Miễn dịch huỳnh quang là một kỹ thuật được sử dụng rộng rãi trong sinh học và y học để xác định và định vị các phân tử đặc hiệu trong các mẫu sinh học. Cơ sở của kỹ thuật này nằm ở độ nhạy và độ đặc hiệu cao, cho phép phát hiện protein, kháng nguyên và kháng thể ở nồng độ rất thấp. Quy trình miễn dịch huỳnh quang bao gồm ủ mẫu với kháng thể sơ cấp đặc hiệu, sau đó bổ sung kháng thể thứ cấp được đánh dấu huỳnh quang. Sau khi rửa mẫu, các phân tử mục tiêu được phát hiện bằng cách phát ra ánh sáng huỳnh quang dưới kính hiển vi. Miễn dịch huỳnh quang có nhiều ứng dụng đa dạng, được sử dụng trong các nghiên cứu sinh học tế bào, chẩn đoán bệnh, nghiên cứu y sinh và các lĩnh vực khác. Kỹ thuật này đóng vai trò nền tảng trong việc hiểu các quá trình tế bào và phân tử, góp phần vào những tiến bộ đáng kể trong chăm sóc sức khỏe.
Mục đích của kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang là gì và nó được sử dụng như thế nào trong thực tế?
Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu sinh học và y học. Mục đích chính của nó là phát hiện và hình ảnh hóa sự hiện diện của các kháng nguyên đặc hiệu trong tế bào hoặc mô bằng cách sử dụng kháng thể gắn huỳnh quang. Kỹ thuật này cực kỳ nhạy và cho phép xác định protein, virus, vi khuẩn và các thành phần sinh học khác trong các mẫu sinh học.
Trong thực tế, miễn dịch huỳnh quang được thực hiện qua một loạt các bước. Đầu tiên, mẫu được cố định và thấm để kháng thể dễ dàng xâm nhập. Sau đó, kháng thể sơ cấp được ủ với mẫu, tiếp theo là kháng thể thứ cấp được đánh dấu huỳnh quang. Sau khi rửa để loại bỏ kháng thể không liên kết, mẫu được quan sát dưới kính hiển vi huỳnh quang, tại đó sự hiện diện của kháng nguyên được phát hiện bằng cách phát ra ánh sáng huỳnh quang.
Miễn dịch huỳnh quang có nhiều ứng dụng thực tế và được sử dụng rộng rãi trong chẩn đoán lâm sàng, nghiên cứu khoa học và công nghệ sinh học. Ví dụ, trong chăm sóc sức khỏe, nó được sử dụng để phát hiện sự hiện diện của virus, vi khuẩn và protein khối u trong mẫu bệnh phẩm. Trong nghiên cứu khoa học, kỹ thuật này được sử dụng để nghiên cứu vị trí và biểu hiện của protein trong tế bào và mô, góp phần thúc đẩy sự phát triển của kiến thức khoa học.
Tóm lại, miễn dịch huỳnh quang là một kỹ thuật mạnh mẽ và linh hoạt, đóng vai trò cơ bản trong nhiều lĩnh vực sinh học và y học. Khả năng phát hiện và hình ảnh hóa các kháng nguyên cụ thể của nó khiến nó trở thành một công cụ thiết yếu cho việc nghiên cứu và chẩn đoán nhiều bệnh lý và quá trình sinh học khác nhau.
Xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang từng bước: tìm hiểu cách thực hiện quy trình.
Miễn dịch huỳnh quang là một kỹ thuật được sử dụng để xác định và định lượng sự hiện diện của kháng thể hoặc kháng nguyên trong mẫu sinh học. Xét nghiệm này được sử dụng rộng rãi trong chăm sóc sức khỏe để chẩn đoán nhiều bệnh khác nhau, bao gồm bệnh tự miễn, bệnh truyền nhiễm và bệnh ung thư.
Quy trình xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang bao gồm nhiều bước, cần được tuân thủ cẩn thận để đảm bảo kết quả chính xác. Dưới đây, chúng tôi mô tả từng bước xét nghiệm:
1. Chuẩn bị mẫu: Mẫu sinh học cần phân tích được thu thập và chuẩn bị theo loại xét nghiệm cần thực hiện. Sau đó, thuốc thử miễn dịch huỳnh quang đặc hiệu được sử dụng để phát hiện kháng nguyên quan tâm.
