Гимза бојење је техника која се користи у микробиологији и цитогенетици за бојење ћелија и ткива, омогућавајући визуелизацију специфичних структура. Развијено од стране Густава Гимзе 1904. године, Гимза бојење је једна од најчешће коришћених техника у дијагностичким лабораторијама за идентификацију микроорганизама, паразита и хромозома.
Гимза бојење захтева материјале као што су Гимза боја, метанол и дестилована вода. Техника подразумева фиксирање ћелија на стаклене плочице, након чега следи наношење Гимза боје разблажене у метанолу. Након бојења, ћелије се испирају дестилованом водом и посматрају под микроскопом.
Главне примене бојења по Гимзи укључују идентификацију патогена као што су плазмодијум (који изазива маларију), трипаносом (који изазива Шагасову болест) и бактерије као што су хламидија и рикеција. Штавише, бојење по Гимзи се широко користи у анализи хромозома за дијагностиковање генетских болести и идентификацију хромозомских абнормалности.
Корак по корак водич за ефикасно извођење Гимза бојења.
Гимза бојење је суштинска техника у клиничким анализама и научним истраживачким лабораторијама. Омогућава визуелизацију различитих ћелијских структура, као што су хромозоми, паразити и бактерије, кроз специфично бојење њихових компоненти. У овом чланку ћемо корак по корак објаснити како ефикасно извршити Гимза бојење.
Корак 1: Припремите Гимза раствор, који се може купити готов или припремити од праха. Раствор треба разблажити у дестилованој води у односу који препоручује произвођач.
Корак 2: Фиксирајте узорак на стаклену плочицу помоћу топлоте или фиксатива, као што је етил алкохол. Уверите се да је узорак чврсто фиксиран како бисте избегли деформацију током бојења.
Корак 3: Прекријте фиксирани узорак Гимзиним раствором, водећи рачуна да је цела површина равномерно покривена. Оставите предметно стакло у контакту са раствором одређени временски период, обично између 10 и 30 минута.
Корак 4: Исперите предметно стакло под млазом воде да бисте уклонили вишак мрље. Нежно осушите предметно стакло упијајућим папиром или компримованим ваздухом.
Корак 5: Посматрајте обојени узорак под светлосним микроскопом користећи одговарајуће увећавајуће објективе. Бојење по Гимзи ће омогућити визуелизацију ћелијских структура са већом јасноћом и контрастом.
Гимза бојење се широко користи у различитим областима биологије и медицине, као што су дијагностиковање паразитских болести, анализа крвних зрнаца и идентификација инфективних агенаса. Правилним праћењем горе описаних корака могу се добити тачни и поуздани резултати Гимза бојења.
Разумите процес бојења по Гимзи и како он детаљно функционише.
Гимза бојење је метода која се широко користи у микробиолошким и хематолошким лабораторијама за визуелизацију ћелијских структура и откривање патогена. Развио је Густав Гимза 1902. године, а ова метода се заснива на афинитету базних и киселих боја за различите ћелијске компоненте.
Материјали потребни за бојење по Гимзи укључују Гимзину боју, растворе за фиксацију и одбојавање, предметна стакла, покривна стакла и микроскоп. Гимзина боја је мешавина метилен плавог, еозина и глицерина и користи се за бојење нуклеарних и цитоплазматских структура ћелија.
Техника бојења по Гимзи подразумева фиксирање ћелија на предметно стакло, након чега следи наношење Гимзине боје током одређеног временског периода. Након бојења, ћелије се испирају дестилованом водом и обезбојавају како би се уклонио вишак боје. На крају, препарати се суше и посматрају под микроскопом.
Главна употреба Гимзиног бојења укључује идентификацију паразита који се преносе крвљу, као што је Plasmodium spp., и диференцијацију крвних ћелија у размазима периферне крви. Штавише, ова метода се широко користи у идентификацији бактерија, вируса и других патогена у клиничким узорцима.
