Termins "MIO barotne" attiecas uz barotni, kas pazīstama kā minimālā minerālu barotne, kuras pamatā ir mikroorganismu augšanai laboratorijā nepieciešamo barības vielu sastāvs. Šī barotne tika izstrādāta, lai nodrošinātu ideālus apstākļus baktēriju, sēnīšu un citu mikroorganismu augšanai un attīstībai zinātniskos pētījumos. Šajā rakstā mēs apspriedīsim MIO barotnes pamatus, sagatavošanu un galvenos pielietojumus mikrobioloģijā.
Kāda ir Mio medium izmantošana ēdienu gatavošanā un dzērienu pagatavošanā?
Mio medium ir daudzpusīga sastāvdaļa, ko var izmantot dažādos veidos ēdiena gatavošanā un dzērienu pagatavošanā. Mio medium, ko 2011. gadā radīja Kraft Foods, ir šķidrs koncentrāts, kas ēdieniem un dzērieniem piešķir garšu un krāsu.
Ēdienu gatavošanā Mio mērci var izmantot, lai piešķirtu īpašu pieskārienu marinādēm, mērcēm, zupām un pat desertiem. Tās praktiskums un daudzpusība padara to par neaizstājamu ēdienu pavāru un gardēžu virtuvē.
Dzērienu pagatavošanā Mio tiek plaši izmantots ūdens, sulu, tēju un pat alkoholisko dzērienu aromatizēšanai. Ar tikai dažiem pilieniem jūs varat pārvērst vienkāršu dzērienu unikālā maņu pieredzē.
Mio var izmantot arī radošu un gardu desertu, piemēram, saldējuma, želatīna un putukrējuma, pagatavošanai. Tā garšu daudzveidība ļauj izpētīt dažādas kombinācijas un pārsteigt savas garšas kārpiņas.
Īsāk sakot, Mio ir pavāru un bārmeņu sabiedrotais gardu un radošu ēdienu un dzērienu radīšanā. Tā praktiskums un daudzpusība padara to par neaizstājamu sastāvdaļu jebkurā virtuvē vai bārā. Izmēģiniet to un atklājiet bezgalīgās iespējas, ko Mio var piedāvāt!
Indola testa izmantošana baktēriju identificēšanā: procedūra un nozīme mikrobioloģijā.
Indola tests ir metode, ko izmanto baktēriju identificēšanai, pamatojoties uz indola enzīma ražošanu. Šis enzīms spēj metabolizēt triptofānu par indolu, etiķskābi un amonjaku. Metodi veic specifiskā barotnē, piemēram, indola, ornitīna un kustīguma barotnē (MIO), ko izmanto, lai atšķirtu gramnegatīvas baktērijas, piemēram, E. coli, no citām sugām.
Lai veiktu indola testu, baktēriju kultūra tiek inokulēta MIO vidē un inkubēta atbilstošā temperatūrā. Pēc inkubācijas pievieno Kovacs reaģentu, kas reaģē ar baktēriju saražoto indolu, veidojot rozā kompleksu. Šīs krāsas klātbūtne norāda uz indola ražošanu un līdz ar to uz fermenta, kas par to ražo, klātbūtni.
Indola tests ir ļoti svarīgs mikrobioloģijā, jo tas ļauj identificēt baktērijas, pamatojoties uz to bioķīmiskajām īpašībām. Turklāt tā ir ātra un efektīva metode baktēriju sugu diferenciācijai, palīdzot diagnosticēt infekcijas un izvēlēties atbilstošu ārstēšanu.
Soli pa solim sniegta instrukcija, kā efektīvi un precīzi veikt indola testu.
Lai efektīvi un precīzi veiktu indola testu, veiciet šādas darbības:
1. darbība: Sagatavojiet MIO barotni saskaņā ar ražotāja norādījumiem. Noteikti pareizi ievērojiet proporcijas un sterilizācijas apstākļus.
2. darbība: Pēc MIO barotnes sagatavošanas pievienojiet mēģenē testējamo paraugu. Pārliecinieties, ka paraugs ir labi sajaukts.
3. darbība: Inkubējiet mēģeni optimālā temperatūrā un laikā, kā ieteicis MIO barotnes ražotājs.