2. Ủ bệnh: Mẫu được ủ trong điều kiện cụ thể, thường là trong buồng tối, ẩm, để tạo điều kiện tương tác giữa kháng thể được gắn nhãn và kháng nguyên có trong mẫu.
3. Giặt giũ: Sau khi ủ, mẫu được rửa để loại bỏ thuốc thử dư thừa và giảm thiểu khả năng gây nhiễu đến kết quả cuối cùng.
4. Quan sát dưới kính hiển vi: Mẫu được phân tích dưới kính hiển vi huỳnh quang, cho phép quan sát và nhận dạng huỳnh quang phát ra từ phức hợp kháng thể-kháng nguyên.
5. Giải thích kết quả: Các mẫu huỳnh quang quan sát được sẽ được một chuyên gia được đào tạo giải thích, người sẽ đánh giá sự hiện diện, cường độ và sự phân bố của kháng nguyên hoặc kháng thể trong mẫu.
Miễn dịch huỳnh quang là một kỹ thuật nhạy và đặc hiệu với nhiều ứng dụng trong chăm sóc sức khỏe, bao gồm chẩn đoán bệnh tự miễn, phát hiện tác nhân truyền nhiễm và theo dõi điều trị. Do đó, việc tuân thủ đúng quy trình xét nghiệm là rất quan trọng để đảm bảo kết quả đáng tin cậy và chính xác.
Ứng dụng của kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trong việc xác định kháng nguyên và kháng thể.
Một ứng dụng của kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang gián tiếp trong việc xác định kháng nguyên và kháng thể là sử dụng trong nghiên cứu và chẩn đoán các bệnh tự miễn. Bằng cách gắn kháng thể đặc hiệu bằng chất huỳnh quang, có thể hình dung sự hiện diện của các tự kháng thể trong mẫu bệnh phẩm, hỗ trợ chẩn đoán và theo dõi các bệnh như lupus ban đỏ hệ thống và viêm khớp dạng thấp.
Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp cũng được sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu vi sinh, cho phép xác định kháng nguyên vi khuẩn trong các mẫu lâm sàng. Kỹ thuật này đặc biệt hữu ích trong việc phát hiện nhiễm trùng do virus, vi khuẩn và nấm, góp phần chẩn đoán chính xác và nhanh chóng các bệnh truyền nhiễm.
Một ứng dụng quan trọng khác của miễn dịch huỳnh quang gián tiếp là trong nghiên cứu khoa học, nơi nó được sử dụng để xác định và mô tả protein trong nhiều loại mẫu sinh học khác nhau. Kỹ thuật này cho phép hình dung trực tiếp các kháng nguyên cụ thể trong tế bào và mô, tạo điều kiện thuận lợi cho việc nghiên cứu các quá trình sinh học và hiểu biết về cơ chế phân tử.
Tóm lại, miễn dịch huỳnh quang gián tiếp là một công cụ mạnh mẽ và linh hoạt để xác định kháng nguyên và kháng thể, với nhiều ứng dụng từ chẩn đoán bệnh đến nghiên cứu khoa học. Độ nhạy và độ đặc hiệu của nó khiến nó trở thành một kỹ thuật không thể thiếu trong nhiều lĩnh vực y sinh.
Chỉ định yêu cầu xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang trong các tình huống lâm sàng khác nhau.
Chỉ định xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang trong các tình huống lâm sàng khác nhau có thể khác nhau tùy thuộc vào chẩn đoán nghi ngờ của bệnh nhân. Xét nghiệm này chủ yếu được sử dụng để xác định sự hiện diện của các kháng thể đặc hiệu trong cơ thể, hỗ trợ chẩn đoán các bệnh tự miễn và bệnh truyền nhiễm khác nhau.
Trong trường hợp nghi ngờ mắc bệnh lupus ban đỏ hệ thống, ví dụ, có thể yêu cầu xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang để phát hiện sự hiện diện của kháng thể kháng nhân (ANA) trong huyết thanh của bệnh nhân. Trong trường hợp nghi ngờ viêm da dạng herpes, có thể sử dụng phương pháp miễn dịch huỳnh quang để xác định sự hiện diện của kháng thể IgA trong mô da.
