Caldo de ureia: fundação, preparação e usos

O caldo de ureia é um meio de cultura líquido, utilizado para detectar a presença de enzima urease em certos microorganismos. A urease é uma enzima microbiana produzida constitutivamente, ou seja, é sintetizada independentemente de o substrato em que atua estar ou não presente.

A função urease está relacionada à decomposição de compostos orgânicos. Nem todos os microrganismos são capazes de sintetizar essa enzima, portanto, sua determinação em laboratório permite identificar certas cepas bacterianas e até diferenciar entre espécies do mesmo gênero.

Caldo de ureia: fundação, preparação e usos 1

Teste de uréia negativo e positivo. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Existem dois tipos de teste de uréia: Stuart e Christensen. Eles diferem em sua composição e sensibilidade.O primeiro é especial para mostrar uma grande quantidade de urease produzida por espécies do gênero Proteus.

O segundo é mais sensível e pode detectar pequenas quantidades de urease gerada tardiamente por outros gêneros bacterianos, como Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter e Mycobacterium.

O caldo de uréia Stuart é composto de uréia, cloreto de sódio, fosfato dipotássico, fosfato monopotássico, extrato de levedura, vermelho de fenol e água destilada.

Enquanto isso, o caldo de ureia ou ágar de Christensen é composto de peptonas, cloreto de sódio, fosfato monopotássico, glicose, uréia, vermelho de fenol, água destilada e ágar de ágar. Este último apenas se for o meio sólido.

Fundação

A enzima urease hidrolisa a uréia para formar anidrido carbônico, água e duas moléculas de amônia. Esses compostos reagem para formar o produto final chamado carbonato de amônio.

Caldo de ureia de stuart

O caldo de stuart ureia é mais tamponado com um pH de 6,8. Portanto, o microorganismo deve ser capaz de formar grandes quantidades de amônio para tornar o fenol vermelho. O pH deve subir acima de 8.

Portanto, o caldo de uréia de Stuart é seletivo para espécies de Proteus, apresentando resultados positivos em 24 a 48 horas de incubação e não é eficaz para bactérias que produzem pequenas quantidades de urease ou que hidrolisam lentamente a uréia.

Isso ocorre porque as espécies de Proteus são capazes de usar a uréia como fonte de nitrogênio. Em contraste, outras bactérias produtoras de urease precisam de uma fonte adicional.

No entanto, Pérez et al. (2002) determinaram que o caldo de uréia de Stuart era tão eficiente quanto o ágar de Christensen, para determinar a urease em linhagens de leveduras dos gêneros Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon e Saccharomyces.

Relacionado:  Flora e fauna do Equador: características e espécies

Os autores do estudo afirmam ter alcançado 100% de coincidência com os dois meios (Stuart e Christensen) incubando por 24 e 48 horas; com exceção de que as linhagens que conseguiram transformar a mídia em uma cor rosa-fúcsia forte foram positivas.

Esse esclarecimento é necessário, uma vez que Lodder (1970) afirmou que quase todas as leveduras conseguem colocar o chanfro do ágar Christensen de uréia em rosa pálido. Isso ocorre porque eles podem hidrolisar a uréia em quantidades mínimas e a formação de aminas por descarboxilação oxidativa dos aminoácidos de superfície. Isso não deve ser interpretado como positivo.

Caldo de ureia ou ágar Christensen

O caldo de Christensen ou o ágar de uréia é menos tamponado, podendo detectar pequenas quantidades de amônio. Além disso, este meio é enriquecido com peptonas e glicose. Esses compostos causam o desenvolvimento de outros microorganismos produtores de urease que não crescem no caldo de Stuart.

Da mesma forma, o teste de uréia de Christensen oferece resultados mais rápidos, especialmente para Proteus, sendo capaz de dar um forte positivo em apenas 30 minutos no mínimo e até 6 horas no máximo.

O restante dos microrganismos produtores de urease consegue mudar a cor do meio levemente após 6 horas, e fortemente após 24, 48, 72 horas ou mais, e até algumas cepas podem apresentar reações fracas após 5 ou 6 dias.

Interpretação dos dois meios de comunicação (Stuart e Christensen)

O meio é originalmente amarelo-laranja e uma reação positiva mudará a cor do meio para rosa-fúcsia. A intensidade da cor é diretamente proporcional à quantidade de amônio produzido.

Uma reação negativa deixará o meio da cor original, exceto as leveduras, que podem dar um rosa pálido com o meio de ureia de Christensen.

Preparação

Caldo de ureia de stuart

Pese os gramas necessários de acordo com as indicações da casa comercial. Dissolver em água destilada, de preferência estéril. Não use calor para dissolver, porque a uréia é sensível ao calor.

