Термин „МИО медијум“ односи се на подлогу за култивацију познату као Минимални минерални медијум, која је заснована на саставу есенцијалних хранљивих материја за раст микроорганизама у лабораторији. Ова подлога је развијена да обезбеди идеалне услове за раст и развој бактерија, гљивица и других микроорганизама у научним студијама. У овом чланку ћемо размотрити основе, припрему и главне употребе МИО медијума у микробиологији.
Која је употреба Мио медијума у кувању и припреми пића?
Мио медиум је свестрани састојак који се може користити на разне начине у кувању и припреми пића. Направљен 2011. године од стране компаније Крафт Фудс, Мио медиум је течни концентрат који додаје укус и боју јелима и пићима.
У кувању, Мио сос се може користити за додавање посебног додира маринадама, сосовима, супама, па чак и десертима. Његова практичност и свестраност чине га незаобилазним предметом у кухињи кувара и љубитеља хране.
У припреми напитака, Мио се широко користи за ароматизовање воде, сокова, чајева, па чак и алкохолних пића. Са само неколико капи, можете једноставно пиће претворити у јединствено сензорно искуство.
Мио се такође може користити за прављење креативних и укусних десерта, као што су сладолед, желатин и мусови. Његова разноликост укуса вам омогућава да истражите различите комбинације и изненадите своје непце.
Укратко, Мио је савезник кувара и бармена у креирању укусних и креативних јела и пића. Његова практичност и свестраност чине га незаобилазним састојком у свакој кухињи или бару. Пробајте га и откријте бескрајне могућности које Мио може да понуди!
Употреба индол теста у идентификацији бактерија: поступак и значај у микробиологији.
Индолски тест је метода која се користи за идентификацију бактерија на основу производње ензима индола. Овај ензим је способан да метаболише триптофан у индол, сирћетну киселину и амонијак. Техника се изводи у специфичној подлози за култивацију, као што је подлога индола, орнитина и покретљивости (MIO), која се користи за разликовање грам-негативних бактерија, као што је E. coli, од других врста.
Да би се извршио индолски тест, бактеријска култура се инокулира у MIO медијум и инкубира на одговарајућој температури. Након инкубације, додаје се Ковачев реагенс, који реагује са индолом који производе бактерије, формирајући ружичасти комплекс. Присуство ове боје указује на производњу индола и, последично, на присуство ензима одговорног за његову производњу.
Индолни тест је кључан у микробиологији јер омогућава идентификацију бактерија на основу њихових биохемијских карактеристика. Штавише, то је брза и ефикасна метода за диференцијацију бактеријских врста, што помаже у дијагнози инфекција и избору одговарајућег лечења.
Корак по корак водич за ефикасно и прецизно извођење индол теста.
Да бисте ефикасно и прецизно извршили индолски тест, пратите ове кораке:
Корак 1: Припремите MIO медијум према упутствима произвођача. Обавезно правилно пратите пропорције и услове стерилизације.
Корак 2: Након припреме MIO подлоге, додајте узорак који желите да тестирате у епрувету. Уверите се да је узорак добро измешан.
Корак 3: Инкубирајте епрувету под оптималним температурним и временским условима како препоручује произвођач MIO подлоге.
Корак 4: Након периода инкубације, додајте неколико капи индол реагенса у епрувету. Пажљиво посматрајте сваку промену боје или стварање прстена на површини подлоге.
Корак 5: Упоредите добијене резултате са табелом за тумачење резултата индолског теста. Забележите резултате прецизно и детаљно.
Индол тест се широко користи у микробиологији за идентификацију бактерија способних да производе индол из аминокиселине триптофан. То је ефикасна и прецизна метода за разликовање различитих врста бактерија на основу њихових метаболичких карактеристика.
Индол у микробиологији: дефиниција и значај у идентификацији бактерија.
Индол у микробиологији: је органско једињење које могу да произведу неке бактерије током метаболизма аминокиселина. Способност бактерије да производи индол може бити важан критеријум у њеној идентификацији и класификацији.
Значај у идентификацији бактерија: Производња индола од стране бактерија може се детектовати специфичним биохемијским тестовима, као што је Ковачов тест. Присуство или одсуство индола може помоћи у разликовању различитих бактеријских родова и врста, што помаже у микробиолошкој идентификацији и класификацији.
MIO медијум: основа, припрема и употреба.
O Пола милиона (Индол-орнитин медијум) је медијум за култивацију који се користи за детекцију производње индола и способности бактерије да метаболише орнитин. Овај медијум садржи специфичне хранљиве материје које подстичу раст индол-позитивних бактерија.