Ngoài ra, ở những bệnh nhân nghi ngờ viêm mạch, có thể yêu cầu xét nghiệm miễn dịch huỳnh quang để phát hiện sự hiện diện của immunoglobulin và các chất lắng đọng bổ thể trong mạch máu. Trong trường hợp nhiễm virus, chẳng hạn như viêm gan B, miễn dịch huỳnh quang có thể hữu ích trong việc xác định sự hiện diện của HBsAg trong gan.
Tóm lại, miễn dịch huỳnh quang là một xét nghiệm quan trọng có thể được yêu cầu trong nhiều tình huống lâm sàng khác nhau để hỗ trợ chẩn đoán các bệnh tự miễn, nhiễm trùng và viêm. Điều quan trọng cần nhấn mạnh là kết quả phải được phân tích bởi một chuyên gia có trình độ, có tính đến tình trạng lâm sàng của bệnh nhân.
Miễn dịch huỳnh quang: cơ sở lý luận, giao thức và ứng dụng
A miễn dịch huỳnh quang là một kỹ thuật nhuộm miễn dịch mạnh mẽ sử dụng kháng thể liên kết cộng hóa trị với các phân tử huỳnh quang để xác định các mục tiêu cụ thể trong các mẫu tế bào cố định trên một chất mang rắn.
Kỹ thuật này sử dụng phương pháp quan sát vi mô với độ đặc hiệu miễn dịch, cho phép quan sát các tế bào sống hoặc chết có thể biểu hiện một lượng nhỏ kháng nguyên. Kỹ thuật này được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu và chẩn đoán lâm sàng nhiều bệnh lý khác nhau.
Kỹ thuật này, chủ yếu là định tính (với một số biến thể định lượng), liên quan cụ thể đến việc hình dung mẫu bằng tín hiệu do chất huỳnh quang tạo ra, đây là phân tử huỳnh quang liên kết với kháng thể và có khả năng bị kích thích ở bước sóng nhất định.
Trong bối cảnh tế bào, kỹ thuật này rất hữu ích để nghiên cứu sự hiện diện/vắng mặt và vị trí dưới tế bào của protein. Kỹ thuật này ban đầu được sử dụng trong lâm sàng để chẩn đoán các loại virus như cúm và sau đó là nhiều bệnh truyền nhiễm khác.
Đây là một kỹ thuật có độ nhạy cao và với thiết bị kính hiển vi phù hợp, bạn có thể đạt được độ phân giải rất tốt. Việc quan sát đòi hỏi phải sử dụng kính hiển vi cộng hưởng hoặc kính hiển vi huỳnh quang.
Tuy nhiên, mặc dù rất phổ biến, phương pháp này có thể gây ra một số vấn đề quan trọng liên quan đến việc thu được huỳnh quang không đặc hiệu, tạo ra một lượng "nhiễu" nền nhất định, thường hạn chế việc đọc kết quả chính xác.
Fundacao
Miễn dịch huỳnh quang dựa trên việc khám phá hiện tượng sinh học về sự tương tác giữa kháng thể và kháng nguyên. Nó đặc biệt liên quan đến việc hình dung hoặc phát hiện phản ứng này bằng cách kích thích các phân tử huỳnh quang ở một bước sóng cụ thể.
Kháng thể là một protein immunoglobulin được tiết ra bởi các tế bào B hoạt động và được tạo ra đặc hiệu chống lại một kháng nguyên, có thể liên kết với kháng nguyên đó với ái lực và độ đặc hiệu cao. Miễn dịch huỳnh quang sử dụng immunoglobulin IgG, hòa tan trong huyết thanh.
Kháng thể là các phân tử có khối lượng lên đến 950 kDa, được cấu tạo từ hai chuỗi peptide: chuỗi ngắn (nặng), chuỗi dài (nhẹ) và chuỗi nhẹ. Chuỗi nặng và chuỗi nhẹ được chia thành hai miền: miền biến đổi có khả năng nhận diện kháng nguyên, và miền hằng định hoặc miền bảo tồn, đặc trưng cho từng loài.