Para esterilizar, é utilizado o método de filtração por membrana. Para isso, é utilizado um filtro Millipore com poros de 0,45 µ de diâmetro. Não use autoclave. Uma vez filtrada, a solução é distribuída em tubos estéreis. Para obter resultados confiáveis, deve-se transferir entre 1,5 ml como quantidade mínima para 3 ml como quantidade máxima por tubo.

Relacionado:  Nucleoproteínas: estrutura, funções e exemplos

Guarde na geladeira e tempere antes de usar.

Se o método de filtragem não estiver disponível, o meio deve ser usado imediatamente para obter resultados confiáveis.

Outra maneira de preparar o caldo de uréia de Stuart é a seguinte:

Algumas casas comerciais vendem o meio básico para testes de uréia, sem incluir a uréia.

A quantidade indicada pela casa comercial é pesada. É dissolvido em água destilada e esterilizado na autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe descansar um pouco e quando o meio estiver quente, adicione 100 ml de uma solução de uréia preparada a 20% e esterilizada por filtração.

É distribuído em tubos estéreis, como descrito acima.

Caldo de ureia ou ágar Christensen

-Preparação da solução de uréia

Pesar 29 g de ureia desidratada e dissolver em 100 ml de água destilada. Use o método de filtragem para esterilizar. Não autoclave.

– Agar à base de ureia

Dissolver 24 g do ágar base seco em 950 ml de água destilada. Esterilizar na autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe repousar até atingir uma temperatura de 50 ° C e adicione a ureia previamente preparada assepticamente.

Despeje 4 a 5 ml em tubos estéreis e incline-os até solidificarem. Deve haver um pico longo da flauta.

Este meio também pode ser preparado na forma líquida.

Usos

O teste da ureia é extremamente eficaz para distinguir o gênero Proteus de outros gêneros da família Enterobacteriaceae, dada a reação rápida que o Proteus fornece.

Se a composição de Christensen for usada, o teste ajuda a diferenciar as espécies do mesmo gênero. Por exemplo, S. haemolyticus e S. warneri s em Staphylococcus coagulase negativo e beta-hemolítico , mas diferem em que S. haemolyticus é uréia negativa e S. warneri é uréia positiva.

Por outro lado, McNulty utilizou com sucesso o caldo de uréia Christensen a 2% para estudar a presença de Helicobacter pylori em amostras de biópsia retiradas da mucosa gástrica (região antral).

A presença de H. pylori é evidenciada por um teste positivo de uréia. A duração para observar os resultados é diretamente proporcional à quantidade de microrganismos presentes.

Como pode ser visto, é um método simples para o diagnóstico de Helicobacter pylori em biópsias gástricas.

Relacionado:  Llantén: Características, Tipos, Origem

Finalmente, este teste também é útil para diferenciar espécies dos gêneros Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus e Mycobacteria.

Teste de uréia semeada

Ambos os métodos requerem um forte inóculo microbiano para otimizar os resultados. Colônias bacterianas são preferencialmente retiradas do ágar sangue e leveduras do ágar Sabouraud, com algumas exceções. O inóculo é emulsionado no meio líquido.

Para o caldo de uréia de Stuart, ele é incubado a 37 ° C por 24 a 48 horas, sabendo que só está procurando cepas do gênero Proteus quando a cepa é uma bactéria. Para leveduras, pode ser incubada a 37 ° C ou em temperatura ambiente por 24 a 48 horas de incubação.

No caso do caldo de uréia de Christensen, ele é incubado a 37 ° C por 24 horas. Se o teste for negativo, pode ser incubado por até 6 dias. Se o teste for positivo antes de 6 horas, isso indica que é uma cepa do gênero Proteus.

No caso do ágar de ureia de Christensen, o chanfro do ágar é fortemente inoculado, sem perfurar. O caldo é incubado e interpretado da mesma maneira.

Controle de qualidade

Cepas de controle, como Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 e Salmonella typhimurium , podem ser usadas para testar o meio . Os dois primeiros devem dar resultados positivos e os dois últimos negativos.

Caldo de ureia: fundação, preparação e usos 2

Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Referências

  1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Uso do caldo de uréia de Stuart para o teste de urease, como um teste no diagnóstico de leveduras. Rev. Soc. Venha. Microbiol 2002; 22 (2): 136-140. Disponível em: Scielo.org.
  2. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3rd ed. Editora Panamericana. Bons ares. Argentina
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  5. Laboratórios britânicos. Christensen Medio (base de ágar de ureia) 2015. Disponível em: britanialab.com

Deixe um comentário

Este site usa cookies para lhe proporcionar a melhor experiência de usuário. política de cookies, clique no link para obter mais informações.

ACEPTAR
Aviso de cookies