Његово деловање се заснива на афинитету базних и киселих боја са различитим ћелијским компонентама, пружајући јасне и детаљне слике под микроскопом.
Разумети поступак патолошке анатомије са Гимза бојењем за клиничку анализу.
Гимза бојење је техника која се користи у анатомској патологији за клиничку анализу узорака ткива. Развио ју је немачки научник Густав Гимза, а ова боја се широко користи због своје способности да истакне различите ћелијске компоненте, као што су језгра, хромозоми и паразити.
Гимза бојење захтева низ материјала, укључујући Гимза боју, метиловани алкохол, физиолошки раствор и стаклене плочице. Поступак укључује фиксирање узорка у метилованом алкохолу, наношење Гимза боје и испирање физиолошким раствором. Након бојења, узорци се посматрају под микроскопом ради анализе.
Гимза бојење се широко користи у лабораторијама за анатомску патологију за идентификацију различитих патологија, као што су паразитске инфекције, леукемија и аутоимуне болести. Техника омогућава детаљну анализу ћелијских структура, олакшавајући клиничку дијагнозу и праћење лечења.
Његова употреба је неопходна за дијагнозу и лечење разних болести, што је чини незаменљивом техником за здравствене раднике.
Идентификација боје која се користи за бојење крвног размаза.
Гимза бојење је уобичајена метода која се користи за посматрање различитих врста крвних зрнаца у крвном размазу. Главна боја која се користи у овом процесу је Гимза боја, што је смеша метилен плавог, еозина и азура Б. Ова боја је посебно ефикасна у бојењу структура као што су ћелијска језгра, хромозоми и цитоплазматске инклузије.
Гимза боја: подлога, материјали, техника и употреба
O Гимза боја је врста бојења клиничких узорака, заснована на мешавини киселих и базних боја. Њено стварање је инспирисано радом Романовског, где га је Густав Гимза, немачки хемичар и бактериолог, усавршио додавањем глицерола ради стабилизације једињења.
Промене направљене у оригиналној техници Романовског омогућиле су нам да значајно побољшамо микроскопска посматрања; стога је техника названа Гимза бојење.
Пошто је то једноставна, веома функционална и економична техника, тренутно се широко користи у клиничкој лабораторији за хематолошке брисеве, узорке коштане сржи и пресеке ткива.
Гимзина техника бојења је веома корисна за цитолошке студије, јер омогућава посматрање специфичних ћелијских структура. Ова техника боји цитоплазме, језгра, нуклеоле, вакуоле и грануле ћелија, омогућавајући разликовање финих трагова хроматина.
Штавише, могу се открити значајне промене у величини, облику или боји једра, где је могуће визуализовати губитак односа једро-цитоплазма.
С друге стране, омогућава идентификацију незрелих ћелија у коштаној сржи и периферној крви, што је важно за дијагнозу озбиљних болести попут леукемије. Такође омогућава детекцију хемопаразита, екстрацелуларних и интрацелуларних бактерија, гљивица и других патогена.
У цитогенетици се широко користи, јер је могуће проучавати ћелијску митозу.
Подлога за мрљу од Гимзе
Боје типа Романовског користе контраст између киселих и базних боја за бојење базних и киселих структура, респективно. Као што се може видети, киселе боје имају афинитет за бојење базних структура и обрнуто.
Основна боја која се користи је метиленско плаво и његови оксидовани деривати (Азур А и Азур Б), док је кисела боја еозин.
Киселе структуре ћелија су нуклеинске киселине, сегментиране базофилне грануле, између осталог, па су обојене метилен плавом бојом.
У истом смислу, основне структуре ћелија су хемоглобин и неке грануле, попут оних садржаних у сегментираним еозинофилима, између осталог; Оне ће бити обојене еозином.
С друге стране, пошто су метиленско плава и небеско плава окарактерисане као метахроматске боје, оне могу дати променљив тон различитим структурама у складу са полианионским наелектрисањем које поседују.