4. darbība: Pēc inkubācijas perioda mēģenē pievienojiet dažus pilienus indola reaģenta. Rūpīgi novērojiet jebkādas krāsas izmaiņas vai gredzenu veidošanos uz barotnes virsmas.
5. darbība: Salīdziniet iegūtos rezultātus ar indola testa rezultātu interpretācijas tabulu. Precīzi un detalizēti pierakstiet rezultātus.
Indola tests tiek plaši izmantots mikrobioloģijā, lai identificētu baktērijas, kas spēj ražot indolu no aminoskābes triptofāna. Tā ir efektīva un precīza metode dažādu baktēriju veidu diferenciācijai, pamatojoties uz to metabolisma īpašībām.
Indols mikrobioloģijā: definīcija un nozīme baktēriju identificēšanā.
Indols mikrobioloģijā: ir organisks savienojums, ko dažas baktērijas var ražot aminoskābju metabolisma laikā. Baktērijas spēja ražot indolu var būt svarīgs kritērijs tās identificēšanā un klasificēšanā.
Baktēriju identificēšanas nozīme: Indola ražošanu baktērijās var noteikt, izmantojot specifiskus bioķīmiskus testus, piemēram, Kovača testu. Indola klātbūtne vai neesamība var palīdzēt diferencēt dažādas baktēriju ģintis un sugas, tādējādi palīdzot mikrobioloģiskajā identifikācijā un klasifikācijā.
MIO barotne: pamats, sagatavošana un lietošana.
O Puse miljona (Indola-ornitīna barotne) ir barotne, ko izmanto, lai noteiktu indola veidošanos un baktēriju spēju metabolizēt ornitīnu. Šī barotne satur specifiskas barības vielas, kas veicina indola pozitīvu baktēriju augšanu.
MIO barotnes sagatavošana: MIO barotnes sagatavošana ietver tādu sastāvdaļu kā peptons, nātrija hlorīds, rauga ekstrakts, agars un citas sastāvdaļas, kas nodrošina baktēriju augšanai nepieciešamās barības vielas, apvienošanu. Pēc tam barotne tiek sterilizēta un sacietināta Petri trauciņos, lai to izmantotu baktēriju identifikācijas testos.
MIO vides lietojumi: MIO barotni parasti izmanto mikrobioloģijas laboratorijās, lai identificētu baktērijas, pamatojoties uz to indolu ražošanu un ornitīna metabolismu. Novērojot ar MIO barotni veikto testu rezultātus, mikrobiologi var klasificēt un diferencēt baktērijas, pamatojoties uz to bioķīmiskajām īpašībām.
MIO barotne: pamats, sagatavošana un lietošana
O puse miljona ir bioķīmisks tests, ko izmanto, lai identificētu Enterobacteriaceae dzimtas baktēriju sugas. Tas ir ļoti barojošs un sastāv no glikozes, rauga ekstrakta, peptona, tripteīna, L-ornitīna hidrohlorīda, bromkrezola purpura un agara.
Tās akronīma (MIO) nozīme apraksta katru no parametriem, ko var novērot šajā vidē: kustīgumu, indolu un ornitīnu. Kustīgums ir mikroorganisma spēja pārvietoties flagellu klātbūtnē. Lai šo īpašību varētu novērot, barotnes konsistencei jābūt pusšķidrai, lai preparāts saturētu mazāk agara.
Indola veidošanās liecina par enzīma triptofanāzes klātbūtni, kas iedarbojas uz aminoskābi triptofānu. Lai indola veidošanās būtu redzama, nepieciešams izmantot atklāšanas reaģentu.
Visbeidzot, ornitīns nosaka, vai baktērija spēj dekarboksilēt aminoskābi, tas ir, vai tai ir enzīms ornitīna dekarboksilāze.
Fundacao
Peptons, rauga ekstrakts un triptīns
Šie elementi veicina šīs barotnes uzturvērtību. Tie kalpo kā barības vielu un neaizvietojamo aminoskābju avots baktēriju augšanai.
Turklāt tripteīns ir triptofāna avots, kas norāda uz enzīma triptofanāzes klātbūtni, kas noārda triptofānu ar reducējošu deamināciju, atbrīvojot indolu, piruvskābi, amonjaku un enerģiju.