Припрема MIO медијума: Припрема MIO подлоге подразумева комбиновање састојака као што су пептон, натријум хлорид, екстракт квасца, агар и друге компоненте које обезбеђују хранљиве материје неопходне за раст бактерија. Подлога се затим стерилише и очвршћава у Петријевим шољама за употребу у тестовима идентификације бактерија.
Употреба MIO медијума: MIO медијум се често користи у микробиолошким лабораторијама за идентификацију бактерија на основу њихове производње индола и метаболизма орнитина. Посматрајући резултате тестова изведених са MIO медијумом, микробиолози могу класификовати и разликовати бактерије на основу њихових биохемијских карактеристика.
MIO медијум: основа, припрема и употреба
O пола милиона је биохемијски тест који се користи за идентификацију бактеријских врста које припадају породици Enterobacteriaceae. Веома је хранљив и састоји се од глукозе, екстракта квасца, пептона, триптеина, L-орнитин хидрохлорида, бромокрезол љубичасте боје и агара.
Значење акронима (MIO) описује сваки од параметара који се могу посматрати у овој подлози: покретљивост, индол и орнитин. Покретљивост је способност микроорганизма да се креће уз присуство флагела. Да би се ово својство посматрало, конзистенција подлоге мора бити получврста, тако да препарат садржи мање агара.
Производња индола показује присуство ензима триптофаназе, који делује на аминокиселину триптофан. Потребно је користити реагенс за откривање како би производња индола била видљива.
Коначно, орнитин одређује да ли је бактерија способна да декарбоксилише аминокиселину, односно да ли има ензим орнитин декарбоксилазу.
Фундацао
Пептон, екстракт квасца и триптин
Ови елементи доприносе нутритивној вредности ове подлоге. Они служе као извор хранљивих материја и есенцијалних аминокиселина за раст бактерија.
Штавише, триптеин је извор триптофана што показује присуство ензима триптофаназе, који разграђује триптофан редуктивном деаминацијом која ослобађа индол, пирувинску киселину, амонијак и енергију.
Индол је безбојан, па се његово присуство открива додатком пет капи Ерлиховог или Ковачевог реагенса, који оба садрже п-диметиламинобензалдехид.
Алдехидна група овог једињења реагује са индолом, стварајући фуксија црвени производ у облику прстена на површини агара.
Било који траг боје треба сматрати позитивним тестом. Тест треба одмах очитати; временом боја бледи.
С друге стране, овај тест треба открити након снимања резултата покретљивости и декарбоксилације орнитина.
Тумачење
Позитиван тест: формирање фуксија црвеног прстена додавањем капи Ковачевог реагенса.
Негативан тест: нема формирања прстенова.
Покретљивост
Способност бактерија да се крећу биће доказана ако се примети облачно окружење или ако се око почетне инокулације шири дебела линија раста.
Негативан тест покретљивости биће доказан посматрањем танке линије раста, а све око ње биће без раста.
Важно је да се покретљивост очита пре развијања индола, јер агрегат реагенса замућује целу подлогу.
Код покретних, али споро растућих бактерија, тешко је показати њихову покретљивост овом подлогом. У овом случају, препоручује се употреба других тестова или метода, као што су подлога за покретљивост или метода капљице привеска.
Глукоза
Глукоза је ферментабилни угљени хидрат који, поред тога што обезбеђује енергију, закисељава медијум, што је неопходан услов за декарбоксилацију аминокиселине орнитин.
Ферментација глукозе мора увек да се одвија, на основу принципа да све бактерије које припадају породици Enterobacteriaceae ферментишу глукозу.
Л-орнитин
Ако бактерије производе ензим орнитин декарбоксилазу, он може деловати чим се медијум закисели ферментацијом глукозе.
Ензим орнитин декарбоксилаза делује на карбоксилну групу аминокиселине, производећи амин назван путрезин, који поново алкализира медијум.
Овај тест треба очитати након 24 сата инкубације, јер ако покушате да га очитате раније, можете погрешно протумачити тест са лажно негативним резултатом.
Запамтите да је прва реакција која се дешава ферментација глукозе, тако да подлога у почетку постаје жута (првих 10 до 12 сати). Ако до декарбоксилације орнитина дође касније, подлога ће постати љубичаста.
Важно је интерпретирати тест декарбоксилације орнитина пре откривања индола, јер агрегат Ковачевог реагенса мења боју подлоге.
Тумачење
Негативан тест: жута или средње жута позадина.