Овако стратешка комбинација базних и киселих боја може развити широк спектар боја, у складу са биохемијским карактеристикама сваке структуре, у распону од нијанси бледоплаве, тамноплаве, лила и љубичасте у случају киселих структура.
Иако је боја коју даје еозин стабилнија, он ствара боје између црвенкасто-наранџасте и лосос боје.
Материјали
Материјали за припрему основног раствора
Припрема основног раствора захтева мерење 600 мг Гимза праха за бојење, мерење 500 мл метил алкохола без ацетона и 50 мл неутралног глицерина.
Метод припреме основног раствора
Сипајте измерени Гимза прах у авану. Ако постоје грудвице, треба их самлети. Затим додајте значајну количину измереног глицерина и добро промешајте. Сипајте добијену смесу у веома чисту ћилибарску боцу.
Преостали глицерин се додаје у малтер. Поново промешајте да бисте уклонили преосталу боју која се залепила за зидове малтера, а затим га сипајте у исту боцу.
Боца се покрива и транспортује 2 сата у воденом купатилу на 55 °C. Док је у воденом купатилу, лагано мешајте смешу сваких пола сата.
Смеша се затим остави да се охлади пре додавања алкохола. Део измереног алкохола се прво додаје у малтер да би се завршило испирање преостале боје, а затим се додаје у смешу заједно са преосталим алкохолом.
Овај препарат треба оставити да сазри најмање 2 недеље. Део који се користи у матичној течности треба филтрирати.
Да би се избегла контаминација препарата, препоручује се да се део који ће се стално користити пребаци у малу ћилибарну бочицу са капалицом. Допуњавати сваки пут када се реагенс потроши.
Материјали за припрему пуферског раствора
С друге стране, пуферски раствор при pH 7,2 се припрема на следећи начин:
6,77 г натријум фосфата (безводног) (тежина NaHPO 4 ), 2,59 г калијум дихидроген фосфата (KH 2 PO 4 ), и дестилована вода до 1000 мл.
Завршна припрема боје
Да би се припремио коначни раствор за бојење, измерити 2 мл филтрираног основног раствора и помешати га са 6 мл пуферског раствора. Смеша се промућка.
Једна релевантна чињеница коју треба узети у обзир јесте да се технике припреме боје могу разликовати у зависности од комерцијалне инсталације.
Додатни материјали потребни за израду боје
Поред описаних материјала, морају постојати обојени мостови, мајице са водом или тампон за прање одеће, чаршави са предметима или навлакама, тајмер за контролу времена бојења и упијање папира или неког материјала који служи за сушење (газа или памук).
Техника
Процес бојења
1) Пре бојења, узорак мора бити распоређен на чистом предметном стакленику.
Узорци могу бити крв, коштана срж, хистолошки пресеци ткива или цервикално-вагинални узорци. Препоручује се да пасте буду танке и да се оставe да се осуше 1 до 2 сата пре бојења.
2) На мосту за бојење, сви обојени листови су постављени. Увек ради истим редоследом, а сваки лист је јасно означен.
3) Нанесите неколико капи 100% метил алкохола (метанола) на размаз и оставите 3 до 5 минута да се узорак фиксира и дехидрира.
4) Одбаците метанол присутан на листу и оставите га да се осуши на ваздуху.
5) Када се осуши, додајте коначни раствор за бојење капалицом док не прекријете цео лист. Оставите да делује 15 минута. Неки аутори препоручују до 25 минута. Зависи од продавнице.
6) Оцедите мрљу и исперите размаз дестилованом водом или пуферским раствором у 7.2.
7) На упијајућем папиру оставите листове да се осуше на ваздуху, поређани вертикално уз помоћ потпоре.
8) Обришите задњу страну предметног стакла газом или памучним штапићем умоченим у алкохол да бисте уклонили боју.
