação rápida que o Proteus fornece.

Se a composição de Christensen for usada, o teste ajuda a diferenciar as espécies do mesmo gênero. Por exemplo, S. haemolyticus e S. warneri s em Staphylococcus coagulase negativo e beta-hemolítico , mas diferem em que S. haemolyticus é uréia negativa e S. warneri é uréia positiva.

Por outro lado, McNulty utilizou com sucesso o caldo de uréia Christensen a 2% para estudar a presença de Helicobacter pylori em amostras de biópsia retiradas da mucosa gástrica (região antral).

A presença de H. pylori é evidenciada por um teste positivo de uréia. A duração para observar os resultados é diretamente proporcional à quantidade de microrganismos presentes.

Como pode ser visto, é um método simples para o diagnóstico de Helicobacter pylori em biópsias gástricas.

Finalmente, este teste também é útil para diferenciar espécies dos gêneros Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus e Mycobacteria.

Teste de uréia semeada

Ambos os métodos requerem um forte inóculo microbiano para otimizar os resultados. Colônias bacterianas são preferencialmente retiradas do ágar sangue e leveduras do ágar Sabouraud, com algumas exceções. O inóculo é emulsionado no meio líquido.

Para o caldo de uréia de Stuart, ele é incubado a 37 ° C por 24 a 48 horas, sabendo que só está procurando cepas do gênero Proteus quando a cepa é uma bactéria. Para leveduras, pode ser incubada a 37 ° C ou em temperatura ambiente por 24 a 48 horas de incubação.

No caso do caldo de uréia de Christensen, ele é incubado a 37 ° C por 24 horas. Se o teste for negativo, pode ser incubado por até 6 dias. Se o teste for positivo antes de 6 horas, isso indica que é uma cepa do gênero Proteus.

No caso do ágar de ureia de Christensen, o chanfro do ágar é fortemente inoculado, sem perfurar. O caldo é incubado e interpretado da mesma maneira.

Controle de qualidade

Cepas de controle, como Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 e Salmonella typhimurium , podem ser usadas para testar o meio . Os dois primeiros devem dar resultados positivos e os dois últimos negativos.

Caldo de ureia: fundação, preparação e usos 2

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Referências

  1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Uso do caldo de uréia de Stuart para o teste de urease, como um teste no diagnóstico de leveduras. Rev. Soc. Venha. Microbiol 2002; 22 (2): 136-140. Disponível em: Scielo.org.
  2. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3rd ed. Editora Panamericana. Bons ares. Argentina
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  5. Laboratórios britânicos. Christensen Medio (base de ágar de ureia) 2015. Disponível em: britanialab.com

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