Giemsa-värjäys on mikrobiologiassa ja sytogenetiikassa käytetty tekniikka solujen ja kudosten värjäämiseen, mikä mahdollistaa tiettyjen rakenteiden visualisoinnin. Gustav Giemsan vuonna 1904 kehittämä Giemsa-värjäys on yksi diagnostisten laboratorioiden yleisimmin käytetyistä tekniikoista mikro-organismien, loisten ja kromosomien tunnistamiseen.
Giemsa-värjäykseen tarvitaan materiaaleja, kuten Giemsa-värjäystä, metanolia ja tislattua vettä. Tekniikassa solut kiinnitetään lasilevyille, minkä jälkeen niille levitetään metanolilla laimennettua Giemsa-värjäystä. Värjäyksen jälkeen solut pestään tislatulla vedellä ja tutkitaan mikroskoopilla.
Giemsa-värjäyksen pääasiallisia käyttötarkoituksia ovat taudinaiheuttajien, kuten Plasmodiumin (joka aiheuttaa malariaa), Trypanosoman (joka aiheuttaa Chagasin tautia), ja bakteerien, kuten Chlamydian ja Rickettsian, tunnistaminen. Lisäksi Giemsa-värjäystä käytetään laajalti kromosomianalyysissä geneettisten sairauksien diagnosoimiseksi ja kromosomipoikkeavuuksien tunnistamiseksi.
Vaiheittainen opas Giemsa-värjäyksen tehokkaaseen suorittamiseen.
Giemsa-värjäys on olennainen tekniikka kliinisessä analyysissä ja tieteellisissä tutkimuslaboratorioissa. Sen avulla voidaan visualisoida erilaisia solurakenteita, kuten kromosomeja, loisia ja bakteereja, niiden osien spesifisen värjäyksen avulla. Tässä artikkelissa selitämme vaihe vaiheelta, kuinka Giemsa-värjäys suoritetaan tehokkaasti.
1-vaihe: Valmista Giemsa-liuos, jota voi ostaa valmiina tai jauheena. Liuos tulee laimentaa tislattuun veteen valmistajan suosittelemassa suhteessa.
2-vaihe: Kiinnitä näyte lasilevylle lämmöllä tai kiinnitysaineilla, kuten etyylialkoholilla. Varmista, että näyte on kiinnitetty tukevasti, jotta vältetään vääristymät värjäyksen aikana.
3-vaihe: Peitä kiinnitetty näyte Giemsa-liuoksella varmistaen, että koko pinta peittyy tasaisesti. Anna lasilevyn olla kosketuksissa liuokseen tietyn ajan, yleensä 10–30 minuuttia.
4-vaihe: Huuhtele lasilevy juoksevan veden alla ylimääräisen tahran poistamiseksi. Kuivaa lasilevy varovasti imukykyisellä paperilla tai paineilmalla.
5-vaihe: Tarkastele värjättyä näytettä valomikroskoopilla käyttäen sopivia suurennusobjektiiveja. Giemsa-värjäys mahdollistaa solurakenteiden visualisoinnin selkeämmin ja kontrastivammin.
Giemsa-värjäystä käytetään laajalti eri biologian ja lääketieteen aloilla, kuten loistautien diagnosoinnissa, verisolujen analysoinnissa ja tartuntatautien tunnistamisessa. Noudattamalla yllä kuvattuja vaiheita oikein voidaan saada tarkkoja ja luotettavia Giemsa-värjäystuloksia.
Ymmärrä Giemsa-värjäysprosessi ja sen toimintaperiaate yksityiskohtaisesti.
Giemsa-värjäys on menetelmä, jota käytetään laajalti mikrobiologian ja hematologian laboratorioissa solurakenteiden visualisointiin ja taudinaiheuttajien havaitsemiseen. Gustav Giemsan vuonna 1902 kehittämä menetelmä perustuu emäksisten ja happamien väriaineiden affiniteettiin eri solukomponentteja kohtaan.
Giemsa-värjäykseen tarvittavia materiaaleja ovat Giemsa-värjäys, kiinnitys- ja värjäynpoistoliuokset, lasilevyt, peitinlasit ja mikroskooppi. Giemsa-värjäys on metyleenisinisen, eosiinin ja glyseriinin seos, ja sitä käytetään solujen tuma- ja sytoplasmarakenteiden värjäämiseen.
