MRS agaras yra selektyvi ir diferencinė kultūros terpė, naudojama Lactobacillus grupės pieno rūgšties bakterijoms išskirti ir kultivuoti. Ją 1960 m. sukūrė De Manas, Rogosa ir Sharpe'as, ir ji susideda iš specifinės maistinės medžiagos bazės, kuri skatina šių bakterijų augimą, palyginti su kitais mikroorganizmais. Jos paruošimas apima miltelių ištirpinimą distiliuotame vandenyje ir sterilizavimą autoklave. MRS agaras plačiai naudojamas maisto mikrobiologijoje, pieno produktuose, fermentacijoje ir biochemijoje pramoninės ir klinikinės svarbos pieno rūgšties bakterijoms identifikuoti ir kiekybiškai įvertinti.
Atkreipkite ponios Merck dėmesį šiais greitais ir veiksmingais patarimais.
Jei norite atkreipti ponios Merck dėmesį, esate tinkamoje vietoje. Pasinaudodami šiais greitais ir veiksmingais patarimais, galėsite efektyviai atkreipti jos dėmesį. Vienas iš būdų tai padaryti – naudoti MRS agarą – galingą įrankį, kuris gali padėti jums išsiskirti.
MRS agaras: pagrindas, paruošimas ir panaudojimas
MRS agaras yra selektyvi kultūros terpė, naudojama Lactobacillus grupės pieno rūgšties bakterijų išskyrimui ir kultivavimui. Ją 1960 m. sukūrė de Manas, Rogosa ir Sharpe'as, ir nuo to laiko ji plačiai naudojama mikrobiologijos laboratorijose.
Norėdami paruošti MRS agarą, turėsite atlikti kelis paprastus veiksmus. Pirmiausia į distiliuotą vandenį įberkite reikiamą MRS agaro miltelių kiekį ir kaitinkite, kol visiškai ištirps. Tada sterilizuokite kultūros terpę autoklave ir supilkite į Petri lėkšteles, kad sustingtų.
MRS agaras turi platų panaudojimo spektrą, įskaitant pieno rūgšties bakterijų aptikimą ir išskyrimą pieno produktuose, tokiuose kaip sūris ir jogurtas. Jis taip pat gali būti naudojamas žarnyno mikrobiotai ir jos poveikiui žmonių sveikatai tirti.
Dabar, kai žinote daugiau apie MRS agarą ir kaip jį naudoti, esate pasiruošę patraukti ponios Merck dėmesį. Nepamirškite laikytis aukščiau pateiktų patarimų ir jums tikrai pasiseks.
MRS agaro kultūros terpė Lactobacillus auginimui mikrobiologijoje.
MRS agaro kultūros terpė yra selektyvi terpė, naudojama Lactobacillus genties bakterijų auginimui mikrobiologijoje. Ją 1960 m. sukūrė De Manas, Rogosa ir Sharpe'as, iš čia ir kilo akronimas MRS. Ši terpė susideda iš kelių ingredientų, kurie suteikia maistinių medžiagų, reikalingų norimų bakterijų augimui.
Norint paruošti MRS agaro kultūros terpę, ištirpinkite ingredientus distiliuotame vandenyje ir įpilkite agaro, kad terpė sukietėtų. Po sterilizacijos terpę galima inokuliuoti Lactobacillus kultūra ir inkubuoti bakterijų augimui tinkamoje temperatūroje.
MRS agaras yra selektyvi terpė, nes joje yra medžiagų, kurios slopina nepageidaujamų bakterijų augimą, leisdamos augti tik Lactobacillus genties bakterijoms. Tai palengvina šių bakterijų išskyrimą ir identifikavimą mišriame mėginyje.
MRS agaro kultūros terpė yra plačiai naudojama maisto mikrobiologijoje, probiotikuose ir žarnyno sveikatos tyrimuose. Dėl gebėjimo skatinti selektyvų Lactobacillus augimą ši terpė yra būtina tyrimams ir laboratoriniams bandymams, kuriuose dalyvauja šios bakterijos.
MRS kultūros terpė: pagrindai ir taikymas mikrobiologijoje ir biotechnologijoje.
MRS kultūros terpė yra selektyvi ir diferencinė kultūros terpė, naudojama mikrobiologijoje ir biotechnologijose pieno rūgšties bakterijų, ypač Lactobacillus genties, auginimui. Akronimas MRS reiškia „de Man, Rogosa ir Sharpe“ (liet. de Manas, Rogosa ir Sharpe'as) pagerbiant tyrėjus, kurie sukūrė šią terpę septintojo dešimtmečio pradžioje.
