Termenul „mediu MIO” se referă la un mediu de cultură cunoscut sub numele de Mediu Mineral Minimal, care se bazează pe compoziția nutrienților esențiali pentru creșterea microorganismelor în laborator. Acest mediu a fost dezvoltat pentru a oferi condiții ideale pentru creșterea și dezvoltarea bacteriilor, fungilor și a altor microorganisme în studii științifice. În acest articol, vom discuta despre fundamentul, prepararea și principalele utilizări ale mediului MIO în microbiologie.
La ce se folosește mediul Mio în gătit și prepararea băuturilor?
Mio medium este un ingredient versatil care poate fi utilizat într-o varietate de moduri în gătit și prepararea băuturilor. Creat în 2011 de Kraft Foods, Mio medium este un concentrat lichid care adaugă aromă și culoare preparatelor și băuturilor.
În bucătărie, sosul Mio poate fi folosit pentru a adăuga o notă specială marinadelor, sosurilor, supelor și chiar deserturilor. Practicitatea și versatilitatea sa îl fac un element indispensabil în bucătăria bucătarilor și a gurmanzilor.
În prepararea băuturilor, Mio este utilizat pe scară largă pentru aromarea apei, sucurilor, ceaiurilor și chiar a băuturilor alcoolice. Cu doar câteva picături, puteți transforma o simplă băutură într-o experiență senzorială unică.
Mio poate fi folosit și pentru a crea deserturi creative și delicioase, cum ar fi înghețată, gelatină și mousse-uri. Varietatea sa de arome vă permite să explorați diferite combinații și să vă surprindeți papilele gustative.
Pe scurt, Mio este un aliat pentru bucătari și barmani în crearea de preparate și băuturi delicioase și creative. Practicitatea și versatilitatea sa îl fac un ingredient indispensabil în orice bucătărie sau bar. Încearcă-l și descoperă posibilitățile nelimitate pe care Mio le poate oferi!
Utilizarea testului cu indol în identificarea bacteriilor: procedură și importanță în microbiologie.
Testul cu indol este o metodă utilizată pentru identificarea bacteriilor pe baza producției enzimei indol. Această enzimă este capabilă să metabolizeze triptofanul în indol, acid acetic și amoniac. Tehnica se efectuează într-un mediu de cultură specific, cum ar fi mediul de indol, ornitină și motilitate (MIO), care este utilizat pentru a diferenția bacteriile Gram-negative, cum ar fi E. coli, de alte specii.
Pentru a efectua testul cu indol, o cultură bacteriană este inoculată în mediu MIO și incubată la o temperatură adecvată. După incubare, se adaugă reactivul Kovacs, care reacționează cu indolul produs de bacterii, formând un complex roz. Prezența acestei culori indică producția de indol și, în consecință, prezența enzimei responsabile de producerea acestuia.
Testul cu indol este crucial în microbiologie, deoarece permite identificarea bacteriilor pe baza caracteristicilor lor biochimice. În plus, este o metodă rapidă și eficientă pentru diferențierea speciilor bacteriene, ajutând la diagnosticarea infecțiilor și la selectarea tratamentului adecvat.
Ghid pas cu pas pentru efectuarea eficientă și precisă a testului la indol.
Pentru a efectua testul cu indol eficient și precis, urmați acești pași:
Pasul 1: Preparați mediul MIO conform instrucțiunilor producătorului. Asigurați-vă că respectați corect proporțiile și condițiile de sterilizare.
Pasul 2: După pregătirea mediului MIO, adăugați în eprubetă proba pe care doriți să o testați. Asigurați-vă că proba este bine amestecată.
Pasul 3: Incubați eprubeta în condiții optime de temperatură și timp, conform recomandărilor producătorului mediului MIO.
Pasul 4: După perioada de incubare, adăugați câteva picături de reactiv indolic în eprubetă. Observați cu atenție orice modificare de culoare sau formare de inele pe suprafața mediului.
Pasul 5: Comparați rezultatele obținute cu o diagramă de interpretare a rezultatelor testului de indol. Înregistrați rezultatele cu precizie și detaliu.
Testul indolic este utilizat pe scară largă în microbiologie pentru a identifica bacteriile capabile să producă indol din aminoacidul triptofan. Este o metodă eficientă și precisă pentru diferențierea diferitelor tipuri de bacterii pe baza caracteristicilor lor metabolice.
Indolul în microbiologie: definiție și importanță în identificarea bacteriilor.
Indol în microbiologie: este un compus organic care poate fi produs de unele bacterii în timpul metabolismului aminoacizilor. Capacitatea unei bacterii de a produce indol poate fi un criteriu important în identificarea și clasificarea acesteia.
Importanța în identificarea bacteriilor: Producția de indol de către bacterii poate fi detectată prin teste biochimice specifice, cum ar fi testul Kovacs. Prezența sau absența indolului poate ajuta la diferențierea diferitelor genuri și specii bacteriene, contribuind astfel la identificarea și clasificarea microbiologică.
Mediul MIO: bază, preparare și utilizări.
