Gīmzas krāsošana ir metode, ko izmanto mikrobioloģijā un citoģenētikā, lai iekrāsotu šūnas un audus, ļaujot vizualizēt specifiskas struktūras. Gīmzas krāsošana, ko 1904. gadā izstrādāja Gustavs Gīmza, ir viena no visplašāk izmantotajām metodēm diagnostikas laboratorijās mikroorganismu, parazītu un hromosomu identificēšanai.
Giemsas krāsošanai nepieciešami tādi materiāli kā Giemsas krāsviela, metanols un destilēts ūdens. Šī metode ietver šūnu fiksēšanu uz stikla slaidiem, kam seko Giemsas krāsvielas, kas atšķaidīta metanolā, uzklāšana. Pēc krāsošanas šūnas mazgā destilētā ūdenī un novēro mikroskopā.
Giemsa krāsošanas galvenie pielietojumi ietver tādu patogēnu kā Plasmodium (kas izraisa malāriju), Trypanosoma (kas izraisa Čagasa slimību) un baktēriju, piemēram, Chlamydia un Rickettsia, identificēšanu. Turklāt Giemsa krāsošana tiek plaši izmantota hromosomu analīzē, lai diagnosticētu ģenētiskas slimības un identificētu hromosomu anomālijas.
Soli pa solim sniegta instrukcija efektīvai Giemsa krāsošanas veikšanai.
Giemsas krāsošana ir būtiska metode klīniskajā analīzē un zinātniskās pētniecības laboratorijās. Tā ļauj vizualizēt dažādas šūnu struktūras, piemēram, hromosomas, parazītus un baktērijas, izmantojot to komponentu specifisku krāsošanu. Šajā rakstā mēs soli pa solim paskaidrosim, kā efektīvi veikt Giemsas krāsošanu.
1. darbība: Sagatavojiet Giemsa šķīdumu, ko var iegādāties gatavu vai pagatavot no pulvera. Šķīdums jāatšķaida destilētā ūdenī ražotāja ieteiktajā proporcijā.
2. darbība: Piestipriniet paraugu pie stikla priekšmetstikliņa, izmantojot karstumu vai fiksatorus, piemēram, etilspirtu. Pārliecinieties, ka paraugs ir droši nostiprināts, lai izvairītos no deformācijas krāsošanas laikā.
3. darbība: Pārklājiet fiksēto paraugu ar Giemsa šķīdumu, nodrošinot, ka visa virsma ir vienmērīgi pārklāta. Atstājiet preparātu saskarē ar šķīdumu noteiktu laiku, parasti no 10 līdz 30 minūtēm.
4. darbība: Noskalojiet preparātu zem tekoša ūdens, lai noņemtu lieko traipu. Viegli nosusiniet preparātu ar absorbējošu papīru vai saspiestu gaisu.
5. darbība: Novērojiet iekrāsoto paraugu gaismas mikroskopā, izmantojot atbilstošus palielināmos objektīvus. Gīmsa krāsošana ļaus vizualizēt šūnu struktūras ar lielāku skaidrību un kontrastu.
Giemsas krāsošana tiek plaši izmantota dažādās bioloģijas un medicīnas jomās, piemēram, parazitāro slimību diagnosticēšanā, asins šūnu analīzē un infekcijas izraisītāju identificēšanā. Pareizi izpildot iepriekš aprakstītās darbības, var iegūt precīzus un ticamus Giemsas krāsošanas rezultātus.
Izprotiet Giemsa krāsošanas procesu un tā darbību detalizēti.
Gīmzas krāsošana ir metode, ko plaši izmanto mikrobioloģijas un hematoloģijas laboratorijās šūnu struktūru vizualizēšanai un patogēnu noteikšanai. Šo metodi 1902. gadā izstrādāja Gustavs Gīmza, un tā balstās uz bāzisku un skābu krāsvielu afinitāti pret dažādiem šūnu komponentiem.
Giemsas krāsošanai nepieciešamie materiāli ir Giemsas krāsviela, fiksācijas un atkrāsošanas šķīdumi, preparāti, segstikliņi un mikroskops. Giemsas krāsviela ir metilēnzilā, eozīna un glicerīna maisījums, un to izmanto šūnu kodola un citoplazmas struktūru krāsošanai.