MRS kultūros terpė susideda iš pieno rūgšties bakterijų augimą skatinančių maistinių medžiagų, tokių kaip peptonas, mielių ekstraktas, amonio citratas, magnio sulfatas ir kalio fosfatas, derinio. Be to, terpėje yra pH indikatorius, dažniausiai fenolio raudonasis, kuris leidžia atskirti bakterijas, kurios fermentuoja angliavandenius, nuo tų, kurios to nefermentuoja.
MRS kultūros terpės paruošimas apima komponentų ištirpinimą distiliuotame vandenyje, pH sureguliavimą iki maždaug 6,5–6,8 ir sterilizavimą autoklave. Po sterilizavimo terpė sukietėja pridedant agaro, ir tampa MRS agaro kultūros terpe.
MRS agaras plačiai naudojamas mikrobiologijos laboratorijose pieno rūgšties bakterijų išskyrimui ir identifikavimui įvairiuose fermentuotuose produktuose, tokiuose kaip jogurtai, sūriai ir mėsos gaminiai. Be to, MRS kultūros terpė taip pat naudojama biotechnologijų tyrimuose, siekiant gaminti fermentus, organines rūgštis ir kitus pramoninės svarbos junginius.
MRS Microbiology: Mikrobiologinės analizės specialistai, užtikrinantys saugą ir kokybę.
„MRS Microbiologia“ specializuojasi mikrobiologinėje analizėje, užtikrindama produktų saugą ir kokybę. Turėdama aukštos kvalifikacijos specialistus ir modernią įrangą, „MRS Microbiologia“ siūlo aukštos kokybės paslaugas įvairiems pramonės sektoriams.
Viena iš plačiausiai MRS mikrobiologijoje naudojamų kultūros terpių yra MRS agaras. Šią kultūros terpę septintajame dešimtmetyje sukūrė De Manas, Rogosa ir Sharpe'as, ir ji plačiai naudojama pieno rūgšties bakterijų, ypač Lactobacillus genties, išskyrimui ir kultivavimui.
MRS agaro paruošimas yra gana paprastas: miltelius reikia ištirpinti distiliuotame vandenyje ir sterilizuoti autoklave. Terpei sukietėjus, ji yra paruošta mėginiams analizei.
MRS agaras naudojamas įvairiems mikrobiologiniams tyrimams, pavyzdžiui, pieno rūgšties bakterijų skaičiavimui pieno produktuose, fermentacijos kokybei įvertinti ir probiotinėms bakterijoms identifikuoti. Jo specifinė sudėtis skatina norimų bakterijų augimą, todėl tai yra selektyvi ir diferencinė terpė.
Trumpai tariant, MRS agaras yra būtinas įrankis MRS Microbiologia mikrobiologijos specialistams, užtikrinantis tikslią ir patikimą analizę jų klientams. Dėl tvirto pagrindo, paprasto paruošimo ir įvairių panaudojimo būdų MRS agaras yra nepakeičiamas sąjungininkas kontroliuojant mikrobiologinių produktų kokybę.
MRS agaras: pagrindas, paruošimas ir panaudojimas
O Ponia agaras yra selektyvi kietos terpės kultūra, naudojama pieno rūgšties bakterijų, ypač Lactobacillus genties, išskyrimui ir skaičiavimui. Šį agarą 1960 m. tuo pačiu pavadinimu sukūrė Manas, Rogosa ir Sharpe'as, tačiau dėl jo sudėtingumo dažnai vartojama santrumpa MRS.
Jį sudaro baltymų peptonas, mėsos ekstraktas, mielių ekstraktas, gliukozė, sorbitano monoleatas, dikalio fosfatas, natrio acetatas, amonio citratas, magnio sulfatas, mangano sulfatas ir agaras.
Ši sudėtis leidžia gerai vystytis pieno rūgšties bakterijoms iš klinikinių mėginių, tokių kaip išmatos, makšties išskyros, burnos mėginiai ir motinos pienas, taip pat pieno produktai ir mėsa.
Klinikinėse laboratorijose jis nėra įprastai naudojamas, nes pieno rūgšties bakterijos retai dalyvauja patologiniuose procesuose. Tačiau maisto mikrobiologijos srityje MRS agaras naudojamas dažniau.
Kita vertus, šią terpę naudoja kai kurie tyrimų centrai, kurių tikslas – tirti pieno rūgšties bakterijas.
Fundacao
Žmogaus, Rogosos ir Šarpo agaras yra gana sudėtinga sudėtis. Išskaidydami kiekvieno jo komponento funkciją, galima paaiškinti jo logiką.
