Agari MacConkey është një medium kulture selektiv dhe diferencial i zhvilluar nga Alfred Theodore MacConkey në vitin 1900. Përdoret gjerësisht në mikrobiologji për izolimin dhe diferencimin e enterobaktereve, veçanërisht Escherichia coli dhe Salmonella spp. Ky medium përgatitet me pepton, laktozë, kripëra biliare, vjollcë kristalore dhe të kuqe fenoli, të cilat pengojnë rritjen e baktereve Gram-pozitive dhe lejojnë rritjen e baktereve Gram-negative që fermentojnë laktozën. Agari MacConkey përdoret në laboratorët klinikë për të identifikuar patogjenët enterikë në mostrat klinike si feçet, urina dhe lëngjet e trupit. Është një mjet i rëndësishëm për diagnostikimin e infeksioneve bakteriale dhe mund të ndihmojë profesionistët e kujdesit shëndetësor të zgjedhin trajtimin më të përshtatshëm për pacientët.
Përgatitja e mjedisit kulturor MacConkey: hap pas hapi për rezultate të sakta.
Agari MacConkey është një mjedis kulture selektiv dhe diferencial që përdoret gjerësisht në mikrobiologji për izolimin dhe identifikimin e baktereve Gram-negative. U zhvillua nga Alfred Theodore MacConkey në vitin 1900 dhe që atëherë është bërë një nga mjediset më të njohura të kulturës në laboratorët e mikrobiologjisë.
Për të përgatitur mjedisin kulturor MacConkey, ndiqni këto hapa:
1. Peshimi i përbërësve: Peshoni përbërësit e nevojshëm, siç janë peptoni, ekstrakti i majasë, laktoza, kripërat biliare, e kuqja neutrale dhe agari. Sigurohuni që të ndiqni përmasat e sakta sipas udhëzimeve të përgatitjes.
2. Tretja e përbërësve: Tretini përbërësit në ujë të distiluar të nxehtë, duke i përzier mirë për t'u siguruar që janë tretur plotësisht. Ngroheni deri në vlim për t'u siguruar që mjedisi është sterilizuar.
3. Rregullimi i pH-it: Mjedisi i kulturës MacConkey duhet të ketë një pH acid, rreth 7.1. Përdorni acid klorhidrik ose hidroksid natriumi për të rregulluar pH-in sipas nevojës, duke përdorur një pH-metër për të siguruar saktësi.
4. Sterilizimi: Pas rregullimit të pH-it, sterilizoni mjedisin e kulturës MacConkey duke e autoklavuar në 121°C për 15 minuta. Sigurohuni që mjedisi të jetë sterilizuar plotësisht para përdorimit.
Pas përgatitjes së mjedisit kulturor MacConkey, ai është gati për t’u përdorur në enët Petri për izolimin dhe identifikimin e baktereve Gram-negative. Ky mjedis lejon përzgjedhjen e baktereve që fermentojnë laktozë, si dhe diferencimin midis baktereve që fermentojnë laktozë dhe atyre që nuk fermentojnë bazuar në ngjyrën e kolonisë.
Agari MacConkey është një mjet thelbësor në mikrobiologji, duke lejuar identifikimin e shpejtë dhe efektiv të patogjenëve të zorrëve si Escherichia coli dhe Salmonella. Me përgatitjen e saktë të mjedisit të kulturës MacConkey, mund të merren rezultate të sakta dhe të besueshme në testet mikrobiologjike.
Qëllimi i mediumit MacConkey në identifikimin e baktereve gram-negative që fermentojnë laktozë.
Qëllimi i mjedisit MacConkey në identifikimin e baktereve Gram-negative që fermentojnë laktozë është për shkak të përbërjes së tij specifike. Mjedisi përmban kripëra biliare dhe vjollcë kristalore, të cilat pengojnë rritjen e baktereve Gram-pozitive, duke lejuar vetëm bakteret Gram-negative të rriten. Për më tepër, prania e laktozës si burim karboni lejon identifikimin e baktereve të afta për të fermentuar këtë sheqer.
Bakteret që fermentojnë laktozën do të prodhojnë acid laktik gjatë procesit të fermentimit, gjë që rezulton në një ulje të pH-it të mjedisit. Kjo bën që treguesi i pH-it në mjedisin MacConkey të ndryshojë ngjyrën nga e kuqe në të verdhë, duke treguar fermentimin e laktozës. Baktere të tilla si Escherichia coli e Salmonella Janë shembuj të baktereve gram-negative që fermentojnë laktozën dhe janë të afta të rriten në këtë mjedis.