Giemsas krāsošanas tehnika ietver šūnu fiksēšanu uz preparāta, kam seko Giemsas krāsas uzklāšana noteiktu laika periodu. Pēc krāsošanas šūnas mazgā ar destilētu ūdeni un atkrāso, lai noņemtu lieko krāsvielu. Visbeidzot, preparātus žāvē un novēro mikroskopā.
Giemsa krāsošanas galvenie pielietojumi ietver ar asinīm pārnēsājamu parazītu, piemēram, Plasmodium spp., identificēšanu un asins šūnu diferenciāciju perifēro asiņu uztriepēs. Turklāt šī metode tiek plaši izmantota baktēriju, vīrusu un citu patogēnu identificēšanai klīniskajos paraugos.
Tās darbība balstās uz bāzisko un skābo krāsvielu afinitāti ar dažādiem šūnu komponentiem, nodrošinot skaidrus un detalizētus attēlus mikroskopā.
Izprast patoloģiskās anatomijas procedūru ar Giemsa krāsošanu klīniskajai analīzei.
Gīmzas krāsošana ir metode, ko izmanto anatomiskajā patoloģijā audu paraugu klīniskajai analīzei. Šo krāsvielu, ko izstrādāja vācu zinātnieks Gustavs Gīmza, plaši izmanto, pateicoties tās spējai izcelt dažādas šūnu sastāvdaļas, piemēram, kodolus, hromosomas un parazītus.
Giemsas krāsošanai nepieciešami vairāki materiāli, tostarp Giemsas krāsviela, denaturēts spirts, fizioloģiskais šķīdums un stikla preparāti. Procedūra ietver parauga fiksēšanu denaturētā spirtā, Giemsas krāsvielas uzklāšanu un mazgāšanu ar fizioloģisko šķīdumu. Pēc krāsošanas paraugus analizē mikroskopā.
Giemsas krāsošana tiek plaši izmantota anatomiskās patoloģijas laboratorijās, lai identificētu dažādas patoloģijas, piemēram, parazitāras infekcijas, leikēmiju un autoimūnas slimības. Šī metode ļauj detalizēti analizēt šūnu struktūras, atvieglojot klīnisko diagnostiku un ārstēšanas uzraudzību.
Tās lietošana ir būtiska dažādu slimību diagnosticēšanā un ārstēšanā, padarot to par neaizstājamu metodi veselības aprūpes speciālistiem.
Asins uztriepes krāsošanai izmantotās krāsvielas identificēšana.
Gīmsas krāsošana ir izplatīta metode, ko izmanto, lai novērotu dažādu veidu asins šūnas asins uztriepē. Galvenā šajā procesā izmantotā krāsviela ir Giemsas traips, kas ir metilēnzilā, eozīna un debeszila B maisījums. Šī krāsviela ir īpaši efektīva tādu struktūru kā šūnu kodolu, hromosomu un citoplazmas ieslēgumu iekrāsošanā.
Giemsa traips: pamats, materiāli, tehnika un pielietojums
O Giemsas traips ir klīnisko paraugu krāsošanas veids, kura pamatā ir skābu un bāzisku krāsvielu maisījums. Tās izveidi iedvesmoja Romanovska darbs, kur vācu ķīmiķis un bakteriologs Gustavs Gīmza to pilnveidoja, pievienojot glicerīnu savienojumu stabilizēšanai.
Izmaiņas, kas veiktas Romanovska sākotnējā tehnikā, ļāva ievērojami uzlabot mikroskopiskos novērojumus; tāpēc metode tika nosaukta par Giemsas krāsošanu.
Tā kā tā ir vienkārša, ļoti funkcionāla un ekonomiska metode, to pašlaik plaši izmanto klīniskajā laboratorijā hematoloģisko uztriepju, kaulu smadzeņu paraugu un audu sekciju iegūšanai.
Gīmsas krāsošanas metode ir ļoti noderīga citoloģiskajos pētījumos, jo tā ļauj novērot specifiskas šūnu struktūras. Šī metode iekrāso šūnu citoplazmas, kodolus, nukleolus, vakuolas un granulas, ļaujot atšķirt smalkas hromatīna pēdas.