Về mặt chức năng, kháng nguyên được định nghĩa là các phân tử có thể được kháng thể nhận biết và chủ yếu là protein. Khi động vật tiếp xúc với kháng nguyên, các tế bào lympho của hệ miễn dịch sẽ được kích hoạt, sản xuất kháng thể đặc hiệu chống lại kháng nguyên đó, hoạt động như một hệ thống phòng thủ.
Một kháng nguyên, chẳng hạn như một protein, có thể có nhiều hơn một epitop hoặc vị trí nhận dạng cho một kháng thể, do đó huyết thanh của động vật tiếp xúc với kháng nguyên có thể có kháng thể đa dòng chống lại các vùng khác nhau của cùng một protein.
Sau đó, miễn dịch huỳnh quang khai thác khả năng của động vật trong việc sản xuất kháng thể đa dòng chống lại một kháng nguyên cụ thể để tinh chế kháng nguyên đó và sau đó sử dụng kháng nguyên đó để phát hiện kháng nguyên đó trong các bối cảnh khác.
Trong số các thuốc nhuộm hoặc phân tử huỳnh quang được sử dụng phổ biến nhất cho một số kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang là fluorescein isothiocyanate (FITC), tetramethylrhodamine-5 và -6 isothiocyanate (TRITC), nhiều loại cyanine như Cy2, Cy3, Cy5 và Cy7, và thuốc nhuộm có tên là Alexa Fluor®, chẳng hạn như Alexa Fluor®448.
Giao thức
Tuy nhiên, giao thức miễn dịch huỳnh quang thay đổi tùy thuộc vào nhiều yếu tố và nhìn chung, nó bao gồm một chuỗi các bước tuyến tính bao gồm:
- Chuẩn bị các tấm và ô
- Cố định mẫu
- Sự thẩm thấu
- Chặn
- Nhuộm miễn dịch hoặc dán nhãn miễn dịch
- Lắp ráp và quan sát
-Sự chuẩn bị
Từ các mẫu
Việc chuẩn bị mẫu sẽ phụ thuộc vào bản chất của mẫu và loại thí nghiệm cần thực hiện. Dưới đây, chúng tôi sẽ giải thích trường hợp đơn giản nhất, liên quan đến việc sử dụng tế bào lơ lửng.
Các tế bào trong huyền phù, tức là trong môi trường nuôi cấy lỏng, trước tiên phải được tách ra bằng cách ly tâm và sau đó rửa bằng dung dịch đệm đẳng trương hoặc băng vệ sinh để bảo toàn tính toàn vẹn của nó.
Thông thường, người ta sử dụng dung dịch đệm phosphat-muối gọi là PBS, trong đó các tế bào được huyền phù lại và hỗn hợp này được ly tâm một lần nữa để thu được các tế bào không còn dính vào môi trường nuôi cấy, vì môi trường này có thể chứa các chất gây nhiễu.
Từ những tấm ga trải giường
Các tấm dùng để quan sát bằng kính hiển vi, nơi các tế bào sau đó sẽ được cố định để xử lý tiếp theo, cũng phải được chuẩn bị cẩn thận.
Chúng được phủ hoặc "làm nhạy cảm" bằng dung dịch polylysine, một loại polymer tổng hợp có tác dụng như "chất keo phân tử" giữa các tế bào và chất rắn hỗ trợ, nhờ vào tương tác tĩnh điện giữa các điện tích dương của nhóm amino và các điện tích âm của protein bao phủ tế bào.
Cố định mẫu
Quá trình này bao gồm việc cố định các protein bên trong tế bào để duy trì vị trí không gian của chúng. Các phân tử được sử dụng phải có khả năng đi qua tất cả các loại màng tế bào và tạo thành các cấu trúc với protein cộng hóa trị.
Formaldehyde và paraformaldehyde, glutaraldehyde và thậm chí cả methanol được sử dụng rộng rãi, trong đó các mẫu tế bào được ủ trong một thời gian nhất định và sau đó được rửa bằng dung dịch đệm đẳng trương.