Prandaj, mjedisi MacConkey është një mjet i dobishëm për identifikimin dhe diferencimin e baktereve Gram-negative që fermentojnë laktozë, duke ndihmuar në karakterizimin dhe diagnostikimin e infeksioneve bakteriale. Përdorimi i tij është i zakonshëm në laboratorët klinikë dhe të mikrobiologjisë ushqimore, ku identifikimi i saktë i baktereve të pranishme është thelbësor për vendimmarrjen terapeutike dhe të sigurisë ushqimore.
Për çfarë përdoret agari MacConkey në analizën mikrobiologjike të feçeve?
Agari MacConkey është një medium kulture selektiv dhe diferencial që përdoret gjerësisht në mikrobiologji për izolimin dhe identifikimin e baktereve të zorrëve, siç është Escherichia coli, të pranishme në feçe. Ky medium u zhvillua nga Alfred Theodore MacConkey në fillim të shekullit të 20-të dhe është një mjet thelbësor në analizën mikrobiologjike të mostrave fekale.
Agari MacConkey përgatitet duke shtuar kripëra biliare dhe vjollcë kristalore, të cilat pengojnë rritjen e baktereve gram-pozitive, duke lejuar përzgjedhjen e baktereve gram-negative, siç është E. coli. Për më tepër, pH i mjedisit rregullohet për të favorizuar rritjen e baktereve të caktuara, të tilla si ato të afta për të fermentuar laktozën.
Kur jashtëqitja inokulohet në agarin MacConkey, bakteret e pranishme në mostër do të rriten dhe do të formojnë koloni. Baktere të tilla si E. coli, të cilat fermentojnë laktozën, prodhojnë acid laktik si nënprodukt, duke rezultuar në acidifikimin e mjedisit dhe koloni rozë. Bakteret që nuk fermentojnë laktozën formojnë koloni pa ngjyrë.
Kështu, Agari MacConkey lejon identifikimin dhe diferencimin e baktereve të zorrëve bazuar në aftësinë e tyre për të fermentuar laktozën dhe karakteristikat e tyre biokimike. Prandaj, ky mjedis kulture luan një rol vendimtar në analizën mikrobiologjike të jashtëqitjes, duke ndihmuar në diagnostikimin e infeksioneve gastrointestinale dhe monitorimin e mikrobiotës së zorrëve.
Rëndësia e laktozës si burim karboni në mjedisin MacConkey për mikrobiologjinë.
Laktoza është një sheqer i pranishëm në qumësht dhe është një burim i rëndësishëm karboni në mjedisin MacConkey për mikrobiologjinë. Ky mjedis selektiv dhe diferencial përdoret gjerësisht për izolimin dhe identifikimin e baktereve Gram-negative, veçanërisht atyre të familjes Enterobacteriaceae.
Prania e laktozës në mjedisin MacConkey na lejon të bëjmë dallimin midis baktereve të afta për të fermentuar këtë sheqer dhe atyre që nuk e bëjnë. Bakteret që fermentojnë laktozën prodhojnë acid laktik si nënprodukt, i cili çon në një ndryshim në pH-in e mjedisit. Kjo rezulton në formimin e kolonive rozë ose të kuqërremta, duke treguar fermentimin e laktozës, ndërsa bakteret që nuk fermentojnë laktozën formojnë koloni pa ngjyrë.
Për më tepër, prania e kripërave biliare dhe vjollcës kristalore në mjedisin MacConkey pengon rritjen e baktereve Gram-pozitive, duke e bërë atë selektiv për bakteret Gram-negative. Kjo është e rëndësishme për izolimin dhe identifikimin e patogjenëve të tillë si Escherichia coli, Salmonella dhe Shigella, të cilët shpesh shoqërohen me infeksione të zorrëve.
Agari MacConkey: Baza, përgatitja dhe përdorimet
O Agar MacConkey Është një mjedis i ngurtë që lejon izolimin ekskluziv të baktereve Gram-negative. Prandaj, është një mjedis selektiv dhe gjithashtu lejon dallimin midis bacileve që fermentojnë laktozën dhe bacileve që nuk fermentojnë, duke e bërë atë një mjedis diferencial. Është një nga mjediset e kulturës më të përdorura gjerësisht në një laborator mikrobiologjik.
Ky mjedis përdoret kryesisht për izolimin e bacileve Gram-negative që i përkasin familjes Enterobacteriaceae , duke përfshirë speciet oportuniste dhe enteropatogjene.
Mund të përdoret gjithashtu për të izoluar bacilet e tjera enterike që banojnë në traktin gastrointestinal, por nuk i përkasin Enterobacteriaceae Si Aeromonas sp, Plesiomonas sp, midis të tjerëve.