Indols ir bezkrāsains, tāpēc tā klātbūtni var noteikt, pievienojot piecus pilienus Ērliha vai Kovacs reaģenta, kas abi satur p-dimetilaminobenzaldehīdu.
Šī savienojuma aldehīda grupa reaģē ar indolu, veidojot fuksijas sarkanu gredzenveida produktu uz agara virsmas.
Jebkura krāsas pēda jāuzskata par pozitīvu testu. Testa rezultāts jānolasa nekavējoties; laika gaitā krāsa izbalē.
No otras puses, šis tests jāatklāj pēc kustīguma un ornitīna dekarboksilēšanas rezultātu reģistrēšanas.
Interpretācija
Pozitīvs tests: fuksijas sarkana gredzena veidošanās, pievienojot pilienus Kovacs reaģenta.
Negatīvs tests: gredzenu veidošanās nenotiek.
Kustīgums
Baktēriju spēju pārvietoties var pierādīt, ja ir novērojama duļķaina vide vai ja ap sākotnējo inokulāciju paplašinās bieza augšanas līnija.
Negatīvu kustīguma testu apliecinās plānas augšanas līnijas novērošana, un viss ap to būs bez augšanas.
Ir svarīgi nolasīt kustīgumu pirms indola attīstīšanas, jo reaģenta agregāts aizmiglo visu barotni.
Kustīgām, bet lēni augošām baktērijām ir grūti pierādīt to kustīgumu ar šo barotni. Šajā gadījumā ieteicams izmantot citus testus vai metodes, piemēram, kustīguma barotni vai piliena kulona metodi.
Glikoze
Glikoze ir fermentējams ogļhidrāts, kas papildus enerģijas nodrošināšanai paskābina barotni, kas ir nepieciešams nosacījums aminoskābes ornitīna dekarboksilēšanai.
Glikozes fermentācijai vienmēr jānotiek, pamatojoties uz principu, ka visas baktērijas, kas pieder pie Enterobacteriaceae dzimtas, fermentē glikozi.
L-ornitīns
Ja baktērijas ražo fermentu ornitīna dekarboksilāzi, tas var iedarboties, tiklīdz barotne ir paskābināta ar glikozes fermentāciju.
Ferments ornitīna dekarboksilāze iedarbojas uz aminoskābes karboksilgrupu, veidojot amīnu, ko sauc par putresīnu, kas atkal sārmina vidi.
Šis tests jānolasa pēc 24 stundu inkubācijas, jo, ja mēģināsiet to nolasīt agrāk, jūs varat nepareizi interpretēt testu ar viltus negatīvu rezultātu.
Atcerieties, ka pirmā notiekošā reakcija ir glikozes fermentācija, tāpēc barotne sākotnēji (pirmās 10 līdz 12 stundas) kļūst dzeltena. Ja ornitīna dekarboksilēšana notiek vēlāk, barotne kļūst violeta.
Pirms indola atklāšanas ir svarīgi interpretēt ornitīna dekarboksilēšanas testu, jo Kovacs reaģenta agregāts maina barotnes krāsu.
Interpretācija
Negatīvs tests: dzeltens vai vidēji dzeltens fons.
Pozitīvs tests: puse pilnīgi violeta.
pH indikators
Šajā gadījumā tiek izmantots bromkrezola purpursarkanais; tas ir atbildīgs par vides pH izmaiņu noteikšanu. Paskābinot, indikators kļūst dzeltens, bet sārmainojot – violets.
Sēšanas un attīstības tehnika
MIO barotnes sēšanai izmanto adatu vai taisnu cilpu, un ar to savāc daļu no pētāmās kolonijas.
Vidējā priekšējā apakšējā dobā vēnā taisnā līnijā tiek veikta dziļa punkcija. Nav ieteicams veikt dubultu punkciju, jo tā var radīt maldīgu iespaidu par kustīgumu, ja punkcijas netiek veiktas vienā un tajā pašā vietā.
Inkubēt aerobos apstākļos 24 līdz 48 stundas 37°C temperatūrā. Rezultātus novērot šādā secībā: kustīgums, ornitīna dekarboksilēšana un visbeidzot indola izdalīšanās.