Giemsa-värjäystekniikassa solut kiinnitetään lasilevylle, minkä jälkeen niitä värjätään Giemsa-värillä tietyn ajan. Värjäyksen jälkeen solut pestään tislatulla vedellä ja niistä poistetaan värinpoisto ylimääräisen värin poistamiseksi. Lopuksi lasilevyt kuivataan ja niitä tarkastellaan mikroskoopilla.
Giemsa-värjäyksen pääasiallisia käyttötarkoituksia ovat veren välityksellä leviävien loisten, kuten Plasmodium spp.:n, tunnistaminen ja verisolujen erilaistuminen perifeerisen veren sivelynäytteissä. Lisäksi tätä menetelmää käytetään laajalti bakteerien, virusten ja muiden patogeenien tunnistamiseen kliinisistä näytteistä.
Sen toiminta perustuu emäksisten ja happamien väriaineiden affiniteettiin eri solukomponenttien kanssa, mikä tarjoaa selkeitä ja yksityiskohtaisia kuvia mikroskoopilla.
Ymmärrä patologisen anatomian menetelmä Giemsa-värjäyksellä kliinistä analyysiä varten.
Giemsa-värjäys on anatomisessa patologiassa käytetty tekniikka kudosnäytteiden kliiniseen analyysiin. Saksalaisen tiedemiehen Gustav Giemsan kehittämää tätä värjäystä käytetään laajalti, koska se pystyy korostamaan erilaisia solukomponentteja, kuten tumia, kromosomeja ja loisia.
Giemsa-värjäykseen tarvitaan useita materiaaleja, kuten Giemsa-värjäystä, denaturoitua spriitä, suolaliuosta ja lasilevyjä. Toimenpiteeseen kuuluu näytteen kiinnittäminen denaturoituun spriihin, Giemsa-värjäyksen levittäminen ja peseminen suolaliuoksella. Värjäyksen jälkeen näytteitä tarkastellaan mikroskoopilla analysointia varten.
Giemsa-värjäystä käytetään laajalti anatomisen patologian laboratorioissa erilaisten patologioiden, kuten loisinfektioiden, leukemian ja autoimmuunisairauksien, tunnistamiseen. Tekniikka mahdollistaa solurakenteiden yksityiskohtaisen analysoinnin, mikä helpottaa kliinistä diagnoosia ja hoidon seurantaa.
Sen käyttö on välttämätöntä erilaisten sairauksien diagnosoinnissa ja hoidossa, mikä tekee siitä korvaamattoman tekniikan terveydenhuollon ammattilaisille.
Verinäytteen värjäämiseen käytetyn väriaineen tunnistaminen.
Giemsa-värjäys on yleinen menetelmä, jota käytetään erityyppisten verisolujen havaitsemiseen verinäytteessä. Tässä prosessissa käytetty pääasiallinen väriaine on Giemsa-tahra, joka on metyleenisinisen, eosiinin ja azure B:n seos. Tämä väriaine on erityisen tehokas rakenteiden, kuten solutumien, kromosomien ja sytoplasmisten sulkeumien, värjäämisessä.
Giemsa-tahra: perusta, materiaalit, tekniikka ja käyttötarkoitukset
O Giemsa-tahra on kliinisten näytteiden värjäysmenetelmä, joka perustuu happamien ja emäksisten väriaineiden seokseen. Sen luominen sai inspiraationsa Romanowskyn työstä, jossa saksalainen kemisti ja bakteriologi Gustav Giemsa hioi sen täydelliseksi lisäämällä glyserolia yhdisteiden stabiloimiseksi.
Romanowskyn alkuperäiseen tekniikkaan tehdyt muutokset mahdollistivat mikroskooppisten havaintojen huomattavan parantamisen; siksi tekniikka nimettiin Giemsa-värjäykseksi.
Koska se on yksinkertainen, erittäin toimiva ja taloudellinen tekniikka, sitä käytetään tällä hetkellä laajalti kliinisessä laboratoriossa hematologisiin irtosolunäytteisiin, luuydinnäytteisiin ja kudosleikkeisiin.
