Nhuộm Giemsa là một kỹ thuật được sử dụng trong vi sinh vật học và di truyền tế bào để nhuộm tế bào và mô, cho phép quan sát các cấu trúc cụ thể. Được Gustav Giemsa phát triển vào năm 1904, nhuộm Giemsa là một trong những kỹ thuật được sử dụng rộng rãi nhất trong các phòng xét nghiệm chẩn đoán để xác định vi sinh vật, ký sinh trùng và nhiễm sắc thể.
Nhuộm Giemsa cần các vật liệu như nhuộm Giemsa, methanol và nước cất. Kỹ thuật này bao gồm cố định tế bào trên lam kính, sau đó bôi thuốc nhuộm Giemsa pha loãng trong methanol. Sau khi nhuộm, tế bào được rửa bằng nước cất và quan sát dưới kính hiển vi.
Ứng dụng chính của nhuộm Giemsa bao gồm xác định các tác nhân gây bệnh như Plasmodium (gây sốt rét), Trypanosoma (gây bệnh Chagas) và các vi khuẩn như Chlamydia và Rickettsia. Hơn nữa, nhuộm Giemsa còn được sử dụng rộng rãi trong phân tích nhiễm sắc thể để chẩn đoán các bệnh di truyền và xác định các bất thường nhiễm sắc thể.
Hướng dẫn từng bước để thực hiện nhuộm Giemsa hiệu quả.
Nhuộm Giemsa là một kỹ thuật thiết yếu trong phân tích lâm sàng và phòng thí nghiệm nghiên cứu khoa học. Nó cho phép quan sát các cấu trúc tế bào khác nhau, chẳng hạn như nhiễm sắc thể, ký sinh trùng và vi khuẩn, thông qua việc nhuộm màu đặc hiệu các thành phần của chúng. Trong bài viết này, chúng tôi sẽ hướng dẫn từng bước cách thực hiện nhuộm Giemsa hiệu quả.
Bước 1: Chuẩn bị dung dịch Giemsa, có thể mua sẵn hoặc pha từ bột. Dung dịch nên được pha loãng với nước cất theo tỷ lệ khuyến cáo của nhà sản xuất.
Bước 2: Cố định mẫu trên phiến kính bằng nhiệt hoặc chất cố định, chẳng hạn như cồn etylic. Đảm bảo mẫu được cố định chắc chắn để tránh bị biến dạng trong quá trình nhuộm.
Bước 3: Phủ dung dịch Giemsa lên mẫu đã cố định, đảm bảo toàn bộ bề mặt được phủ đều. Để lam kính tiếp xúc với dung dịch trong một khoảng thời gian nhất định, thường từ 10 đến 30 phút.
Bước 4: Rửa sạch phiến kính dưới vòi nước chảy để loại bỏ vết bẩn còn sót lại. Lau khô nhẹ phiến kính bằng giấy thấm hoặc khí nén.
Bước 5: Quan sát mẫu nhuộm dưới kính hiển vi quang học với vật kính phóng đại phù hợp. Nhuộm Giemsa sẽ cho phép quan sát cấu trúc tế bào rõ nét và có độ tương phản cao hơn.
Nhuộm Giemsa được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực sinh học và y học, chẳng hạn như chẩn đoán bệnh ký sinh trùng, phân tích tế bào máu và xác định tác nhân truyền nhiễm. Bằng cách thực hiện đúng các bước được mô tả ở trên, có thể thu được kết quả nhuộm Giemsa chính xác và đáng tin cậy.
Hiểu rõ quy trình nhuộm Giemsa và cách thức hoạt động chi tiết của nó.
Nhuộm Giemsa là một phương pháp được sử dụng rộng rãi trong các phòng xét nghiệm vi sinh và huyết học để quan sát cấu trúc tế bào và phát hiện mầm bệnh. Được Gustav Giemsa phát triển vào năm 1902, phương pháp này dựa trên ái lực của thuốc nhuộm bazơ và axit đối với các thành phần tế bào khác nhau.
Vật liệu cần thiết cho nhuộm Giemsa bao gồm thuốc nhuộm Giemsa, dung dịch cố định và tẩy màu, lam kính, phiến kính và kính hiển vi. Thuốc nhuộm Giemsa là hỗn hợp xanh methylen, eosin và glycerin, được sử dụng để nhuộm cấu trúc nhân và tế bào chất của tế bào.
