Izraz "MIO medij" odnosi se na medij za uzgoj poznat kao Minimalni mineralni medij, koji se temelji na sastavu esencijalnih hranjivih tvari za rast mikroorganizama u laboratoriju. Ovaj medij je razvijen kako bi osigurao idealne uvjete za rast i razvoj bakterija, gljivica i drugih mikroorganizama u znanstvenim studijama. U ovom članku raspravljat ćemo o osnovama, pripremi i glavnim primjenama MIO medija u mikrobiologiji.
Čemu služi Mio medij u kuhanju i pripremi pića?
Mio medium je svestran sastojak koji se može koristiti na razne načine u kuhanju i pripremi pića. Mio medium, stvoren 2011. godine od strane tvrtke Kraft Foods, je tekući koncentrat koji jelima i pićima dodaje okus i boju.
U kuhanju se Mio umak može koristiti za dodavanje posebnog dodira marinadama, umacima, juhama, pa čak i desertima. Njegova praktičnost i svestranost čine ga neizostavnim predmetom u kuhinji kuhara i ljubitelja hrane.
U pripremi napitaka, Mio se široko koristi za aromatiziranje vode, sokova, čajeva, pa čak i alkoholnih pića. Sa samo nekoliko kapi, možete jednostavno piće pretvoriti u jedinstveno senzorno iskustvo.
Mio se također može koristiti za stvaranje kreativnih i ukusnih slastica, poput sladoleda, želatina i mousseva. Njegova raznolikost okusa omogućuje vam istraživanje različitih kombinacija i iznenađenje vašeg nepca.
Ukratko, Mio je saveznik kuhara i barmena u stvaranju ukusnih i kreativnih jela i pića. Njegova praktičnost i svestranost čine ga neizostavnim sastojkom u svakoj kuhinji ili baru. Isprobajte ga i otkrijte beskrajne mogućnosti koje Mio može ponuditi!
Upotreba indolnog testa u identifikaciji bakterija: postupak i važnost u mikrobiologiji.
Indolni test je metoda koja se koristi za identifikaciju bakterija na temelju proizvodnje enzima indola. Ovaj enzim je sposoban metabolizirati triptofan u indol, octenu kiselinu i amonijak. Tehnika se provodi u specifičnom mediju za kulturu, kao što je indol, ornitin i medij za pokretljivost (MIO), koji se koristi za razlikovanje gram-negativnih bakterija, poput E. coli, od drugih vrsta.
Za provođenje indolnog testa, bakterijska kultura se inokulira u MIO medij i inkubira na odgovarajućoj temperaturi. Nakon inkubacije dodaje se Kovacsov reagens, koji reagira s indolom koji proizvode bakterije, tvoreći ružičasti kompleks. Prisutnost ove boje ukazuje na proizvodnju indola i, posljedično, na prisutnost enzima odgovornog za njegovu proizvodnju.
Indolni test je ključan u mikrobiologiji jer omogućuje identifikaciju bakterija na temelju njihovih biokemijskih karakteristika. Nadalje, to je brza i učinkovita metoda za razlikovanje bakterijskih vrsta, što pomaže u dijagnosticiranju infekcija i odabiru odgovarajućeg liječenja.
Korak-po-korak vodič za učinkovito i točno izvođenje testa indola.
Za učinkovito i točno provođenje testa indola, slijedite ove korake:
Korak 1: Pripremite MIO medij prema uputama proizvođača. Obavezno se pridržavajte omjera i uvjeta sterilizacije.
Korak 2: Nakon pripreme MIO medija, dodajte uzorak koji želite testirati u epruvetu. Provjerite je li uzorak dobro promiješan.
Korak 3: Inkubirajte epruvetu pod optimalnim temperaturnim i vremenskim uvjetima prema preporuci proizvođača MIO medija.
Korak 4: Nakon inkubacije, dodajte nekoliko kapi indolnog reagensa u epruvetu. Pažljivo promatrajte svaku promjenu boje ili stvaranje prstena na površini medija.
Korak 5: Usporedite dobivene rezultate s tablicom za interpretaciju rezultata indolnog testa. Rezultate zabilježite točno i detaljno.
Indolni test se široko koristi u mikrobiologiji za identifikaciju bakterija sposobnih za proizvodnju indola iz aminokiseline triptofana. To je učinkovita i točna metoda za razlikovanje različitih vrsta bakterija na temelju njihovih metaboličkih karakteristika.
Indol u mikrobiologiji: definicija i važnost u identifikaciji bakterija.
Indol u mikrobiologiji: je organski spoj koji neke bakterije mogu proizvesti tijekom metabolizma aminokiselina. Sposobnost bakterije da proizvodi indol može biti važan kriterij u njezinoj identifikaciji i klasifikaciji.
Važnost u identifikaciji bakterija: Proizvodnja indola od strane bakterija može se otkriti specifičnim biokemijskim testovima, kao što je Kovacsov test. Prisutnost ili odsutnost indola može pomoći u razlikovanju različitih bakterijskih rodova i vrsta, što pomaže u mikrobiološkoj identifikaciji i klasifikaciji.