Giemsa-värjäystekniikka on erittäin hyödyllinen sytologisissa tutkimuksissa, koska se mahdollistaa tiettyjen solurakenteiden havaitsemisen. Tämä tekniikka värjää solujen sytoplasman, tumat, nukleolit, vakuolit ja jyväset, jolloin voidaan erottaa hienoja kromatiinijäämiä.
Lisäksi voidaan havaita merkittäviä muutoksia tuman koossa, muodossa tai värissä, jolloin on mahdollista visualisoida tuma-sytoplasma-suhteen menetys.
Toisaalta se mahdollistaa luuytimen ja ääreisveren epäkypsien solujen tunnistamisen, mikä on tärkeää vakavien sairauksien, kuten leukemian, diagnosoinnissa. Se mahdollistaa myös hemoparasiittien, solunulkoisten ja solunsisäisten bakteerien, sienten ja muiden patogeenien havaitsemisen.
Sytogenetiikassa sitä käytetään laajalti, koska sillä voidaan tutkia solujen mitoosia.
Giemsa-tahrameikkivoide
Romanowsky-tyyppisissä värjäyksissä käytetään happamien ja emäksisten väriaineiden kontrastia emäksisten ja happamien rakenteiden värjäämiseen. Kuten voidaan nähdä, happamilla väriaineilla on affiniteetti emäksisten rakenteiden värjäämiseen ja päinvastoin.
Käytetty perusväriaine on metyleenisini ja sen hapettuneet johdannaiset (Azure A ja Azure B), kun taas hapan väriaine on eosiini.
Solujen happamat rakenteet ovat muun muassa nukleiinihappoja, segmentoituneita basofiilirakeita, joten ne värjätään metyleenisinellä.
Samassa mielessä solujen perusrakenteet ovat hemoglobiini ja jotkut rakeet, kuten segmentoituneiden eosinofiilien sisältämät rakeet; Nämä värjätään eosiinilla.
Toisaalta, koska metyleenisini ja taivaansininen ovat metakromaattisia väriaineita, ne voivat antaa vaihtelevan sävyn eri rakenteille niiden polyanionivarauksen mukaan.
Näin emäksisten ja happamien väriaineiden strateginen yhdistelmä voi kehittää laajan värispektrin kunkin rakenteen biokemiallisten ominaisuuksien mukaan, aina vaaleansinisestä, tummansiniseen, liilaan ja violettiin happamien rakenteiden tapauksessa.
Vaikka eosiinin tarjoama väri on vakaampi, se tuottaa värejä punertavan oranssin ja lohen välillä.
Materiaalit
Varastoliuoksen valmistusmateriaalit
Kantaliuoksen valmistamiseksi punnitaan 600 mg Giemsa-jauheväriä, mitataan 500 ml asetonitonta metanolia ja 50 ml neutraalia glyseriiniä.
Kantaliuoksen valmistusmenetelmä
Laita punnittu Giemsa-jauhe mortteliin. Jos siinä on kokkareita, ne tulee jauhaa hienoksi. Lisää sitten reilu määrä mitattua glyseriiniä ja sekoita huolellisesti. Kaada saatu seos erittäin puhtaaseen meripihkanväriseen pulloon.
Jäljelle jäänyt glyseriini lisätään laastiin. Sekoita uudelleen, jotta laastin seiniin tarttunut väriaine poistuu, ja kaada seos sitten samaan pulloon.
Pullo peitetään ja kuljetetaan 2 tuntia vesihauteessa 55 °C:ssa. Sekoita seosta kevyesti vesihauteessa puolen tunnin välein.
Seoksen annetaan sitten jäähtyä ennen alkoholin lisäämistä. Osa mitatusta alkoholista lisätään ensin laastiin jäljellä olevan väriaineen huuhtomiseksi pois, ja sitten seos lisätään seokseen yhdessä jäljellä olevan alkoholin kanssa.
Tämän valmisteen tulisi antaa kypsyä vähintään kaksi viikkoa. Emäliuokseen käytetty osa tulisi suodattaa.
Valmisteen kontaminaation välttämiseksi on suositeltavaa siirtää jatkuvasti käytössä oleva osa pieneen meripihkanväriseen pipetillä varustettuun pulloon. Täytä pullo uudelleen aina, kun reagenssi on loppunut.