Kỹ thuật nhuộm Giemsa bao gồm việc cố định tế bào trên lam kính, sau đó nhuộm Giemsa trong một khoảng thời gian nhất định. Sau khi nhuộm, tế bào được rửa bằng nước cất và tẩy màu để loại bỏ thuốc nhuộm dư thừa. Cuối cùng, lam kính được sấy khô và quan sát dưới kính hiển vi.
Ứng dụng chính của nhuộm Giemsa bao gồm xác định ký sinh trùng lây truyền qua đường máu, chẳng hạn như Plasmodium spp., và phân biệt các tế bào máu trong phết máu ngoại vi. Hơn nữa, phương pháp này còn được sử dụng rộng rãi để xác định vi khuẩn, vi-rút và các tác nhân gây bệnh khác trong các mẫu lâm sàng.
Hoạt động của nó dựa trên ái lực của thuốc nhuộm cơ bản và axit với các thành phần tế bào khác nhau, cung cấp hình ảnh rõ nét và chi tiết dưới kính hiển vi.
Hiểu quy trình giải phẫu bệnh lý bằng phương pháp nhuộm Giemsa để phân tích lâm sàng.
Nhuộm Giemsa là một kỹ thuật được sử dụng trong giải phẫu bệnh lý để phân tích lâm sàng các mẫu mô. Được phát triển bởi nhà khoa học người Đức Gustav Giemsa, phương pháp nhuộm này được sử dụng rộng rãi nhờ khả năng làm nổi bật các thành phần tế bào khác nhau, chẳng hạn như nhân, nhiễm sắc thể và ký sinh trùng.
Nhuộm Giemsa đòi hỏi một số vật liệu, bao gồm thuốc nhuộm Giemsa, cồn methyl hóa, dung dịch muối và lam kính. Quy trình bao gồm cố định mẫu trong cồn methyl hóa, nhuộm Giemsa và rửa bằng dung dịch muối. Sau khi nhuộm, mẫu được quan sát dưới kính hiển vi để phân tích.
Nhuộm Giemsa được sử dụng rộng rãi trong các phòng xét nghiệm bệnh lý giải phẫu để xác định nhiều loại bệnh lý khác nhau, chẳng hạn như nhiễm ký sinh trùng, bệnh bạch cầu và các bệnh tự miễn. Kỹ thuật này cho phép phân tích chi tiết cấu trúc tế bào, hỗ trợ chẩn đoán lâm sàng và theo dõi điều trị.
Việc sử dụng nó rất cần thiết cho việc chẩn đoán và điều trị nhiều loại bệnh khác nhau, khiến nó trở thành một kỹ thuật không thể thiếu đối với các chuyên gia chăm sóc sức khỏe.
Xác định loại thuốc nhuộm được sử dụng để nhuộm vết máu.
Nhuộm Giemsa là một phương pháp phổ biến được sử dụng để quan sát các loại tế bào máu khác nhau trong phết máu. Thuốc nhuộm chính được sử dụng trong quy trình này là vết bẩn Giemsa, là hỗn hợp của xanh methylen, eosin và azure B. Thuốc nhuộm này đặc biệt hiệu quả trong việc nhuộm các cấu trúc như nhân tế bào, nhiễm sắc thể và các thể vùi trong tế bào chất.
Nhuộm Giemsa: nền tảng, vật liệu, kỹ thuật và công dụng
O vết bẩn Giemsa là một loại nhuộm mẫu lâm sàng, dựa trên hỗn hợp thuốc nhuộm axit và bazơ. Phương pháp này được lấy cảm hứng từ công trình của Romanowsky, nơi Gustav Giemsa, một nhà hóa học và vi khuẩn học người Đức, đã hoàn thiện nó bằng cách thêm glycerol để ổn định các hợp chất.
Những thay đổi được thực hiện đối với kỹ thuật ban đầu của Romanowsky cho phép chúng ta cải thiện đáng kể các quan sát dưới kính hiển vi; do đó, kỹ thuật này được gọi là nhuộm Giemsa.
Vì đây là kỹ thuật đơn giản, có tính ứng dụng cao và tiết kiệm nên hiện nay được sử dụng rộng rãi trong phòng xét nghiệm lâm sàng để lấy mẫu máu, mẫu tủy xương và mẫu mô.
Kỹ thuật nhuộm Giemsa rất hữu ích cho các nghiên cứu tế bào học, vì nó cho phép quan sát các cấu trúc tế bào cụ thể. Kỹ thuật này nhuộm tế bào chất, nhân, nhân con, không bào và hạt của tế bào, có thể phân biệt các dấu vết nhỏ của nhiễm sắc thể.