Комуналне услуге
Гимза техника бојења се користи у неколико области, укључујући: хематологију, микологију, бактериологију, паразитологију, цитологију и цитогенетику.
Хематологија
Ово је најчешћа употреба ове методе бојења. Њиме се може идентификовати свака ћелија присутна у узорцима коштане сржи или периферне крви. Поред процене броја ћелија у свакој серији, може се открити и леукоцитоза или леукопенија, тромбоцитопенија итд.
Пошто је осетљив на идентификацију незрелих ћелија, користан је у дијагностиковању акутне или хроничне леукемије. Такође може да дијагностикује анемије као што је, између осталог, анемија српастих ћелија.
Микологија
У овој области је уобичајено користити Хистопласма цапсулатум (интраћелијска диморфна гљивица) у узорцима ткива.
Бактериологија
У хематолошким брисевима обојеним Гимзом, могуће је открити Борелије код пацијената са болешћу која се назива рецидивирајућа грозница. Спирохете се обилно примећују међу еритроцитима у узорцима прикупљеним на врхунцу грознице.
Такође је могуће визуализовати интрацелуларне бактерије као Рикеција e Цхламидиа трацхоматис у зараженим ћелијама.
Паразитологија
У области паразитологије, Гимза бојење је омогућило дијагнозу паразитских болести као што су маларија, Шагасова болест и лајшманијаза.
Код прва два паразита, Плазмодијум e Трипаносома крузи, респективно, могу се видети у периферној крви инфицираних пацијената и могу се наћи у различитим фазама у зависности од стадијума болести.
Да би се побољшала претрага паразита у крви, препоручује се употреба Гимза боје помешане са Мај-Гринвалд бојом.
Слично томе, кожна лајшманијаза може се дијагностиковати проценом узорака биопсије коже обојених Гимзом на месту где се паразит налази.
Цитологиа
Гимза бојење се такође користи за цитолошку студију ендоцервикалних узорака, иако није најчешће коришћена техника за ову сврху.
Међутим, у случајевима оскудице ресурса, може се користити, нудећи сличну функционалност као Папа тест и по нижој цени. Међутим, захтева стручност прегледача.
Цитогенетика
Кључна карактеристика Гимзиног бојења је његова способност да се снажно веже за регионе ДНК богате аденином и тимином. Ово омогућава визуелизацију ДНК током ћелијске митозе, у различитим стањима кондензације.
Ове студије су неопходне за откривање хроматских аберација, као што су дупликације, делеције или транслокације различитих региона хромозома.
Истраживање које показује ефикасност бојења по Гимзи
Канова и др. (2016) су упоредили три технике бојења за дијагнозу кожне лајшманијазе.
У ту сврху коришћени су узорци добијени од експерименталне животиње ( Мезокрисетус ауратус) експериментално инокулисано лајшманијама.
Аутори су показали да је бојење по Гимзи супериорније од бојења по Пап-март®-у и Гафнијевој методи. Стога су сматрали да је бојење по Гимзи идеално за дијагностиковање кожне лајшманијазе.
Одлични резултати које су аутори добили последица су чињенице да комбинација боја које чине Гимза смешу има неопходне услове за стварање повољног контраста, омогућавајући јасно разликовање структура амастигота, како интра- тако и екстрацелуларно.
И друге технике (Pap-mart® и Gaffney) су то постигле, али на слабији начин и стога теже за визуелизацију. Због тога се за паразитолошку дијагнозу лајшманијазе препоручује бојење по Гимзи.
Слично томе, студија коју су спровели Рамирез и др. (1994) проценила је валидност Гимза и Лендрум бојења у коњунктивалним брисевима за идентификацију Цхламидиа трацхоматис.
Аутори су утврдили да бојење по Гимзи и Ледруму имају исту специфичност, али се показало да је Гимза осетљивије.
Ово објашњава зашто се Гимза бојење тренутно најчешће користи за дијагнозу хламидијских инфекција, посебно у земљама са ограниченим ресурсима.