Baltymas peptonas, mėsos ekstraktas, mielių ekstraktas ir gliukozė yra maistinės medžiagos, kurios suteikia bakterijų augimui reikalingą anglį, azotą, vitaminus ir mineralus. Be to, gliukozė yra universalus energijos šaltinis, naudojamas daugumoje kultūros terpių.
Kita vertus, norint paskatinti pieno rūgšties bakterijų augimą, būtini esminiai kofaktoriai (katijonai) Lactobacillus ir susijusių bakterijų metabolizme; šie junginiai yra natrio, magnio ir mangano druskos.
Panašiai sorbitano monoleatas arba polisorbatas 80 yra svarbus riebalų rūgščių šaltinis, kai absorbuojamas kaip maistinės medžiagos.
Be to, sorbitano monoleatas ir amonio citratas slopina susijusios floros, ypač gramneigiamų bakterijų, vystymąsi, todėl šis agaras yra selektyvus.
Galiausiai, agaras-agaras suteikia terpei tvirtą konsistenciją.
Yra ir kitų „Man Rogosa Sharpe“ agaro variantų; vienas yra papildytas cisteinu (MRSc), labai naudingas bifidobakterijoms ir kitiems mikroorganizmams išskirti. Kita vertus, yra MRS terpė, papildyta neomicinu, paromomicinu, nalidikso rūgštimi ir ličio chloridu, ypač skirta selektyviam bifidobakterijų skaičiavimui pieno produktuose.
Paruošimas
Pasverkite 68,25 gramo dehidratuotos terpės ir ištirpinkite viename litre distiliuoto vandens. Palaikykite 5 minutes. Kad visiškai ištirptų, kaitinkite ant vidutinės ugnies nuolat maišydami ir virkite 1–2 minutes. Sterilizuokite autoklave 121 °C temperatūroje 15 minučių.
Išėmus iš autoklavo, leiskite jam pastovėti kelias minutes ir dar karštą paskirstykite į sterilias Petri lėkšteles.
Leiskite plokštelėms sukietėti ir apverskite jas, sudėliokite trombocitus ir laikykite šaldytuve iki naudojimo. Prieš naudodami lėkštes, leiskite joms sušilti iki kambario temperatūros.
Terpės pH turėtų būti 6,4 ± 0,2. Kai kurios komercinės įmonės rekomenduoja pH nuo 5,5 iki 5,9.
Dehidratuota terpė yra smėlio spalvos, o paruošta – tamsiai gintaro spalvos.
Dehidratuota terpė ir paruoštos plokštelės turėtų būti laikomos 2–8 °C temperatūroje.
Naudojimas
MRS agaro lėkšteles galima sėti paviršiuje (sumažinant kiekį arba naudojant Drigalski mentele). Jas taip pat galima sėti giliai. Plokšteles reikia inkubuoti 37 °C temperatūroje mikroaerofilinėje aplinkoje (4 % O 2 ir 5–10 % CO₂ 2 ) 24–72 valandas.
Sėjimo būdas parenkamas atsižvelgiant į numatytą tikslą (izoliacija ar skaičiavimas).
Kolonijos charakteristikos
Numanomos Lactobacillus kolonijos šiame agare auga balkšvai ir yra gleivėtos arba kreminės išvaizdos. Jas reikia identifikuoti vėliau.
Pieno rūgšties bakterijų išskyrimas
Šiuo tikslu naudojama paviršinė sėja. Sėjamiems mėginiams reikalinga išankstinė procedūra.
Motinos pieno mėginiams rekomenduojama 1 ml mėginio centrifuguoti 14.000 10 aps./min. greičiu 900 minučių, kad būtų pašalintas riebalinis sluoksnis. 100 µl išpilama, o likę XNUMX µl suspenduojami nuosėdose ir supilami ant MRS agaro paviršiaus, kur juos reikia tolygiai paskirstyti Drigalski mentele.
Išmatų mėginių atveju vienas (1) gramas išmatų pasveriamas ir homogenizuojamas 9 ml sterilaus 0,1 % peptono vandens, atitinkančio 1/10 praskiedimą. Tada daromi serijiniai skiedimai, kol būti gautam galutinis praskiedimas 10 -4 .
Galiausiai, 100 μl iš 10 praskiedimų -2 , 10 -3 E 10 -4 surenkami ir kiekvienas praskiedimas dedamas ant MRS agaro, tolygiai paskirstant Drigalski mentele.
Pieno rūgšties bakterijų skaičius
Šiuo atveju sėjama giliai.