Hơn nữa, có thể phát hiện những thay đổi đáng kể về kích thước, hình dạng hoặc màu sắc của nhân, từ đó có thể hình dung được sự mất đi mối quan hệ giữa nhân và tế bào chất.
Mặt khác, nó cho phép xác định các tế bào chưa trưởng thành trong tủy xương và máu ngoại vi, điều này rất quan trọng để chẩn đoán các bệnh nghiêm trọng như bệnh bạch cầu. Nó cũng cho phép phát hiện ký sinh trùng máu, vi khuẩn ngoại bào và nội bào, nấm và các tác nhân gây bệnh khác.
Trong tế bào di truyền, nó được sử dụng rộng rãi vì có thể nghiên cứu quá trình phân bào.
Nền móng nhuộm Giemsa
Phương pháp nhuộm Romanowsky sử dụng sự tương phản giữa thuốc nhuộm axit và thuốc nhuộm bazơ để nhuộm các cấu trúc bazơ và axit tương ứng. Như có thể thấy, thuốc nhuộm axit có ái lực với các cấu trúc bazơ và ngược lại.
Thuốc nhuộm cơ bản được sử dụng là xanh methylene và các dẫn xuất oxy hóa của nó (Azure A và Azure B), trong khi thuốc nhuộm có tính axit là eosin.
Cấu trúc axit của tế bào bao gồm axit nucleic, các hạt basophil phân đoạn, cùng nhiều thành phần khác, do đó chúng được nhuộm bằng xanh methylen.
Tương tự như vậy, cấu trúc cơ bản của tế bào là hemoglobin và một số hạt, chẳng hạn như hạt có trong bạch cầu ái toan phân đoạn, cùng với những hạt khác; Những hạt này sẽ được nhuộm bằng eosin.
Mặt khác, vì xanh methylene và xanh da trời được coi là thuốc nhuộm biến sắc nên chúng có thể tạo ra tông màu khác nhau cho các cấu trúc khác nhau tùy theo điện tích polyanion mà chúng sở hữu.
Đây là cách kết hợp chiến lược giữa thuốc nhuộm cơ bản và thuốc nhuộm có tính axit có thể tạo ra một phổ màu rộng, tùy theo đặc điểm sinh hóa của từng cấu trúc, từ các sắc thái xanh nhạt, xanh đậm, tử đinh hương và tím trong trường hợp cấu trúc có tính axit.
Trong khi màu sắc do eosin tạo ra ổn định hơn, nó tạo ra màu sắc giữa cam đỏ và cam hồng.
Materiais
Vật liệu để chuẩn bị dung dịch gốc
Để chuẩn bị dung dịch gốc, cần cân 600 mg bột nhuộm Giemsa, đong 500 ml cồn methyl không chứa acetone và 50 ml glycerin trung tính.
Phương pháp chuẩn bị dung dịch gốc
Cho bột Giemsa đã cân vào cối. Nếu có cục, cần nghiền nhỏ. Sau đó, thêm một lượng glycerin vừa đủ vào và trộn đều. Đổ hỗn hợp thu được vào một chai màu hổ phách rất sạch.
Thêm phần glycerin còn lại vào vữa. Trộn lại để loại bỏ phần thuốc nhuộm còn sót lại bám trên thành vữa, sau đó đổ vào cùng một chai.
Đậy nắp chai và vận chuyển trong bồn nước ở nhiệt độ 2°C trong 55 giờ. Trong khi ở trong bồn nước, khuấy nhẹ hỗn hợp sau mỗi nửa giờ.
Sau đó, để hỗn hợp nguội trước khi thêm cồn. Một phần cồn đã đong được sẽ được đổ vào vữa để rửa sạch thuốc nhuộm còn sót lại, sau đó đổ vào hỗn hợp cùng với phần cồn còn lại.
Nên để hỗn hợp này ủ ít nhất 2 tuần. Phần rượu dùng trong nước ngâm phải được lọc.
Để tránh nhiễm bẩn chế phẩm, nên chuyển phần thuốc thử cần sử dụng liên tục sang một chai nhỏ màu hổ phách có ống nhỏ giọt. Đổ đầy lại mỗi khi thuốc thử hết.