Позитиван тест: пола потпуно љубичаста.
pH индикатор
У овом случају се користи бромокрезол љубичаста боја; она је одговорна за детекцију промена pH вредности средине. Када се закисели, индикатор постаје жут, а када се алкализира, постаје љубичаст.
Техника сетве и развоја
За засејавање MIO подлоге користи се игла или равна петља и њоме се сакупља део колоније који се испитује.
Дубока пункција се прави у средњој предњој доњој шупљој вени у правој линији. Није препоручљиво изводити двоструку пункцију, јер може дати лажан утисак покретљивости ако се пункције не изврше на истом месту.
Инкубирати 24 до 48 сати на 37°C аеробно. Посматрати резултате овим редоследом: покретљивост, декарбоксилација орнитина и коначно откривање индола.
Препоручљиво је асептично уклонити 2 мл подлоге, пребацити је у стерилну епрувету и извршити индол тест, тако да ако је негативан, остатак оригиналне епрувете може се инкубирати још 24 сата, како би се поново открио индол.
Развијање индола се врши на следећи начин: 3 до 5 капи Ковачевог реагенса се додају у MIO медијум и снажно промућкају. Посматрајте да ли се појављује фуксија црвени прстен или не.
Припрема
Половина моје
Измерити 31 г MIO медијума и растворити у једном литру дестиловане воде.
Загревајте док смеса не прокључа један минут, стално мешајући док се агар потпуно не раствори. Сипајте 4 мл подлоге у епрувете од 13/100 са памучним поклопцима.
Стерилишите у аутоклаву на 121°C током 15 минута. Извадите из аутоклава и оставите да одстоји на решетки да се формира получврсти блок.
Чувати у фрижидеру на температури од 2 до 8°C. Оставите да се охлади пре сејања бактеријског соја.
Боја дехидрираног медијума је беж, а боја припремљеног медијума је благо опалесцентно љубичаста.
Коначни pH припремљене подлоге је 6,5 ± 0,2
Медијум постаје жут при киселом pH и љубичаст при алкалном pH.
Ковачев реагенс (индолни развивач теста)
Овај реагенс се припрема на следећи начин:
Мери се 150 мл амил, изоамил или бутил алкохола (било који од та три). Раствара се 10 г п-диметиламинобензалдехида. Након тога се полако додаје 50 мл концентроване хлороводоничне киселине.
Припремљени реагенс је безбојан или светложут. Треба га чувати у ћилибарној бочици и чувати у фрижидеру. Тамносмеђа боја указује на кварење.
Ковачев реагенс се такође може заменити Ерлиховим реагенсом. Потоњи, будући да је осетљивији, пожељнији је за детекцију индола код бактерија које га производе у минималним количинама, као што су неки неферментативни грам-негативни бацили и неки анаероби.
употреба
Ова подлога је тест који допуњује низ биохемијских тестова за идентификацију бактерија које припадају породици Enterobacteriaceae.
Подаци о декарбоксилацији орнитина служе за разликовање Шигела сонеи, што је позитивно, Шигела бојди, Шигела флекснери и С. дизентериеае, који су негативни.
Такође разликује род Klebsiella, који је негативан, од рода Enterobacter, где је већина његових врста позитивна.
Контрола квалитета
Сваки пут када се припреми серија MIO медијума, може се извршити контролни тест. Да би се то урадило, користе се познати или сертификовани сојеви за посматрање понашања медијума.
Сојеви који се могу користити су Ешерихија коли, Морганела моргани, Клебсијела пнеумонија, Ентеробактерија аерогенес e Протеус чудабилис.
Очекивани резултати су Е. коли и М. моргании. Они дају M: +, I: + и O: +.
Клебсиелла пнеумониае све је негативно (М: -, И: -, О :-). Протеус мирабилис e Ентеробацтер аерогенес наведите M: + I: – и O: +.
Референце
- Мак Фадин Џ. (2003). Биохемијски тестови за идентификацију бактерија од клиничког значаја. 3. издање. Издавачка кућа Панамерикана. Буенос Ајрес, Аргентина
- Форбс Б, Сам Д, Вајсфелд А. (2009). Бејлијева и Скотова микробиолошка дијагноза. 12. издање. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Конеман Е, Ален С, Јанда В, Шрекенбергер П, Вин В. (2004). Микробиолошка дијагноза, 5. издање. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Британске лабораторије. MIO Medio 2015. Доступно на: britanialab.com
- BD Laboratories BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Доступно на: bd.com
- Валтек Лабораторије MIO медијум Мотилност, индол, орнитин. 2010. Доступно на: andinamedica.com