Turklāt var konstatēt būtiskas izmaiņas kodola lielumā, formā vai krāsā, kur ir iespējams vizualizēt kodola un citoplazmas attiecību zudumu.
No otras puses, tas ļauj identificēt nenobriedušas šūnas kaulu smadzenēs un perifērajās asinīs, kas ir svarīgi tādu nopietnu slimību kā leikēmija diagnosticēšanai. Tas arī ļauj noteikt hemoparazītus, ekstracelulāras un intracelulāras baktērijas, sēnītes un citus patogēnus.
Citoģenētikā to plaši izmanto, jo ir iespējams pētīt šūnu mitozi.
Giemsa traipu tonālais līdzeklis
Romanovska tipa krāsvielās tiek izmantots kontrasts starp skābām un bāziskām krāsvielām, lai attiecīgi iekrāsotu bāziskas un skābas struktūras. Kā redzams, skābām krāsvielām ir afinitāte iekrāsot bāziskas struktūras un otrādi.
Kā pamatkrāsviela tiek izmantota metilēnzilais un tā oksidētie atvasinājumi (Azure A un Azure B), savukārt kā skābā krāsviela ir eozīns.
Šūnu skābās struktūras ir nukleīnskābes, segmentētas bazofilu granulas, cita starpā, tāpēc tās iekrāso ar metilēnzilo.
Tādā pašā nozīmē šūnu pamatstruktūras ir hemoglobīns un dažas granulas, piemēram, tās, kas atrodas segmentētos eozinofilos; tās tiks iekrāsotas ar eozīnu.
No otras puses, tā kā metilēnzilā un debeszilā krāsa tiek raksturotas kā metahromatiskas krāsvielas, tās var piešķirt mainīgu toni dažādām struktūrām atkarībā no to polianjona lādiņa.
Tādā veidā stratēģiskā bāzisko un skābo krāsvielu kombinācija var attīstīt plašu krāsu spektru atbilstoši katras struktūras bioķīmiskajām īpašībām, sākot no gaiši zilas, tumši zilas, ceriņkrāsas un violetas krāsas skābu struktūru gadījumā.
Lai gan eozīna nodrošinātā krāsa ir stabilāka, tā rada krāsas starp sarkanīgi oranžu un laškrāsas.
Materiāli
Materiāli standarta šķīduma pagatavošanai
Lai pagatavotu standarta šķīdumu, jānosver 600 mg Giemsa pulverveida krāsvielas, jānomēra 500 ml metilspirta bez acetona un 50 ml neitrāla glicerīna.
Rezerves šķīduma pagatavošanas metode
Ievietojiet nosvērto Giemsa pulveri piestā. Ja ir kādi kunkuļi, tie jāsasmalcina pulverī. Pēc tam pievienojiet ievērojamu daudzumu nomērītā glicerīna un rūpīgi samaisiet. Iegūto maisījumu ielejiet ļoti tīrā dzintara pudelē.
Atlikušo glicerīnu pievieno javai. Vēlreiz samaisa, lai noņemtu atlikušo krāsvielu, kas ir pielipusi pie javas sienām, un pēc tam ielej to tajā pašā pudelē.
Pudeli pārklāj un 2 stundas transportē ūdens vannā 55 °C temperatūrā. Atrodoties ūdens vannā, maisījumu ik pēc pusstundas viegli samaisa.
Pēc tam maisījumam ļauj atdzist, pirms pievieno spirtu. Daļu no izmērītā spirta vispirms pievieno javai, lai pabeigtu atlikušās krāsvielas noskalošanu, un pēc tam pievieno maisījumam kopā ar atlikušo spirtu.
Šis preparāts jāatstāj nobriest vismaz 2 nedēļas. Mātes šķidrumā izmantotā daļa jāfiltrē.
Lai izvairītos no preparāta piesārņošanas, ieteicams to daļu, kas tiks pastāvīgi lietota, pārnest uz nelielu dzintarkrāsas pudelīti ar pilinātāju. Uzpildīt katru reizi, kad reaģents ir iztērēts.