Së fundmi, mund të izolojë bacile të tjera Gram-negative, glukozë jo-fermentuese, që gjenden në mjedis, në ujë ose tokë, por që ndonjëherë mund të jenë patogjenë oportunistë si p.sh. Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaldades sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia , ndër të tjera.
Fundacao
Agar MacConkey
Baza e këtij mediumi mund të shpjegohet përmes përshkrimit të përbërësve të tij, pasi secili prej tyre ka një objektiv që përcakton vetitë e tij.
Kripërat biliare dhe vjollca kristalore
Në këtë kuptim, agari MacConkey ka një përbërje komplekse. Para së gjithash, ai përmban kripëra biliare dhe vjollcë kristalore.
Këta elementë pengojnë rritjen e baktereve Gram-pozitive dhe disa bacileve Gram-negative të rrepta. Nga ana tjetër, ato favorizojnë rritjen e bacileve Gram-negative, të cilat nuk ndikohen nga këto substanca. Prandaj, është një mjedis selektiv.
Thuhet se është paksa selektiv në krahasim me mjediset e tjera që pengojnë gjithashtu rritjen e baktereve Gram-pozitive dhe shumicës së baktereve Gram-negative.
Është jashtëzakonisht selektiv për një gjini të veçantë, si agari TCBS për izolimin e Vibrio cholerae dhe specie të tjera të ngjashme halofile dhe alkafile.
Peptone, polipetone dhe laktozë
Ai përmban substanca që sigurojnë lëndët ushqyese të nevojshme për mikroorganizmat që zhvillohen në këtë mjedis, siç janë peptonet, polipetonet dhe laktoza.
Laktoza është pika kyçe që mediumi të jetë një medium diferencial, pasi mikroorganizmat që kanë aftësinë për të fermentuar laktozën do të zhvillojnë koloni të forta rozë.
Disa baktere mund ta fermentojnë laktozën ngadalë ose dobët, duke zhvilluar koloni rozë të zbehtë dhe duke mbetur pozitive ndaj laktozës.
Ato që nuk e fermentojnë laktozën i përdorin peptonet si burim energjie, duke prodhuar amoniak, duke e alkalizuar mjedisin. Prandaj, kolonitë origjinale janë pa ngjyrë ose transparente.
Treguesi i pH-it
Ndryshimi i ngjyrës arrihet nëpërmjet një përbërësi tjetër thelbësor që gjendet në agarin MacConkey. Ky përbërës është treguesi i pH-it, i cili në këtë rast është i kuq neutral.
Fermentimi i laktozës rezulton në prodhimin e acideve të përziera. Këto e acidifikojnë mjedisin në një pH nën 6,8.
Kjo bën që treguesi i pH-it të kthehet në një rozë të thellë. Intensiteti i ngjyrës mund të ndryshojë në varësi të pH-it përfundimtar.
Ujë i distiluar, klorur natriumi dhe agar
Nga ana tjetër, ai përmban ujë të distiluar dhe klorur natriumi, të cilët i sigurojnë mjedisit hidratim dhe ekuilibër osmotik. Së fundmi, mjedisi përmban agar, i cili është baza që siguron konsistencën e mjedisit të ngurtë.
Mjedisi i përgatitur i agarit MacConkey duhet të ketë një pH përfundimtar të rregulluar në 7,1 ± 0,2.
Përgatitja
Për një litër agar MacConkey, peshoni 50 gramë të mjedisit të dehidratuar, pastaj vendoseni në një balonë dhe treteni në një litër ujë të distiluar. Pasi të pushojë për 10 minuta, ngroheni, duke e përzier vazhdimisht, derisa të ziejë për 1 minutë.
Fibra vendoset më pas në autoklavë dhe sterilizohet në 121°C për 20 minuta. Pasi të ketë kaluar koha, hiqet nga autoklava dhe lihet të ftohet në 45°C dhe më pas hidhet në enë sterile Petri në një kapuç laminar ose përpara një flakëtari Bunsen.
Lëreni të ngurtësohet dhe ruajeni në një enë të përmbysur dhe futeni në frigorifer në 2-8°C deri në përdorim.
Për të përftuar një agar MacConkey që pengon efektin e grumbullimit në tufë të prodhuar nga gjinia Proteus, përdoret një agar MacConkey me pak kripë.
Përdorimet e agarit konvencional MacConkey
Agari MacConkey përfshihet në të gjitha setet e mediave të kulturës të projektuara për kultivimin e mostrave klinike të marra në laborator. Është gjithashtu i dobishëm në mikrobiologjinë ushqimore dhe mjedisore.