Sau khi bám vào tế bào, chúng tiếp tục bám vào lá đã được xử lý bằng poly-lysine trước đó.
Sự thẩm thấu
Tùy thuộc vào loại xét nghiệm được thực hiện, có thể cần phải thẩm thấu tế bào đang nghiên cứu. Nếu mục đích là xác định vị trí, sự hiện diện hoặc vắng mặt của một protein cụ thể trên bề mặt tế bào, thì việc thẩm thấu sẽ không cần thiết.
Mặt khác, nếu bạn muốn biết vị trí của một protein trong tế bào, thì tính thấm là điều cần thiết và sẽ bao gồm việc ủ mẫu với Triton X-100, một chất tẩy rửa có khả năng thấm màng tế bào.
Chặn
Một bước cơ bản trong tất cả các kỹ thuật miễn dịch học là chặn. Ở giai đoạn này của quy trình, chặn bao gồm việc phủ tất cả các vị trí trên lá đã được nhạy cảm bằng các phân tử polylysine mà chưa có tế bào nào bám vào. Nói cách khác, nó ngăn chặn mọi sự liên kết không đặc hiệu.
Thông thường, việc chặn mẫu bao gồm sử dụng dung dịch chứa albumin huyết thanh bò (BSA) trong đệm PBS, và thời gian ủ càng lâu thì kết quả càng tốt. Sau mỗi bước, bao gồm cả việc chặn mẫu, cần rửa sạch dung dịch còn lại.
Nhuộm miễn dịch hoặc dán nhãn miễn dịch
Quy trình nhuộm miễn dịch hoặc nhuộm miễn dịch sẽ phụ thuộc chủ yếu vào việc đó là miễn dịch huỳnh quang trực tiếp hay gián tiếp (xem bên dưới).
Đối với miễn dịch huỳnh quang sơ cấp hoặc trực tiếp, các mẫu sẽ được ủ với kháng thể mong muốn, sau đó phải được kết hợp với thuốc nhuộm huỳnh quang. Quy trình ủ bao gồm pha loãng kháng thể trong dung dịch cũng chứa BSA, nhưng với tỷ lệ nhỏ hơn.
Trong trường hợp miễn dịch huỳnh quang thứ cấp hoặc gián tiếp, cần thực hiện hai lần ủ liên tiếp. Đầu tiên, với các kháng thể mong muốn và sau đó với các kháng thể có khả năng phát hiện vùng hằng định của các globulin miễn dịch sơ cấp. Các kháng thể thứ cấp này được liên kết cộng hóa trị với các phân tử huỳnh quang.
Kỹ thuật này rất linh hoạt, cho phép gắn nhãn đồng thời nhiều kháng nguyên trên một mẫu, miễn là có các kháng thể chính được ghép với các chất huỳnh quang khác nhau, trong trường hợp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp.
Để gắn nhãn đồng thời trong miễn dịch huỳnh quang gián tiếp, cần đảm bảo rằng mỗi kháng thể chính được sản xuất ở một loài động vật khác nhau, cũng như mỗi kháng thể thứ cấp được ghép với một chất huỳnh quang khác nhau.
Tương tự như phương pháp chặn, ủ với kháng thể cho kết quả tốt hơn khi thời gian ủ càng dài. Sau mỗi bước, các kháng thể dư thừa không liên kết với mẫu phải được rửa sạch, và trong miễn dịch huỳnh quang thứ cấp, phải thực hiện chặn trước khi thêm kháng thể thứ cấp.
Một số kỹ thuật sử dụng các loại thuốc nhuộm khác không liên quan đến phương pháp nhuộm miễn dịch, chẳng hạn như nhuộm DNA hạt nhân bằng chất huỳnh quang DAPI.
Lắp ráp và quan sát
Trong giai đoạn ủ cuối cùng với chất huỳnh quang, mẫu phải được giữ trong bóng tối. Để quan sát dưới kính hiển vi, người ta thường sử dụng một số chất nhất định để bảo toàn huỳnh quang của chất huỳnh quang liên kết với kháng thể.