Motinos pieno mėginiams surenkamas 1 ml ir supilamas į sterilų kūginį plastikinį mėgintuvėlį. Maždaug 40 °C temperatūroje įpilama MRS agaro, kurio galutinis tūris yra 25 ml, ir gaunamas homogeninis mišinys. Tada jis tolygiai supilamas į sterilias Petri lėkšteles ir paliekamas pastovėti, kol įvyksta polimerizacija.
Išmatų mėginiai skiedžiami, kaip aprašyta aukščiau. Paimamas vienas ml kiekvieno skiedinio ir supilamas į sterilius plastikinius kūginius mėgintuvėlius. Įpilama išlydyto MRS agaro, kad tūris būtų 1 ml.
Kiekvieno skiedinio mišinys tolygiai supilamas į sterilias Petri lėkšteles. Galiausiai paliekamas pastovėti, kol įvyks polimerizacija.
Tyrimų lygmeniu
Pieno rūgšties bakterijų tyrimai kasdien tampa vis įdomesni; tyrėjai ypač domisi naujų padermių ir jų potencialo kaip pradinių kultūrų, skirtų standartizuoti pieno gamybą, tyrinėjimu ir kitais tikslais.
Šiuo požiūriu Alvarado ir kt. (2007) naudojo MRS agarą tyrimui, kurio metu jie išskyrė, identifikavo ir apibūdino pieno rūgšties bakterijas, esančias tradiciniame Andų rūkytame Venesuelos sūryje.
Sūryje jie aptiko Lactococcus ir Lactobacillus genčių bakterijų ir padarė išvadą, kad izoliuotų padermių mišiniai yra tinkami kaip pradinės padermės gaminant sūrius iš pasterizuoto pieno.
Kita vertus, Sánchez ir kt. (2017) naudojo MRS agarą, norėdami ištirti pieno rūgšties bakterijų buvimą paršelių virškinamajame trakte, kad panaudotų jas kaip natūralius probiotikus, kurie didina sveikų paršelių produktyvumą.
Taip jiems pavyko išskirti keturias rūšis: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae e Pediococcus pentosaceus.
Panašiai Báez ir kt. (2019) naudojo MRS agarą pieno rūgšties bakterijoms (LAB) ir bifidobakterijoms, turinčioms probiotinį potencialą, įvertinti motinos piene ir kūdikių išmatose.
Jiems pavyko izoliuoti 11 BAL ir 3 Bifidobakterijos sp. motinos piene ir 8 BAL bei 2 Bifidobakterijos sp. ... išmatose. Visos jos atitiko tam tikrus parametrus, kurie jas priskiria prie probiotinį aktyvumą turinčių bakterijų.
Autoriai padarė išvadą, kad motinos pienas ir išmatos iš kūdikių, maitinamų tik krūtimi, yra natūralūs probiotinių bakterijų šaltiniai.
Kokybės kontrolė
Norint įvertinti MRS agaro kokybę, kontrolinės padermės, tokios kaip:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia cereus ir Bacillus cereus .
Tikėtini rezultatai yra patenkinamas pirmųjų 6 bakterijų augimas, tuo tarpu E. coli e Bacillus cereus turi būti visiškai slopinamas.
Nuorodos
- Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Pieno rūgšties bakterijų išskyrimas, identifikavimas ir apibūdinimas iš Venesuelos Andų rūkyto sūrio. Jo naudojimas kaip pradinis derlius. Cem (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Prieinama adresu: scielo.org.
- Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Pieno rūgšties bakterijų išskyrimas iš paršelių virškinamojo trakto. Veterinary Invest. Rev. Peru 2017; 28 (3): 730–736. Prieinama adresu: scielo.org.
- Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Pieno rūgšties bakterijų ir bifidobakterijų, turinčių probiotinį potencialą, įvertinimas motinos piene ir kūdikių išmatose savivaldybėje. Acevedo, Miranda 2017. Bakalauro darbas siekiant gauti bioanalizės bakalauro laipsnį Carabobo universitete, Venesueloje.
- Britų laboratorinis agaras MRS 2015. Prieinama adresu: britanialab.com
- „Wikipedia“ bendradarbiai. Ágar MRS Vikipedija, Laisvoji enciklopedija. 10 m. sausio 2018 d., 19:44 UTC. Prieiga prie: wikipedia.org Žiūrėta 17 m. vasario 2019 d.
- Roy D. Terpės bifidobakterijoms pieno produktuose išskirti ir skaičiuoti. „Int J Food Microbiol“, 200128 m.; 69 (3): 167-82.