O Jumătate de milion (Mediul Indol-Ornithine) este un mediu de cultură utilizat pentru a detecta producția de indol și capacitatea unei bacterii de a metaboliza ornitina. Acest mediu conține nutrienți specifici care promovează creșterea bacteriilor indol-pozitive.
Prepararea mediului MIO: Prepararea mediului MIO implică combinarea ingredientelor precum peptonă, clorură de sodiu, extract de drojdie, agar și alte componente care furnizează nutrienții necesari pentru creșterea bacteriană. Mediul este apoi sterilizat și solidificat în vase Petri pentru a fi utilizat în testele de identificare bacteriană.
Utilizări ale mediului MIO: Mediul MIO este utilizat în mod obișnuit în laboratoarele de microbiologie pentru a identifica bacteriile pe baza producției lor de indol și a metabolismului ornitinei. Prin observarea rezultatelor testelor efectuate cu mediul MIO, microbiologii pot clasifica și diferenția bacteriile pe baza caracteristicilor lor biochimice.
Mediul MIO: bază, preparare și utilizări
O jumătate de milion este un test biochimic utilizat pentru a ajuta la identificarea speciilor bacteriene aparținând familiei Enterobacteriaceae. Este foarte nutritiv și constă din glucoză, extract de drojdie, peptonă, tripteină, clorhidrat de L-ornitină, purpură de bromocrezol și agar.
Semnificația acronimului său (MIO) descrie fiecare dintre parametrii care pot fi observați în acest mediu: motilitate, indol și ornitină. Motilitatea este capacitatea microorganismului de a se deplasa prin prezența flagelilor. Pentru ca această proprietate să fie observată, consistența mediului trebuie să fie semisolidă, astfel încât preparatul să conțină mai puțin agar.
Producerea de indol demonstrează prezența enzimei triptofanază, care acționează asupra aminoacidului triptofan. Este necesară utilizarea unui reactiv revelator pentru a face vizibilă producția de indol.
În cele din urmă, ornitina determină dacă bacteria este capabilă să decarboxileze aminoacidul, adică dacă are enzima ornitin decarboxilază.
Fundacao
Peptonă, extract de drojdie și triptină
Aceste elemente contribuie la valoarea nutritivă a acestui mediu. Ele servesc drept sursă de nutrienți și aminoacizi esențiali pentru creșterea bacteriilor.
În plus, tripteina este o sursă de triptofan, ceea ce indică prezența enzimei triptofanază, care degradează triptofanul printr-o deaminare reductivă ce eliberează indol, acid piruvic, amoniac și energie.
Indolul este incolor, așa că prezența sa este relevată prin adăugarea a cinci picături de reactiv Ehrlich sau Kovacs, ambele conținând p-dimetilaminobenzaldehidă.
Gruparea aldehidă a acestui compus reacționează cu indolul, generând un produs inelar roșu fuchsia la suprafața agarului.
Orice urmă de culoare trebuie considerată un test pozitiv. Testul trebuie citit imediat; pe măsură ce trece timpul, culoarea se estompează.
Pe de altă parte, acest test ar trebui dezvăluit după înregistrarea rezultatelor motilității și decarboxilării ornitinei.
Interpretare
Test pozitiv: formarea unui inel roșu fuchsia prin adăugarea de picături de reactiv Kovacs.
Test negativ: nu există formare de inele.
Motilitate
Capacitatea bacteriilor de a se mișca va fi evidențiată dacă se observă un mediu tulbure sau dacă există o linie groasă de creștere care se extinde în jurul inoculării inițiale.
Un test de motilitate negativ va fi evidențiat prin observarea unei linii subțiri de creștere, iar tot ce se află în jurul ei va fi fără creștere.
Este important ca motilitatea să fie citită înainte de a developa indolul, deoarece agregatul de reactiv estompează întregul mediu.
La bacteriile mobile, dar cu creștere lentă, este dificil să se demonstreze motilitatea lor cu acest mediu. În acest caz, se recomandă utilizarea altor teste sau metode, cum ar fi mediul de motilitate sau metoda pandantivului cu picătură.
Glucoză
Glucoza este carbohidratul fermentabil care, pe lângă furnizarea de energie, acidifică mediul, o condiție necesară pentru decarboxilarea aminoacidului ornitină.
Fermentația glucozei trebuie să aibă loc întotdeauna, pe baza principiului că toate bacteriile aparținând familiei Enterobacteriaceae fermentează glucoza.
L-Ornitină
Dacă bacteriile produc enzima ornitină decarboxilază, aceasta poate acționa imediat ce mediul este acidificat prin fermentarea glucozei.
Enzima ornitin decarboxilază acționează asupra grupării carboxil a aminoacidului, producând o amină numită putresină, care alcalinizează din nou mediul.
Acest test trebuie citit după 24 de ore de incubare, deoarece dacă încercați să îl citiți înainte, puteți interpreta greșit testul și puteți obține un rezultat fals negativ.
Rețineți că prima reacție care are loc este fermentarea glucozei, deci mediul devine inițial galben (în primele 10-12 ore). Dacă decarboxilarea ornitinei are loc mai târziu, mediul va deveni violet.