Materiāli buferšķīduma pagatavošanai
No otras puses, buferšķīdumu ar pH 7,2 sagatavo šādi:
6,77 g nātrija fosfāta (bezūdens) (svērts NaHPO 4 ), 2,59 g kālija dihidrogēnfosfāta (KH 2 PO 4 ) un destilētu ūdeni līdz 1000 ml.
Galīgā krāsvielas sagatavošana
Lai pagatavotu galīgo krāsošanas šķīdumu, nomēriet 2 ml filtrētā standarta šķīduma un sajauciet to ar 6 ml buferšķīduma. Maisījumu sakrata.
Viens svarīgs fakts, kas jāņem vērā, ir tas, ka krāsošanas sagatavošanas metodes var mainīties atkarībā no komerciālās instalācijas.
Papildu materiāli, kas nepieciešami krāsošanai
Papildus aprakstītajiem materiāliem jābūt krāsainiem tiltiņiem, t-krekliem ar ūdeni vai tamponu drēbju mazgāšanai, palagiem ar priekšmetiem vai pārvalkiem, taimerim krāsošanas laika kontrolei un papīra vai kāda materiāla, kas kalpo žāvēšanai (marle vai kokvilna), nosusināšanai.
Tehnika
Krāsošanas process
1) Pirms krāsošanas paraugs jāizklāj uz tīra priekšmetstikliņa.
Paraugi var būt asinis, kaulu smadzenes, histoloģiskie audu griezumi vai dzemdes kakla-maksts paraugi. Ieteicams, lai pastas būtu šķidras un pirms krāsošanas tām ļaut nožūt 1 līdz 2 stundas.
2) Uz krāsošanas tiltiņa visas krāsainās lapas tiek novietotas. Tas vienmēr darbojas vienā un tajā pašā secībā, un katra lapa ir skaidri marķēta.
3) Uz uztriepes uzpiliniet dažus pilienus 100% metilspirta (metanola) un atstājiet uz 3 līdz 5 minūtēm, lai paraugs fiksētos un dehidrētos.
4) Izmetiet uz lapas esošo metanolu un ļaujiet tai nožūt.
5) Kad lapa ir nožuvusi, ar pilinātāja palīdzību pievienojiet pēdējo krāsošanas šķīdumu, līdz tas ir pārklāts. Atstājiet to iedarboties 15 minūtes. Daži autori iesaka līdz 25 minūtēm. Tas atkarīgs no veikala.
6) Noteciniet traipu un nomazgājiet uztriepi ar destilētu ūdeni vai buferšķīdumu, kas aprakstīts 7.2. punktā.
7) Uz absorbējoša papīra ļaujiet lapām nožūt gaisā, vertikāli sakārtojot tās ar balsta palīdzību.
8) Noslaukiet slaida aizmuguri ar marles spilventiņu vai vates tamponu, kas samērcēts spirtā, lai noņemtu krāsvielu.
Komunālie pakalpojumi
Giemsa krāsošanas tehniku izmanto vairākās jomās, tostarp hematoloģijā, mikoloģijā, bakterioloģijā, parazitoloģijā, citoloģijā un citoģenētikā.
Hematoloģija
Šis ir visizplatītākais šīs krāsas pielietojums. Ar tās palīdzību var identificēt katru šūnu, kas atrodas kaulu smadzeņu vai perifēro asiņu paraugos. Papildus šūnu skaita novērtēšanai katrā sērijā, tā var noteikt leikocitozi vai leikopēniju, trombocitopēniju utt.
Tā kā tā ir jutīga pret nenobriedušu šūnu identificēšanu, tā ir noderīga akūtas vai hroniskas leikēmijas diagnosticēšanā. Tā var diagnosticēt arī anēmijas, piemēram, sirpjveida šūnu anēmiju.
Mikoloģija
Šajā jomā ir ierasts izmantot Histoplasma capsulatum (intracelulārā dimorfā sēnīte) audu paraugos.
Bakterioloģija
Ar Giemsa iekrāsotajās hematoloģiskajās uztriepēs ir iespējams noteikt Borēlijas suga pacientiem ar slimību, ko sauc par recidivējošu drudzi. Spirohetas ir plaši novērotas eritrocītos paraugos, kas savākti drudža kulminācijas laikā.