Vật liệu để pha chế dung dịch đệm
Mặt khác, dung dịch đệm có pH 7,2 được chuẩn bị như sau:
6,77 g natri photphat (khan) (đã cân NaHPO 4 ), 2,59 g kali dihydro photphat (KH 2 PO 4 ), và nước cất tới 1000 ml.
Chuẩn bị thuốc nhuộm cuối cùng
Để chuẩn bị dung dịch nhuộm cuối cùng, đong 2 ml dung dịch gốc đã lọc và trộn với 6 ml dung dịch đệm. Lắc đều hỗn hợp.
Một thực tế có liên quan cần phải lưu ý là kỹ thuật pha chế thuốc nhuộm có thể thay đổi tùy thuộc vào cơ sở thương mại.
Vật liệu bổ sung cần thiết để tạo màu
Ngoài các vật liệu đã mô tả, phải có cầu màu, áo phông có nước hoặc băng vệ sinh để giặt quần áo, ga trải giường có đồ vật hoặc vỏ bọc, bộ đếm thời gian để kiểm soát thời gian tô màu và giấy thấm hoặc một số vật liệu dùng để làm khô (gạc hoặc bông).
Kỹ thuật
Quá trình tô màu
1) Trước khi nhuộm, mẫu phải được trải trên một phiến kính sạch.
Mẫu có thể là máu, tủy xương, mẫu mô học hoặc mẫu cổ tử cung-âm đạo. Nên để bột nhão mỏng và để khô trong 1 đến 2 giờ trước khi nhuộm.
2) Trên cầu tô màu, tất cả các lá màu được đặt lên. Cầu luôn hoạt động theo cùng một thứ tự và mỗi lá đều được dán nhãn rõ ràng.
3) Nhỏ vài giọt cồn metyl 100% (methanol) lên vết bẩn và để trong 3 đến 5 phút để cố định và làm mất nước mẫu.
4) Loại bỏ methanol còn sót lại trên lá và để khô tự nhiên.
5) Sau khi khô, nhỏ dung dịch nhuộm cuối cùng bằng ống nhỏ giọt cho đến khi toàn bộ lá được phủ kín. Để trong 15 phút. Một số tác giả khuyến nghị tối đa 25 phút. Thời gian này tùy thuộc vào cửa hàng.
6) Xả sạch vết bẩn và rửa vết bẩn bằng nước cất hoặc dung dịch đệm trong 7.2.
7) Trên giấy thấm, để lá khô tự nhiên, xếp theo chiều dọc với sự trợ giúp của giá đỡ.
8) Lau mặt sau của phiến kính bằng gạc hoặc tăm bông nhúng cồn để loại bỏ thuốc nhuộm.
Tiện ích
Kỹ thuật nhuộm Giemsa được sử dụng trong nhiều lĩnh vực, bao gồm: huyết học, nấm học, vi khuẩn học, ký sinh trùng học, tế bào học và di truyền tế bào.
Huyết học
Đây là ứng dụng phổ biến nhất của phương pháp nhuộm này. Với phương pháp này, từng tế bào hiện diện trong tủy xương hoặc mẫu máu ngoại vi đều có thể được xác định. Ngoài việc ước tính số lượng tế bào trong mỗi chuỗi, phương pháp này còn có thể phát hiện tình trạng tăng bạch cầu hoặc giảm bạch cầu, giảm tiểu cầu, v.v.
Vì nhạy cảm với việc phát hiện các tế bào chưa trưởng thành, xét nghiệm này hữu ích trong việc chẩn đoán bệnh bạch cầu cấp tính hoặc mãn tính. Nó cũng có thể chẩn đoán các bệnh thiếu máu như bệnh hồng cầu hình liềm, cùng nhiều bệnh khác.
Nấm học
Trong khu vực này, người ta thường sử dụng Histoplasma capsulatum (nấm lưỡng hình nội bào) trong các mẫu mô.
vi khuẩn học
Trong các vết bẩn huyết học nhuộm Giemsa, có thể phát hiện Borrelias sp ở những bệnh nhân mắc bệnh sốt hồi quy. Xoắn khuẩn được quan sát thấy rất nhiều trong hồng cầu ở các mẫu thu thập vào thời điểm sốt cao nhất.
Người ta cũng có thể hình dung vi khuẩn nội bào như Rickettsia sp e Chlamydia trachomatis trong các tế bào bị nhiễm bệnh.
Ký sinh trùng học
Trong lĩnh vực ký sinh trùng, phương pháp nhuộm Giemsa cho phép chẩn đoán các bệnh ký sinh trùng như sốt rét, bệnh Chagas và bệnh leishmaniasis.