Este important să se interpreteze testul de decarboxilare a ornitinei înainte de a evidenția indolul, deoarece agregatul de reactiv Kovacs modifică culoarea mediului.
Interpretare
Test negativ: fundal galben sau galben mediu.
Test pozitiv: pe jumătate complet violet.
indicator de pH
În acest caz, se folosește purpuriul de bromocrezol; acesta este responsabil pentru detectarea modificărilor pH-ului mediului. Când este acidificat, indicatorul devine galben, iar când este alcalinizat, devine violet.
Tehnica de însămânțare și dezvoltare
Pentru însămânțarea mediului MIO, se folosește un ac sau o ansă dreaptă și se colectează cu aceasta o porțiune din colonia care urmează a fi studiată.
Se efectuează o puncție profundă în vena cavă antero-inferioară mijlocie, în linie dreaptă. Nu se recomandă puncțiile duble, deoarece pot crea o impresie falsă de motilitate dacă puncțiile nu sunt efectuate în aceeași locație.
Incubați timp de 24 până la 48 de ore la 37°C în condiții aerobe. Observați rezultatele în această ordine: motilitate, decarboxilarea ornitinei și, în final, revelarea indolului.
Se recomandă prelevarea aseptică a 2 ml de mediu, transferul acestora într-un tub steril și efectuarea testului cu indol, astfel încât, dacă acesta este negativ, restul tubului original să poată fi incubat încă 24 de ore, pentru a dezvălui din nou indolul.
Dezvoltarea indolului se realizează după cum urmează: se adaugă 3 până la 5 picături de reactiv Kovacs în mediul MIO și se agită energic. Se observă dacă apare sau nu un inel roșu fuchsia.
Pregătirea
Jumătate din a mea
Se cântăresc 31 g de mediu MIO și se dizolvă într-un litru de apă distilată.
Se încălzește până când amestecul fierbe timp de un minut, amestecând constant până când agarul se dizolvă complet. Se pierdu 4 ml de mediu în eprubete de 13/100 cu capace de bumbac.
Sterilizați într-o autoclavă la 121°C timp de 15 minute. Scoateți din autoclavă și lăsați să se odihnească pe un suport pentru a forma un bloc semisolid.
A se păstra la frigider la 2-8°C. A se lăsa să se răcească înainte de a semăna tulpina bacteriană.
Culoarea mediului deshidratat este bej, iar culoarea mediului preparat este violet ușor opalescent.
pH-ul final al mediului preparat este de 6,5 ± 0,2
Mediul devine galben la pH acid și violet la pH alcalin.
Reactiv Kovacs (revelator pentru testul indolului)
Acest reactiv se prepară după cum urmează:
Se măsoară 150 ml de alcool amilic, izoamilic sau butilic (oricare dintre cele trei). Se dizolvă 10 g de p-dimetilaminobenzaldehidă. Ulterior, se adaugă lent 50 ml de acid clorhidric concentrat.
Reactivul preparat este incolor sau galben deschis. Trebuie păstrat într-o sticlă de culoarea chihlimbarului și păstrat la frigider. O culoare maro închis indică deteriorarea.
Reactivul Kovacs poate fi înlocuit și cu reactivul Ehrlich. Acesta din urmă, fiind mai sensibil, este preferat pentru detectarea indolului la bacteriile care îl produc în cantități minime, cum ar fi unii bacili Gram-negativi nefermentativi și unii anaerobi.
Utilizare
Acest mediu este un test care completează o baterie de teste biochimice pentru identificarea bacteriilor aparținând familiei Enterobacteriaceae.
Datele despre decarboxilarea ornitinei servesc la diferențierea Shigella sonnei, care este pozitiv, al Shigella boydii, Shigella flexneri și S. dysenterieae, care sunt negative.
De asemenea, diferențiază genul Klebsiella, care este negativ, de genul Enterobacter, unde majoritatea speciilor sale sunt pozitive.
Controlul calității
De fiecare dată când se prepară un lot de medii MIO, se poate efectua un test de control. Pentru aceasta, se utilizează tulpini cunoscute sau certificate pentru a observa comportamentul mediului.
Tulpinile care pot fi utilizate sunt Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes e Proteus mirabilis.
Rezultatele așteptate sunt E. coli și M. morganii. Acestea dau M: +, I: + și O: +.
Klebsiella pneumoniae totul este negativ (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis e Enterobacter aerogeni furnizați M: + I: – și O: +.
Referințe
- Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor cu importanță clinică. Ediția a 3-a. Editura Panamericana. Buenos Aires, Argentina.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosticul microbiologic al lui Bailey și Scott. Ediția a 12-a. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologic, ediția a 5-a. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Laboratoarele Britanice. MIO Medio 2015. Disponibil la: britanialab.com
- Mediu BD Laboratories BBL pentru motilitate, indol și ornitină (MIO). 2007. Disponibil la: bd.com
- Mediu MIO Valtek Laboratories Motilitate, Indol, Ornitină. 2010. Disponibil la: andinamedica.com