Puskuriliuoksen valmistusmateriaalit
Toisaalta puskuriliuos, jonka pH on 7,2, valmistetaan seuraavasti:
6,77 g natriumfosfaattia (vedetöntä) (punnittuna NaHPOXNUMX:ksi 4 ), 2,59 g kaliumdivetyfosfaattia (KH 2 PO 4 ) ja tislattua vettä enintään 1000 ml:aan asti.
Lopullinen väriaineen valmistus
Lopullisen värjäysliuoksen valmistamiseksi mittaa 2 ml suodatettua kantaliuosta ja sekoita se 6 ml:aan puskuriliuosta. Seosta ravistetaan.
Yksi olennainen huomioon otettava seikka on, että värinvalmistustekniikat voivat vaihdella kaupallisen asennuksen mukaan.
Värittämiseen tarvittavat lisämateriaalit
Kuvattujen materiaalien lisäksi on oltava värillisiä siltoja, vedellä täytettyjä t-paitoja tai tamponi vaatteiden pesuun, esineillä tai peitteillä varustettuja lakanoita, ajastin värjäysajan säätämiseen ja paperin tai jonkin kuivumista varten tarkoitetun materiaalin (sideharso tai puuvilla) imukykyiseksi pyyhkimiseksi.
Tekniikka
Väritysprosessi
1) Ennen värjäystä näyte on levitettävä puhtaalle lasilevylle.
Näytteet voivat olla verta, luuydintä, histologisia kudosleikkeitä tai kohdunkaulan ja emättimen näytteitä. On suositeltavaa, että tahnat ovat ohuita ja niiden annetaan kuivua 1–2 tuntia ennen värjäystä.
2) Värityssillalle asetetaan kaikki väritetyt lehdet. Se toimii aina samassa järjestyksessä, ja jokainen lehti on selkeästi merkitty.
3) Tiputa muutama tippa 100-prosenttista metanolia (metanolia) näytteen pinnalle ja anna sen vaikuttaa 3–5 minuuttia, jotta näyte kiinnittyy ja kuivuu.
4) Hävitä lehdessä oleva metanoli ja anna sen kuivua ilmassa.
5) Kun lehti on kuiva, lisää lopuksi värjäysliuosta pipetillä, kunnes koko lehti on peittynyt. Anna vaikuttaa 15 minuuttia. Jotkut kirjoittajat suosittelevat jopa 25 minuuttia. Se riippuu myymälästä.
6) Valuta värjäysaine ja pese tahra tislatulla vedellä tai puskuriliuoksella kohdan 7.2 mukaisesti.
7) Anna lehtien kuivua ilmassa imukykyisellä paperilla. Ne on asetettu pystysuoraan tuen avulla.
8) Pyyhi lasin takaosa alkoholiin kastetulla sideharsolla tai vanupuikolla mahdollisen väriaineen poistamiseksi.
apuohjelmia
Giemsa-värjäystekniikkaa käytetään useilla aloilla, mukaan lukien hematologia, mykologia, bakteriologia, parasitologia, sytologia ja sytogenetiikka.
Hematologia
Tämä on tämän värjäyksen yleisin käyttötarkoitus. Sen avulla voidaan tunnistaa jokainen luuytimessä tai ääreisverinäytteissä oleva solu. Kunkin sarjan solujen lukumäärän arvioinnin lisäksi sillä voidaan havaita leukosytoosia tai leukopeniaa, trombosytopeniaa jne.
Koska se on herkkä tunnistamaan kypsymättömät solut, se on hyödyllinen akuutin tai kroonisen leukemian diagnosoinnissa. Se voi myös diagnosoida anemiaa, kuten sirppisoluanemiaa.
Mykologia
Tällä alueella on yleistä käyttää Histoplasma capsulatum (solunsisäinen dimorfinen sieni) kudosnäytteissä.
Bakteriologia
Giemsalla värjätyissä hematologisissa irtosolunäytteissä on mahdollista havaita Borrelia-laji potilailla, joilla on relapsoiva kuume. Spirokeetteja havaitaan runsaasti punasoluissa näytteissä, jotka on kerätty kuumeen huipussa.