Trong hai ký sinh trùng đầu tiên, Plasmodium sp e Trypanosoma cruzi, tương ứng, có thể được nhìn thấy trong máu ngoại vi của bệnh nhân bị nhiễm bệnh và có thể được tìm thấy ở nhiều giai đoạn khác nhau tùy thuộc vào giai đoạn của bệnh.
Để cải thiện khả năng tìm kiếm ký sinh trùng trong máu, nên sử dụng thuốc nhuộm Giemsa trộn với thuốc nhuộm May-Grünwald.
Tương tự như vậy, bệnh leishmaniasis ở da có thể được chẩn đoán bằng cách đánh giá các mẫu sinh thiết da nhuộm Giemsa tại nơi phát hiện ra ký sinh trùng.
công thức
Nhuộm Giemsa cũng được sử dụng để nghiên cứu tế bào học các mẫu cổ tử cung, mặc dù đây không phải là kỹ thuật được sử dụng rộng rãi nhất cho mục đích này.
Tuy nhiên, trong trường hợp khan hiếm nguồn lực, phương pháp này có thể được sử dụng, mang lại chức năng tương tự như xét nghiệm Pap smear và với chi phí thấp hơn. Tuy nhiên, phương pháp này đòi hỏi chuyên môn của người xét nghiệm.
Di truyền tế bào
Một đặc điểm quan trọng của nhuộm Giemsa là khả năng liên kết mạnh với các vùng DNA giàu adenine và thymine. Điều này cho phép quan sát DNA trong quá trình nguyên phân tế bào, ở các trạng thái ngưng tụ khác nhau.
Những nghiên cứu này là cần thiết để phát hiện các quang sai màu, chẳng hạn như sự nhân đôi, mất đoạn hoặc chuyển đoạn ở các vùng khác nhau của nhiễm sắc thể.
Nghiên cứu chứng minh hiệu quả của phương pháp nhuộm Giemsa
Cannova và cộng sự (2016) đã so sánh ba kỹ thuật nhuộm màu để chẩn đoán bệnh leishmaniasis ở da.
Với mục đích này, các mẫu thu được từ động vật thí nghiệm đã được sử dụng ( Mesocrisetus auratus) được tiêm chủng thử nghiệm với Leishmania.
Các tác giả đã chứng minh rằng nhuộm Giemsa vượt trội hơn nhuộm Pap-mart® và nhuộm Gaffney. Do đó, họ coi nhuộm Giemsa là phương pháp lý tưởng để chẩn đoán bệnh leishmaniasis ở da.
Kết quả tuyệt vời mà các tác giả thu được là do sự kết hợp các thuốc nhuộm tạo nên hỗn hợp Giemsa có đủ các điều kiện cần thiết để tạo ra độ tương phản thuận lợi, giúp phân biệt rõ ràng cấu trúc của amastigotes, cả bên trong và bên ngoài tế bào.
Các kỹ thuật khác (Pap-mart® và Gaffney) cũng làm được điều này, nhưng ở mức độ yếu hơn và do đó khó quan sát hơn. Đây là lý do tại sao nhuộm Giemsa được khuyến nghị để chẩn đoán ký sinh trùng bệnh leishmaniasis.
Tương tự như vậy, một nghiên cứu của Ramírez et al (1994) đã đánh giá tính hợp lệ của các vết nhuộm Giemsa và Lendrum trong các vết bẩn kết mạc để xác định Chlamydia trachomatis.
Các tác giả xác định rằng thuốc nhuộm Giemsa và Ledrum có cùng tính đặc hiệu, nhưng Giemsa tỏ ra nhạy cảm hơn.
Điều này giải thích tại sao nhuộm Giemsa hiện là phương pháp được sử dụng phổ biến nhất để chẩn đoán nhiễm trùng Chlamydia, đặc biệt là ở những nơi thiếu nguồn lực.
Khuyến nghị cho màu sắc tốt
Không nên sấy lá quá nhanh. Bạn nên đợi đủ thời gian để lá khô tự nhiên. Khoảng 2 giờ.
Nhuộm màu ngay sau 2 giờ để có kết quả tốt nhất.
Để vết bẩn bám chặt và hòa trộn tốt hơn, nên rải mẫu trên tờ giấy thành một lớp mỏng và đều.