Ir iespējams arī vizualizēt intracelulārās baktērijas kā Riketsijas suga e Chlamydia trachomatis inficētajās šūnās.
Parazitoloģija
Parazitoloģijas jomā Giemsas krāsošana ir ļāvusi diagnosticēt tādas parazitāras slimības kā malārija, Čagasa slimība un leišmanioze.
Pirmajos divos parazītos Plasmodium sp. e Trypanosoma cruzi, attiecīgi, var būt novērojami inficētu pacientu perifērajās asinīs, un tie var būt atrodami dažādās stadijās atkarībā no slimības stadijas.
Lai uzlabotu parazītu meklēšanu asinīs, ieteicams lietot Giemsa krāsvielu, kas sajaukta ar May-Grünwald krāsvielu.
Līdzīgi, ādas leišmaniozi var diagnosticēt, novērtējot Giemsa krāsotos ādas biopsijas paraugus, kuros atrasts parazīts.
Citoloģija
Giemsa krāsošana tiek izmantota arī endocervikālo paraugu citoloģiskai izpētei, lai gan tā nav visplašāk izmantotā metode šim nolūkam.
Tomēr resursu trūkuma gadījumos to var izmantot, piedāvājot līdzīgu funkcionalitāti kā Pap uztriepe un par zemākām izmaksām. Tomēr tam ir nepieciešamas izmeklētāja zināšanas.
Citoģenētika
Giemsas krāsošanas galvenā iezīme ir tās spēja spēcīgi saistīties ar DNS reģioniem, kas bagāti ar adenīnu un timīnu. Tas ļauj vizualizēt DNS šūnu mitozes laikā, dažādos kondensācijas stāvokļos.
Šie pētījumi ir nepieciešami, lai atklātu hromatiskās aberācijas, piemēram, dažādu hromosomu reģionu dublēšanos, dzēšanu vai translokāciju.
Pētījumi, kas pierāda Giemsa krāsošanas efektivitāti
Cannova et al. (2016) salīdzināja trīs krāsošanas metodes ādas leišmaniozes diagnosticēšanai.
Šim nolūkam tika izmantoti no eksperimentāla dzīvnieka iegūti paraugi ( Mesocristus auratus) eksperimentāli inokulēts ar leišmaniozēm.
Autori pierādīja, ka Giemsa krāsošana ir pārāka par Pap-mart® un Gaffney krāsošanu. Tādēļ viņi uzskatīja Giemsa krāsošanu par ideālu ādas leišmaniozes diagnosticēšanai.
Autoru iegūtie izcilie rezultāti ir saistīti ar to, ka Giemsa maisījumu veidojošo krāsvielu kombinācijai ir nepieciešamie apstākļi, lai radītu labvēlīgu kontrastu, ļaujot skaidri atšķirt amastigotu struktūras gan intra-, gan ekstracelulāri.
Arī citas metodes (Pap-mart® un Gaffney) to paveica, bet vājākā veidā un tāpēc grūtāk vizualizējamas. Tāpēc leišmaniozes parazitoloģiskai diagnostikai ieteicama Giemsa krāsošana.
Līdzīgi Ramírez et al. (1994) pētījumā tika novērtēta Giemsa un Lendruma traipu derīgums konjunktīvas uztriepēs, lai identificētu Chlamydia trachomatis.
Autori noteica, ka Giemsa un Ledrum krāsvielām ir vienāda specifika, bet Giemsa izrādījās jutīgāka.
Tas izskaidro, kāpēc Giemsa krāsošana pašlaik visbiežāk tiek izmantota hlamīdiju infekciju diagnosticēšanā, īpaši resursiem trūcīgos apstākļos.
Ieteikumi labai krāsošanai
Lapas nedrīkst žāvēt pārāk ātri. Jāpagaida atbilstošs laiks, lai tās nožūtu gaisā. Apmēram 2 stundas.
Lai iegūtu labākos rezultātus, krāsojiet nekavējoties pēc 2 stundām.
Lai traipi labāk sacietētu un sajauktos, paraugs jāizklāj pa visu loksni plānā, vienmērīgā kārtā.