MIO medij: osnova, priprema i upotreba.
O Pola milijuna (Indol-ornitin medij) je medij za kulturu koji se koristi za otkrivanje proizvodnje indola i sposobnosti bakterije da metabolizira ornitin. Ovaj medij sadrži specifične hranjive tvari koje potiču rast indol-pozitivnih bakterija.
Priprema MIO medija: Priprema MIO medija uključuje kombiniranje sastojaka poput peptona, natrijevog klorida, ekstrakta kvasca, agara i drugih komponenti koje osiguravaju hranjive tvari potrebne za rast bakterija. Medij se zatim sterilizira i stvrdnjava u Petrijevim zdjelicama za upotrebu u testovima identifikacije bakterija.
Upotreba MIO medija: MIO medij se često koristi u mikrobiološkim laboratorijima za identifikaciju bakterija na temelju njihove proizvodnje indola i metabolizma ornitina. Promatrajući rezultate testova provedenih s MIO medijem, mikrobiolozi mogu klasificirati i razlikovati bakterije na temelju njihovih biokemijskih karakteristika.
MIO medij: osnova, priprema i upotreba
O pola milijuna je biokemijski test koji se koristi za identifikaciju bakterijskih vrsta koje pripadaju porodici Enterobacteriaceae. Visoko je hranjiv i sastoji se od glukoze, ekstrakta kvasca, peptona, tripteina, L-ornitin hidroklorida, bromokrezol purpurne boje i agara.
Značenje akronima (MIO) opisuje svaki od parametara koji se mogu promatrati u ovom mediju: pokretljivost, indol i ornitin. Pokretljivost je sposobnost mikroorganizma da se kreće uz prisutnost flagela. Da bi se ovo svojstvo promatralo, konzistencija medija mora biti polukruta, tako da pripravak sadrži manje agara.
Proizvodnja indola pokazuje prisutnost enzima triptofanaze, koji djeluje na aminokiselinu triptofan. Potrebno je koristiti reagens za otkrivanje kako bi proizvodnja indola bila vidljiva.
Konačno, ornitin određuje je li bakterija sposobna dekarboksilirati aminokiselinu, odnosno ima li enzim ornitin dekarboksilazu.
Fundacao
Pepton, ekstrakt kvasca i triptin
Ovi elementi doprinose nutritivnoj vrijednosti ovog medija. Služe kao izvor hranjivih tvari i esencijalnih aminokiselina za rast bakterija.
Nadalje, triptein je izvor triptofana što pokazuje prisutnost enzima triptofanaze, koji razgrađuje triptofan reduktivnom deaminacijom koja oslobađa indol, piruvinsku kiselinu, amonijak i energiju.
Indol je bezbojan, pa se njegova prisutnost otkriva dodatkom pet kapi Ehrlichovog ili Kovacsovog reagensa, koji oba sadrže p-dimetilaminobenzaldehid.
Aldehidna skupina ovog spoja reagira s indolom, stvarajući fuksija crveni produkt u obliku prstena na površini agara.
Svaki trag boje treba smatrati pozitivnim testom. Test treba odmah očitati; s vremenom boja blijedi.
S druge strane, ovaj test treba otkriti nakon bilježenja rezultata pokretljivosti i dekarboksilacije ornitina.
Tumačenje
Pozitivan test: stvaranje fuksija crvenog prstena dodavanjem kapi Kovacsovog reagensa.
Negativan test: nema stvaranja prstenova.
Pokretljivost
Sposobnost bakterija za kretanje bit će dokazana ako se primijeti mutno okruženje ili ako se oko početne inokulacije širi debela linija rasta.
Negativan test pokretljivosti bit će dokazan opažanjem tanke linije rasta, a sve oko nje bit će bez rasta.
Važno je očitati pokretljivost prije razvijanja indola, budući da agregat reagensa zamućuje cijeli medij.
Kod pokretnih, ali spororastućih bakterija, teško je dokazati njihovu pokretljivost ovim medijem. U tom slučaju preporučuje se korištenje drugih testova ili metoda, kao što su medij za provjeru pokretljivosti ili metoda s kapljicom.
Glukoza
Glukoza je fermentabilni ugljikohidrat koji, osim što osigurava energiju, zakiseljuje medij, što je nužan uvjet za dekarboksilaciju aminokiseline ornitina.
Fermentacija glukoze mora se uvijek događati, na temelju načela da sve bakterije koje pripadaju porodici Enterobacteriaceae fermentiraju glukozu.
L-ornitin
Ako bakterije proizvode enzim ornitin dekarboksilazu, on može djelovati čim se medij zakiseli fermentacijom glukoze.
Enzim ornitin dekarboksilaza djeluje na karboksilnu skupinu aminokiseline, proizvodeći amin nazvan putrezin, koji ponovno alkalizira medij.
Ovaj test treba očitati nakon 24 sata inkubacije, jer ako ga pokušate očitati prije, možete pogrešno protumačiti test s lažno negativnim rezultatom.