On myös mahdollista visualisoida solunsisäisiä bakteereja muodossa Rickettsia-laji e Chlamydia trachomatis tartunnan saaneissa soluissa.
Parasitologia
Parasitologian alalla Giemsa-värjäys on mahdollistanut loistautien, kuten malarian, Chagasin taudin ja leishmaniaasin, diagnosoinnin.
Kahdessa ensimmäisessä loisessa Plasmodium-laji e Trypanosoma cruzi vastaavasti, voidaan nähdä tartunnan saaneiden potilaiden ääreisveressä ja niitä voi esiintyä eri vaiheissa taudin vaiheesta riippuen.
Loisten etsinnän parantamiseksi verestä on suositeltavaa käyttää Giemsa-värjäystä sekoitettuna May-Grünwald-värjäykseen.
Samoin ihon leishmaniaasi voidaan diagnosoida arvioimalla Giemsa-värjättyjä ihobiopsianäytteitä, joista loinen löytyy.
Citologia
Giemsa-värjäystä käytetään myös endoservikaalisten näytteiden sytologiseen tutkimukseen, vaikka se ei olekaan tähän tarkoitukseen yleisimmin käytetty tekniikka.
Resurssirajoitusten yhteydessä sitä voidaan kuitenkin käyttää, ja se tarjoaa samanlaisen toiminnallisuuden kuin Papa-koe ja halvemmalla. Se vaatii kuitenkin tutkijalta asiantuntemusta.
Sytogenetiikka
Giemsa-värjäyksen keskeinen ominaisuus on sen kyky sitoutua voimakkaasti adeniini- ja tymiinipitoisiin DNA-alueisiin. Tämä mahdollistaa DNA:n visualisoinnin solumitoosin aikana eri kondensaatiotiloissa.
Nämä tutkimukset ovat välttämättömiä kromaattisten poikkeavuuksien, kuten kromosomien eri alueiden duplikaatioiden, deleetioiden tai translokaatioiden, havaitsemiseksi.
Tutkimus, joka osoittaa Giemsa-värjäyksen tehokkuuden
Cannova ym. (2016) vertailivat kolmea värjäystekniikkaa ihon leishmaniaasin diagnosoinnissa.
Tätä tarkoitusta varten käytettiin koe-eläimestä saatuja näytteitä ( Mesocristus auratus) kokeellisesti rokotettu Leishmanioilla.
Kirjoittajat osoittivat, että Giemsa-värjäys oli Pap-mart®- ja Gaffney-värjäyksiä parempi. Siksi he pitivät Giemsa-värjäystä ihanteellisena ihon leishmaniaasin diagnosointiin.
Kirjoittajien erinomaiset tulokset johtuvat siitä, että Giemsa-seoksen muodostavien väriaineiden yhdistelmällä on tarvittavat olosuhteet suotuisan kontrastin luomiseksi, mikä mahdollistaa amastigotien rakenteiden selkeän erottamisen sekä solunsisäisesti että solunulkoisesti.
Myös muut tekniikat (Pap-mart® ja Gaffney) tekivät tämän, mutta heikommin ja siksi vaikeammin visualisoitavissa. Tästä syystä Giemsa-värjäystä suositellaan leishmaniaasin parasitologiseen diagnosointiin.
Samoin Ramírez et al. (1994) arvioivat tutkimuksessaan Giemsa- ja Lendrum-värjäysten validiteettia sidekalvon irtosolunäytteissä tautien tunnistamisessa. Chlamydia trachomatis.
Kirjoittajat totesivat, että Giemsa- ja Ledrum-värjäyksillä on sama spesifisyys, mutta Giemsa osoittautui herkemmäksi.
Tämä selittää, miksi Giemsa-värjäystä käytetään tällä hetkellä yleisimmin klamydiainfektioiden diagnosoinnissa, erityisesti resurssiköyhissä ympäristöissä.
Suosituksia hyviin värjäysmenetelmiin
Lehtiä ei pidä kuivata liian nopeasti. Sinun tulisi odottaa sopivan ajan, jotta ne kuivuvat ilmassa. Noin 2 tuntia.
Parhaan tuloksen saavuttamiseksi värjää heti kahden tunnin kuluttua.