Ieteicams aseptiski paņemt 2 ml barotnes, pārnest to sterilā mēģenē un veikt indola testu, lai negatīva rezultāta gadījumā sākotnējās mēģenes atlikušo daļu varētu inkubēt vēl 24 stundas, lai atkal atklātu indolu.
Indola attīstīšana tiek veikta šādi: MIO barotnei pievieno 3 līdz 5 pilienus Kovacs reaģenta un enerģiski krata. Novēro, vai parādās fuksijas sarkans gredzens.
Sagatavošana
Puse no manējās
Nosver 31 g MIO barotnes un izšķīdina vienā litrā destilēta ūdens.
Karsē maisījumu, līdz tas vārās vienu minūti, nepārtraukti maisot, līdz agars pilnībā izšķīst. Ielej 4 ml barotnes 13/100 mēģenēs ar vates vāciņiem.
Sterilizējiet autoklāvā 121°C temperatūrā 15 minūtes. Izņemiet no autoklāva un ļaujiet atpūsties uz statīva, lai izveidotu puscietu bloku.
Uzglabāt ledusskapī 2–8 °C temperatūrā. Pirms baktēriju celma iesēšanas ļaujiet atdzist.
Dehidrētās barotnes krāsa ir bēša, bet sagatavotās barotnes krāsa ir nedaudz opalescējoša violeta.
Sagatavotās barotnes galīgais pH ir 6,5 ± 0,2.
Vide skābā pH vidē kļūst dzeltena, bet sārmainā pH vidē – violeta.
Kovacs reaģents (indola testa attīstītājs)
Šo reaģentu sagatavo šādi:
Tiek nomērīti 150 ml amilspirta, izoamilspirta vai butilspirta (jebkura no trim). Izšķīdina 10 g p-dimetilaminobenzaldehīda. Pēc tam lēnām pievieno 50 ml koncentrētas sālsskābes.
Sagatavotais reaģents ir bezkrāsains vai gaiši dzeltens. Tas jāuzglabā dzintarkrāsas pudelē ledusskapī. Tumši brūna krāsa norāda uz bojāšanos.
Kovača reaģentu var aizstāt arī ar Ērliha reaģentu. Pēdējais, būdams jutīgāks, ir vēlams indola noteikšanai baktērijās, kas to ražo minimālā daudzumā, piemēram, dažās nefermentējošās gramnegatīvās baktērijās un dažās anaerobās baktērijās.
lietošana
Šī barotne ir tests, kas papildina bioķīmisko testu klāstu Enterobacteriaceae dzimtas baktēriju identificēšanai.
Ornitīna dekarboksilēšanas dati palīdz diferencēt Šigella sonnei, kas ir pozitīvs, no Shigella boydii, Shigella flexneri un S. dysenterieae, kas ir negatīvi.
Tas arī atšķir Klebsiella ģinti, kas ir negatīva, no Enterobacter ģints, kur lielākā daļa tās sugu ir pozitīvas.
Kvalitātes kontrole
Katru reizi, kad tiek sagatavota MIO barotnes partija, var veikt kontroles testu. Šim nolūkam barotnes uzvedības novērošanai izmanto zināmus vai sertificētus celmus.
Izmantojamās celmas ir Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes e Proteus mirabilis.
Sagaidāmie rezultāti ir E. coli un M. morganii. Tie dod M: +, I: + un O: +.
Klebsiella pneumoniae viss ir negatīvs (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis e Enterobacter aerogenes sniedziet M: + I: – un O: +.
Atsauces
- Mac Faddin J. (2003). Bioķīmiskie testi klīniski nozīmīgu baktēriju identificēšanai. 3. izd. Panamericana Publishing House. Buenosairesa, Argentīna.
- Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Beilija un Skota mikrobioloģiskā diagnoze. 12. izd. Redakcijas Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobioloģiskā diagnostika 5. izd. Redakcijas sleja Panamericana SA Argentina.
- Britu laboratorijas. MIO Medio 2015. Pieejams vietnē: britanialab.com
- BD Laboratories BBL Motilitātes indola ornitīna (MIO) vide. 2007. Pieejams vietnē: bd.com
- Valtek Laboratories MIO vide Motilitāte, indols, ornitīns. 2010. Pieejams vietnē: andinamedica.com