Mẫu máu được ưa chuộng là mẫu mao mạch vì mẫu máu được lấy trực tiếp từ giọt máu và do đó, mẫu máu không chứa bất kỳ chất phụ gia nào, giúp duy trì cấu trúc tế bào.
Tuy nhiên, nếu sử dụng máu tĩnh mạch, nên sử dụng EDTA như một chất chống đông máu chứ không phải heparin vì heparin thường làm biến dạng tế bào.
Những sai lầm thường gặp khi nhuộm Giemsa
Khi sử dụng kỹ thuật tô màu này, có thể xảy ra sai sót. Điều này được chứng minh bằng sự thay đổi đột ngột về màu sắc của cấu trúc.
Màu xanh cực độ
Có thể là do:
- Vết bẩn rất dày
- Vượt quá thời gian tô màu
- Rửa không đủ sạch.
- Sử dụng thuốc thử có độ pH cao hơn mức trung tính (kiềm).
Trong những điều kiện này, màu sắc của các cấu trúc sau bị biến dạng, do đó hồng cầu thay vì nhuộm màu hồng cá hồi sẽ chuyển sang màu xanh lá cây, các hạt bạch cầu ái toan, vốn phải nhuộm màu đỏ gạch, sẽ chuyển sang màu xanh lam hoặc xám, v.v. độ lệch so với các sắc thái thông thường.
Màu hồng quá mức
Có thể là do:
- Thời gian nhuộm không đủ.
- Rửa mặt quá lâu hoặc quá nhiều.
- Không quá khô
- Sử dụng thuốc thử có tính axit cao.
Trong trường hợp cụ thể này, các công trình thường có màu xanh lam sẽ hầu như không nhìn thấy được, trong khi các công trình có màu hồng sẽ có tông màu rất đậm.
Ví dụ: Các tế bào hồng cầu sẽ có màu đỏ tươi hoặc cam đậm, nhiễm sắc thể nhân sẽ có màu hồng nhạt và các hạt bạch cầu ái toan sẽ nhuộm màu đỏ tươi.
Sự hiện diện của chất kết tủa trong vết bẩn
Nguyên nhân có thể là:
- Sử dụng ga trải giường bẩn hoặc giặt không sạch.
- Đừng để vết bẩn khô hẳn.
- Để dung dịch cố định trong thời gian dài.
- Giặt không đúng cách ở giai đoạn cuối của quá trình nhuộm.
- Lọc không đủ hoặc không lọc thuốc nhuộm đang sử dụng.
Sự hiện diện của các hiện vật hình thái
Các hiện tượng hình thái có thể xuất hiện trên các vết bẩn, khiến việc hình dung và diễn giải cấu trúc trở nên khó khăn. Nguyên nhân là do:
- Loại thuốc chống đông máu được sử dụng, chẳng hạn như heparin.
- Sử dụng lá bẩn, bị hư hỏng hoặc có dầu.
Chế độ lưu trữ
Sau khi pha chế, thuốc nhuộm nên được bảo quản ở nhiệt độ phòng (15-25°C) để tránh thuốc nhuộm bị kết tủa. Thuốc nhuộm nên được bảo quản trong hộp màu hổ phách đậy kín.
Người giới thiệu
- Cannova D, Brito E và Simons M. Đánh giá các kỹ thuật nhuộm màu để chẩn đoán bệnh leishmaniasis da. Salus . 2016; 20(2): 24-29.
- Thuốc thử PanReac Applichem ITW. Nhuộm Giemsa. Phiên bản 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Tây Ban Nha
- Clark G. Quy trình nhuộm (1981), lần thứ 4. Williams & Willkins.
- Hóa học lâm sàng ứng dụng. Nhuộm Giemsa trong chẩn đoán ống nghiệm . Nhà phân phối: cromakit.es
- Ramírez I, Mejía M, García de la Riva J, Hermes F và Grazioso C. Tính hợp lệ của nhuộm Giemsa và Lendrum trong các vết bẩn kết mạc để xác định Chlamydia trachomatis. Bát Sanit Panam. Năm 1994; 116 (3): 212-216.
- Casas-Rincón G. Nấm học tổng quát. 1994. Tái bản lần thứ 2. Đại học Trung tâm Venezuela, Phiên bản Thư viện. Venezuela, Caracas
- «Nhuộm Giemsa.» Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí . Ngày 1 tháng 2017 năm 01, lúc 02:6 UTC. Ngày 2018 tháng XNUMX năm XNUMX, en.wikipedia.org.