Jotta tahrat kovettuvat ja sekoittuvat paremmin, näyte tulee levittää arkin poikki ohuena, tasaisena kerroksena.
Edullisin verinäyte on kapillaariveri, koska näyte otetaan suoraan veripisarasta eikä näyte siksi sisällä lisäaineita, mikä edistää solurakenteiden säilymistä.
Jos kuitenkin käytetään laskimoverta, antikoagulanttina tulisi käyttää EDTA:ta eikä hepariinia, koska jälkimmäinen yleensä aiheuttaa soluille muodonmuutoksia.
Yleisiä virheitä Giemsa-värjäyksessä
Tätä väritystekniikkaa käytettäessä voi tehdä virheitä. Nämä ilmenevät rakenteen sävyn äkillisinä muutoksina.
Erittäin sininen väritys
Se voi johtua:
- Hyvin paksut tahrat
- Värjäysajan ylittäminen
- Pese riittämättömästi.
- Reagenssien käyttö, joiden pH on selvästi neutraalia (emäksistä) korkeampi.
Näissä olosuhteissa seuraavien rakenteiden värit vääristyvät, niin että punasolut muuttuvat lohenpunaisten sijaan vihreiksi, eosinofiilirakeet, joiden pitäisi värjäytyä tiilenpunaisiksi, muuttuvat sinertäviksi tai harmaiksi ja niin edelleen. poikkeama tavallisista sävyistä.
Liian vaaleanpunainen väri
Se voi johtua:
- Riittämätön värjäysaika.
- Pitkäaikainen tai liiallinen pesu.
- Ei kovin kuiva
- Hyvin happamien reagenssien käyttö.
Tässä nimenomaisessa tapauksessa normaalisti sinisiksi sävytetyt rakenteet ovat tuskin näkyvissä, kun taas vaaleanpunaisiksi sävytetyt rakenteet ovat hyvin liioiteltuja.
Esimerkki: Punasolut näyttävät kirkkaan punaisilta tai tumman oransseilta, tumakromatiini näyttää vaaleanpunaiselta ja eosinofiilirakeet värjäytyvät kirkkaan punaisiksi.
Saostumien esiintyminen tahrassa
Syyt voivat olla:
- Käytä likaisia tai huonosti pestyjä lakanoita.
- Älä anna tahran kuivua hyvin.
- Jätä kiinnitysliuos pitkäksi aikaa.
- Väärä pesu värjäyksen lopussa.
- Käytetyn väriaineen suodatus on riittämätön tai sitä ei ole suodatettu lainkaan.
Morfologisten artefaktien esiintyminen
Morfologisia artefakteja voi esiintyä värjäyksissä, mikä vaikeuttaa rakenteiden visualisointia ja tulkintaa. Tämä johtuu seuraavista syistä:
- Käytetyn antikoagulantin tyyppi, kuten hepariini.
- Likaisten, vaurioituneiden tai öljyisten lehtien käyttö.
Tallennustila
Valmistuksen jälkeen väriaine tulee säilyttää huoneenlämmössä (15–25 °C) väriaineen saostumisen estämiseksi. Se tulee säilyttää tiiviisti suljetussa meripihkanvärisessä astiassa.
Viitteet
- Cannova D, Brito E ja Simons M. Värjäystekniikoiden arviointi ihon leishmaniaasin diagnosoinnissa. Hei . 2016; 20 (2): 24-29.
- PanReac Applichem Reagenssit ITW. Giemsa-värjäys. Versio 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Espanja.
- Clark G. Värjäysmenetelmät (1981), 4. osa. Williams & Willkins.
- Sovellettu kliininen kemia. Giemsa-värjäys diagnostiikkaan vitro Jakelija: cromakit.es
- Ramírez I, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F ja Grazioso C. Giemsa- ja Lendrum-värjäysten validiteetti sidekalvon irtosolunäytteissä tautien tunnistamisessa. Chlamydia trachomatis. Sanit Panam -kulho. 1994; 116 (3): 212 - 216.
- Casas-Rincón G. Yleinen mykologia. 1994. 2. painos. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela, Caracas
- "Giemsa-värjäys." Wikipedia, Vapaa tietosanakirja . 1. syyskuuta 2017, klo 01:02 UTC. 6. joulukuuta 2018, fi.wikipedia.org.