Vēlamais asins paraugs ir kapilārs, jo uztriepe tiek ņemta tieši no asins piliena, un tāpēc paraugs nesatur nekādas piedevas, kas veicina šūnu struktūru saglabāšanu.
Tomēr, ja tiek izmantotas venozās asinis, kā antikoagulants jālieto EDTA, nevis heparīns, jo pēdējais parasti deformē šūnas.
Biežāk pieļautās kļūdas Giemsa krāsošanā
Izmantojot šo krāsošanas tehniku, var pieļaut kļūdas. Par to liecina pēkšņas struktūras nokrāsas izmaiņas.
Īpaši zila krāsa
Tas var būt saistīts ar:
- Ļoti biezi traipi
- Krāsošanas laika pārsniegšana
- Nepietiekami mazgāt.
- Reaģentu lietošana, kuru pH ir krietni virs neitrāla (sārmaina).
Šādos apstākļos sekojošo struktūru krāsas tiek izkropļotas, tāpēc eritrocīti, nevis mirs lašrozā krāsā, kļūs zaļi, eozinofilu granulas, kurām vajadzētu būt iekrāsotām ķieģeļsarkanā krāsā, kļūs zilganas vai pelēkas utt. novirze no parastajiem toņiem.
Pārmērīgi rozā krāsa
Tas var būt saistīts ar:
- Nepietiekams krāsošanas laiks.
- Ilgstoša vai pārmērīga mazgāšana.
- Nav īpaši sauss
- Ļoti skābu reaģentu izmantošana.
Šajā konkrētajā gadījumā struktūras, kas parasti ir ietonētas zilā krāsā, būs tik tikko redzamas, savukārt struktūras, kas ir ietonētas rozā krāsā, būs ļoti pārspīlētām nokrāsām.
Piemērs: Eritrocīti izskatīsies spilgti sarkani vai tumši oranži, kodola hromatīns izskatīsies gaiši rozā, un eozinofilu granulas iekrāsosies spilgti sarkanā krāsā.
Nogulšņu klātbūtne uztriepē
Cēloņi var būt:
- Izmantojiet netīras vai slikti mazgātas palagus.
- Neļaujiet traipam labi nožūt.
- Atstājiet fiksējošo šķīdumu uz ilgu laiku.
- Nepareiza mazgāšana krāsošanas beigās.
- Nepietiekama filtrācija vai izmantotās krāsvielas filtrācijas neesamība.
Morfoloģisku artefaktu klātbūtne
Krāsās var parādīties morfoloģiski artefakti, kas apgrūtina struktūru vizualizāciju un interpretāciju. Tas ir tāpēc, ka:
- Lietotā antikoagulanta veids, piemēram, heparīns.
- Netīru, bojātu vai eļļainu lapu izmantošana.
Uzglabāšanas režīms
Pēc pagatavošanas krāsviela jāuzglabā istabas temperatūrā (15–25 °C), lai novērstu krāsvielas nogulsnēšanos. Tā jāuzglabā cieši noslēgtā dzintara krāsas traukā.
Atsauces
- Cannova D, Brito E un Simons M. Krāsošanas metožu novērtējums ādas leišmaniozes diagnostikai. Sveiki . 2016. gads; 20 (2): 24-29.
- PanReac Applichem reaģenti ITW. Giemsa krāsošana. 2. versija: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spānija.
- Klārks G. Krāsošanas procedūras (1981), 4. izd. Viljamss un Vilkinss.
- Lietišķā klīniskā ķīmija. Giemsa krāsviela diagnostikai in vitro Izplatītājs: cromakit.es
- Ramírez I, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F un Grazioso C. Giemsa un Lendrum traipu derīgums konjunktīvas uztriepēs identificēšanai Chlamydia trachomatis. Sanit Panam bļoda. 1994. gads; 116 (3): 212-216.
- Kasas-Rinkons G. Vispārējā mikoloģija. 1994. 2. izd. Venecuēlas Centrālā universitāte, bibliotēkas izdevumi. Venecuēla, Karakasa
- "Gīmzas krāsošana." Vikipēdija, Brīvā enciklopēdija 1. gada 2017. septembrī plkst. 01:02 UTC. 6. gada 2018. decembrī, lv.wikipedia.org.