Imajte na umu da je prva reakcija koja se događa fermentacija glukoze, pa medij u početku postaje žut (prvih 10 do 12 sati). Ako se kasnije dogodi dekarboksilacija ornitina, medij će postati ljubičast.
Važno je interpretirati test dekarboksilacije ornitina prije otkrivanja indola, jer agregat Kovacsovog reagensa mijenja boju medija.
Tumačenje
Negativan test: žuta ili srednje žuta pozadina.
Pozitivan test: napola potpuno ljubičasta.
pH indikator
U ovom slučaju koristi se bromokrezol ljubičasta; ona je odgovorna za detekciju promjena pH vrijednosti medija. Kada se zakiseli, indikator postaje žut, a kada se zaluži, postaje ljubičast.
Tehnika sjetve i razvoja
Za sijanje MIO medija koristi se igla ili ravna petlja i njome se sakuplja dio kolonije koji se proučava.
Duboka punkcija se pravi u srednjoj prednjoj donjoj šupljoj veni u ravnoj liniji. Nije preporučljivo izvoditi dvostruku punkciju, jer može dati lažni dojam pokretljivosti ako se punkcije ne izvode na istom mjestu.
Inkubirajte 24 do 48 sati na 37°C aerobno. Promatrajte rezultate ovim redoslijedom: pokretljivost, dekarboksilacija ornitina i konačno otkrivanje indola.
Preporučljivo je aseptično ukloniti 2 ml medija, prenijeti ga u sterilnu epruvetu i provesti indolni test, tako da se, ako je negativan, ostatak originalne epruvete može inkubirati još 24 sata kako bi se ponovno otkrio indol.
Razvijanje indola provodi se na sljedeći način: u MIO medij doda se 3 do 5 kapi Kovacsovog reagensa i snažno protrese. Promatra se pojavljuje li se fuksija crveni prsten ili ne.
Priprema
Polovica moje
Odvažite 31 g MIO medija i otopite u jednoj litri destilirane vode.
Zagrijavajte dok smjesa ne zavrije jednu minutu, neprestano miješajući dok se agar potpuno ne otopi. Ulijte 4 ml medija u epruvete od 13/100 s pamučnim čepovima.
Sterilizirajte u autoklavu na 121°C tijekom 15 minuta. Izvadite iz autoklava i ostavite da odstoji na rešetki kako bi se formirao polučvrsti blok.
Čuvati u hladnjaku na 2-8°C. Ostaviti da se ohladi prije sijanja bakterijskog soja.
Boja dehidriranog medija je bež, a boja pripremljenog medija je blago opalescentno ljubičasta.
Konačni pH pripremljenog medija je 6,5 ± 0,2
Medij postaje žut pri kiselom pH, a ljubičast pri alkalnom pH.
Kovacsov reagens (razvijač indola za testiranje)
Ovaj reagens se priprema na sljedeći način:
Mjeri se 150 ml amilnog, izoamilnog ili butilnog alkohola (bilo koji od ta tri). Otopi se 10 g p-dimetilaminobenzaldehida. Nakon toga se polako dodaje 50 ml koncentrirane klorovodične kiseline.
Pripremljeni reagens je bezbojan ili svijetložut. Treba ga čuvati u jantarnoj boci i držati u hladnjaku. Tamnosmeđa boja ukazuje na kvarenje.
Kovacsov reagens može se zamijeniti i Ehrlichovim reagensom. Potonji, budući da je osjetljiviji, preferira se za otkrivanje indola u bakterijama koje ga proizvode u minimalnim količinama, kao što su neki nefermentativni gram-negativni bacili i neki anaerobi.
Koristiti
Ovaj medij je test koji nadopunjuje niz biokemijskih testova za identifikaciju bakterija koje pripadaju porodici Enterobacteriaceae.
Podaci o dekarboksilaciji ornitina služe za razlikovanje Šigela sonnei, što je pozitivno, od Shigella boydii, Shigella flexneri i S. dysenterieae, koji su negativni.
Također razlikuje rod Klebsiella, koji je negativan, od roda Enterobacter, gdje je većina njegovih vrsta pozitivna.
Kontrola kvalitete
Svaki put kada se pripremi serija MIO medija, može se provesti kontrolni test. U tu svrhu koriste se poznati ili certificirani sojevi za promatranje ponašanja medija.
Sojevi koji se mogu koristiti su Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes e Proteus mirabilis.
Očekivani rezultati su E. coli i M. morganii. Daju M: +, I: + i O: +.
Klebsiella pneumoniae sve je negativno (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis e Enterobacter aerogenes navedite M: + I: – i O: +.
Reference
- Mac Faddin J. (2003). Biokemijski testovi za identifikaciju bakterija od kliničkog značaja. 3. izd. Panamericana Publishing House. Buenos Aires, Argentina
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Baileyjeva i Scottova mikrobiološka dijagnoza. 12. izd. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiološka dijagnoza, 5. izd. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Britanski laboratoriji. MIO Medio 2015. Dostupno na: britanialab.com
- BD Laboratories BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Dostupno na: bd.com
- Valtek Laboratories MIO medij Pokretljivost, indol, ornitin. 2010. Dostupno na: andinamedica.com