Loại
Miễn dịch huỳnh quang trực tiếp hoặc chính
Kỹ thuật này bao gồm việc phát hiện kháng nguyên thông qua việc sử dụng kháng thể huỳnh quang. Ưu điểm chính của kỹ thuật này là tốc độ; tuy nhiên, nhiều trường hợp liên kết không đặc hiệu có thể xảy ra trong quá trình này, đặc biệt là khi nghiên cứu huyết thanh người, vì chúng rất giàu kháng thể không đồng nhất.
Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp hoặc thứ cấp
Còn được gọi là kỹ thuật "bánh sandwich", kỹ thuật này bao gồm hai giai đoạn phát triển. Giai đoạn đầu tiên bao gồm việc sử dụng kháng thể không huỳnh quang và liên kết nó với kháng nguyên quan tâm.
Đối với vùng hằng số của kháng thể đầu tiên này (bây giờ sẽ đóng vai trò là kháng nguyên), một kháng thể thứ hai có khả năng nhận diện nó sẽ được sử dụng, liên kết với một phân tử huỳnh quang.
Sự xuất hiện của tín hiệu huỳnh quang sẽ là kết quả của sự nhận biết đặc hiệu giữa kháng thể không huỳnh quang đầu tiên và kháng nguyên quan tâm; sự hiện diện của kháng thể đầu tiên này sẽ xác định kháng thể thứ hai, được gắn nhãn và nhờ đó có thể xác định được sự có mặt hay vắng mặt của kháng nguyên.
Mặc dù đây là kỹ thuật tốn nhiều thời gian hơn so với miễn dịch huỳnh quang trực tiếp (bao gồm một bước ủ bổ sung), nhưng kỹ thuật này không liên quan đến việc thiết kế kháng thể huỳnh quang cho mỗi kháng nguyên được nghiên cứu, do đó khả thi hơn về mặt kinh tế.
Hơn nữa, đây là kỹ thuật nhạy cảm hơn về mặt khuếch đại tín hiệu, vì nhiều hơn một kháng thể thứ cấp có thể liên kết với vùng hằng số của kháng thể chính, khuếch đại cường độ tín hiệu huỳnh quang.
Ứng dụng
Như đã đề cập ở trên, miễn dịch huỳnh quang là một kỹ thuật cực kỳ linh hoạt, đã được ứng dụng rộng rãi trong cả khoa học và lâm sàng. Nó có thể được sử dụng để giải đáp các câu hỏi về sinh thái, di truyền và sinh lý liên quan đến nhiều sinh vật.
Trong số các ứng dụng lâm sàng, nó được sử dụng để chẩn đoán trực tiếp một số bệnh về da liễu, bằng phương pháp miễn dịch huỳnh quang trực tiếp hoặc gián tiếp trong mô biểu mô của bệnh nhân được nghiên cứu.
Các kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang trong các sinh vật đơn bào như nấm men có thể giúp hình dung các vi ống trong nhân và tế bào chất, actin và các protein liên quan, sợi 10 nm và các thành phần khác của tế bào chất, màng và thành tế bào.
Người giới thiệu
- Abcam, giao thức miễn dịch tế bào và miễn dịch huỳnh quang. Lấy từ abcam.com
- Greph, C. (2012). Thuốc nhuộm huỳnh quang. Lấy từ leica-microsystems.com
- Miller, DM, và Shakest, DC (1995). Kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang. Trong Phương pháp sinh học tế bào (Tập 48, trang 365-394). Nhà xuất bản Học thuật
- Odell, ID, & Cook, D. (2013). Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang. Tạp chí Da liễu Điều tra , 133 , 1-4.
- Princle, B.J.R., Adams, A.E.M., Druain, D.G., và Brian, K. (1991). Phương pháp miễn dịch huỳnh quang cho nấm men. Trong Phương pháp của Enzym học (Tập 194, trang 565-602). Nhà xuất bản Học thuật
- Schaeffer, M., Orsi, E. V. và Widelock, D. (1964). Ứng dụng của miễn dịch huỳnh quang trong virus học y tế công cộng. Đánh giá vi khuẩn học , 28 (4), 402-408.
- Vrieling, EG; và Anderson, DM (1996). Miễn dịch huỳnh quang trong nghiên cứu thực vật phù du: ứng dụng và tiềm năng. J: Phycol. , 32 , 1-16.