Препоруке за добро бојење
Листове не треба сушити пребрзо. Требало би да сачекате одговарајуће време да се осуше на ваздуху. Отприлике 2 сата.
За најбоље резултате, обојите одмах након 2 сата.
Да би се мрље боље стврднуле и уклопиле, узорак треба распоредити по листу у танком, равномерном слоју.
Пожељан узорак крви је капиларни, јер се размаз узима директно из капи крви и стога узорак не садржи никакве адитиве, што погодује очувању ћелијских структура.
Међутим, ако се користи венска крв, као антикоагулант треба користити ЕДТА, а не хепарин, јер овај други обично деформише ћелије.
Уобичајене грешке у бојењу по Гимзи
Приликом коришћења ове технике бојења, могу се направити грешке. Оне се манифестују наглим променама нијансе структуре.
Изузетно плава боја
Може бити због:
- Веома дебеле мрље
- Прекорачење времена бојења
- Недовољно прати.
- Употреба реагенса знатно изнад неутралног (алкалног) pH.
Под овим условима, боје следећих структура су искривљене, тако да ће еритроцити, уместо да обоје лосос-ружичасто, постати зелени, еозинофилне грануле, које би требало да буду обојене цигланоцрвено, постаће плавичасте или сиве, и тако даље. одступање од уобичајених нијанси.
Превише ружичаста боја
Може бити због:
- Недовољно време бојења.
- Дуготрајно или прекомерно прање.
- Није баш суво
- Употреба веома киселих реагенса.
У овом конкретном случају, структуре које су нормално обојене плавом бојом биће једва видљиве, док ће структуре које су обојене ружичастом бојом имати веома преувеличане нијансе.
Пример: Црвена крвна зрнца ће изгледати јарко црвено или тамно наранџасто, нуклеарни хроматин ће изгледати бледо ружичасто, а еозинофилне грануле ће се обојити јарко црвено.
Присуство преципитата у размазу
Узроци могу бити:
- Користите прљаве или лоше опране чаршаве.
- Не дозволите да се мрља добро осуши.
- Оставите раствор за фиксирање дуже време.
- Неправилно прање на крају бојења.
- Неадекватна филтрација или никаква филтрација боје која се користи.
Присуство морфолошких артефаката
Морфолошки артефакти се могу појавити у мрљама, што отежава визуелизацију и тумачење структура. То је зато што:
- Врста антикоагуланса који се користи, као што је хепарин.
- Употреба прљавих, оштећених или масних листова.
Режим складиштења
Након припреме, боју треба чувати на собној температури (15-25°C) како би се спречило таложење боје. Треба је чувати у добро затвореној посуди од ћилибара.
Референце
- Канова Д, Брито Е и Симонс М. Евалуација техника бојења за дијагнозу кожне лајшманијазе. Салус . 2016; 20 (2): 24-29.
- ПанРеац Апплицхем реагенси ИТВ. Бојење по Гиемзи. Верзија 2: ЈМБЈУЛ17 ЦЕИВД10ЕС. Кастелар дел Валес, Шпанија.
- Кларк Г. Поступци бојења (1981), 4. Вилијамс и Вилкинс.
- Примењена клиничка хемија. Гимза бојење за дијагностику ин витро Дистрибутер: cromakit.es
- Рамирез И, Мехија М, Гарсија де ла Рива Ј, Хермес Ф и Грациозо К. Валидност Гимза и Лендрум бојења у коњунктивалним размазима за идентификацију Цхламидиа трацхоматис. Санит Панам Боул. 1994; 116 (3): 212-216.
- Цасас-Ринцон Г. Општа микологија. 1994. 2нд Ед. Централни универзитет Венецуеле, Библиотечка издања. Венецуела, Каракас
- „Бојење по Гимзи.“ Википедија, Слободна енциклопедија 1. септембар 2017, у 01:02 UTC. 6. децембар 2018, en.wikipedia.org.