Shumëllojshmëria e bacileve Gram-negative që rriten në këtë mjedis shpreh karakteristika fenotipike që ndihmojnë në diagnozën e supozuar të specieve në fjalë. Për shembull, madhësia, ngjyra, konsistenca dhe aroma e kolonive janë disa nga karakteristikat që mund ta orientojnë këtë.
Në këtë mjedis, speciet e Escherichia coli , Klebsiella sp. e Enterobacter sp prodhojnë koloni të forta rozë të rrethuara nga një zonë me biliare të precipituar.
Ndërkohë, bakteret si Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp dhe Hafnia sp mund të duket pa ngjyrë pas 24 orësh ose rozë e zbehtë pas 24 deri në 48 orësh.
Në mënyrë të ngjashme, gjinitë Proteus, Edwadsiella, Salmonella dhe Shigella prodhojnë koloni pa ngjyrë ose transparente.
Variante të tjera të agarit MacConkey
Ekzistojnë variante të tjera të agarit MacConkey që kanë qëllime specifike. Ato përmenden më poshtë:
Agar MacConkey me sorbitol
Ky mjedis është projektuar për të dalluar llojin enteropatogjen ( Escherichia coli enterojemoragjike O157: H7) nga pjesa tjetër e llojeve Escherichia coli.
Ky medium e ndryshon karbohidratin nga laktozë në sorbitol. As shtamet enterohemorragjike të E. coli O157:H7 ndryshojnë nga të tjerët sepse nuk e fermentojnë sorbitolin dhe për këtë arsye përftohen koloni transparente; megjithatë, llojet e mbetura të E. coli fermenton sorbitolin dhe kolonitë janë rozë të forta.
Agar MacConkey pa vjollcë kristalore ose kripë
Ky agar ndryshon shumë nga agari klasik MacConkey në atë që nuk përmban vjollcë kristalore dhe bakteret Gram-pozitive mund të rriten.
Nga ana tjetër, mungesa e kripës pengon shfaqjen e tufave në agar të prodhuara nga disa bacile enterike, të tilla si ato të gjinisë Proteus, duke lehtësuar kështu izolimin e të gjitha baktereve të pranishme, përfshirë bakteret Gram-pozitive.
Agar MacConkey me cefoperazon
Ky variant i agarit MacConkey u krijua për të izoluar fillimisht Laribacter hongkongensis dhe më vonë kuptoi se ishte e dobishme për izolimin Arcobacter butzleri. Të dyja janë bacile Gram-negative pak të lakuara, rezistente ndaj cefoperazonit.
Këto baktere janë implikuar kohët e fundit si shkaktarë të gastroenteritit të fituar dhe diarresë tek individët aziatikë dhe evropianë, duke i paraqitur ato si dy patogjenë të fuqishëm në zhvillim.
Antibiotiku pengon florën që shoqëron traktin gastrointestinal, gjë që favorizon zhvillimin e këtyre baktereve, duke i penguar ato të kalojnë pa u vënë re, pasi atyre u duhen 72 orë për t'u rritur.
Agar MacConkey i përgatitur me 10% v/v ujë deti
Ky variant është i dobishëm për vlerësimin e treguesve të shëndetit bakterial të kontaminimit fekal, duke përfshirë koliformet totale dhe koliformet fekale në ujërat e kripura rekreative (plazhe dhe gjire).
Cortez et al. në vitin 2013 demonstruan se mjedisi i përgatitur në këtë mënyrë rrit ndjeshëm rikuperimin e këtyre mikroorganizmave në mjedisin e kripur, krahasuar me përdorimin e agarit MacConkey të përgatitur me ujë të distiluar.
Kjo ndodh sepse mjedisi i modifikuar stimulon fiziologjikisht rritjen e baktereve në një gjendje latente "të qëndrueshme, por jo të kultivueshme"; prandaj, ato nuk janë të rikuperueshme në mjedise konvencionale.
Referencat
- Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Përdorimi i agarit cefoperazon MacConkey për izolimin selektiv të Laribacter hongkongensis .J Clin Microbiol Me 2003; 41 (10): 4839-41.
- «Agar MacConkey». Wikipedia, Enciklopedia e Lirë 4 Prill 2018, ora 18:16 UTC. 29 Dhjetor 2018, ora 15:22 en.wikipedia.org
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnoza Mikrobiologjike e Bailey & Scott. Botimi i 12-të. Argjentina Editoriale Panamericana SA
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnoza mikrobiologjike (botimi i 5-të). Argjentinë, Editorial Panamericana SA
- Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Efekti i mediave të kulturës të përgatitura me ujë deti në treguesit shëndetësorë në ujërat detare të spa-ve Chichiriviche, shteti Falcón, Venezuelë. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
- García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologjia klinike praktike. Universiteti i Cádiz, botimi i 2-të. Shërbimi i Publikimeve UCA.