Agar Hektoen: fundação, preparação e usos

O Hektoen agar ou meio de ágar Hektoen entérico é uma cultura sólida, selectivo e diferencial. Foi criado no Instituto Hektoen por King e Metzger para o isolamento de bactérias enteropatogênicas dos gêneros Shigella e Salmonella.

O meio é composto de peptona proteica, extrato de levedura, sais biliares, lactose, sacarose, salicina, tiossulfato de sódio , cloreto de sódio , citrato de ferro, citrato de amônio, azul de bromotimol, fucsina ácida e ágar. Esta formulação permite diferenciar os gêneros Shigella e Salmonella do restante das bactérias capazes de crescer neste meio.

Agar Hektoen: fundação, preparação e usos 1

A. Agar Virgin Hektoen B. Hektoen semeado. Fonte: Flickr.com/O remetente original foi Philippinjl na Wikipedia em francês. [CC BY-SA 2.0 fr (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/2.0/fr/deed.en)]

Embora existam outros meios com a mesma função que o ágar Hektoen, ele tem uma vantagem maior em comparação com outros meios, especialmente quando você deseja recuperar espécies de Shigella.

As espécies de ambos os gêneros produzem graves problemas gastrointestinais em humanos devido ao consumo de alimentos contaminados; portanto, a transmissão é fecal – oral. É por isso que o uso do ágar Hektoen é indicado principalmente na análise microbiológica de amostras de fezes e alimentos.

Fundação

O ágar Hektoen contém peptonas e extrato de levedura como fonte de nutrientes, fornecendo os elementos essenciais para o desenvolvimento microbiano.

No entanto, também possui sais biliares que atuam inibindo o crescimento de algumas bactérias, especialmente Gram-positivas e Gram-negativas. É por esse motivo que é considerado um meio seletivo.

Por outro lado, o ágar Hektoen é um meio diferencial. Essa propriedade é conferida pela presença de carboidratos fermentáveis, como lactose, sacarina e salicina, juntamente com o sistema indicador de pH, representado pelo azul de bromotimol e fucsina ácida.

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Todas as bactérias capazes de crescer neste meio que não pertencem ao gênero Salmonella e Shigella desenvolverão colônias de salmão ou laranja, com exceção do gênero Proteus. Isso ocorre devido à fermentação de um ou mais carboidratos presentes, que acidificam o meio, o que faz com que o indicador de pH gire.

Por outro lado, os gêneros Shigella e Salmonella não são capazes de fermentar nenhum dos carboidratos presentes, utilizando apenas as peptonas como fonte de energia, que alcaliniza o meio e, portanto, suas colônias são azul-esverdeadas.

Também neste meio, as bactérias capazes de formar sulfeto de hidrogênio (gás incolor) podem ser distinguidas. O tiossulfato de sódio atua como fonte de sulfeto, enquanto o citrato de ferro é o desenvolvedor. Ambos os compostos possibilitam a formação de um precipitado preto de sulfeto de ferro que evidencia a reação.

O precipitado preto no centro da colônia com um halo transparente ao redor dá a aparência de um olho de peixe. Essa característica sugere a presença do gênero Salmonella.

Finalmente, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico e o ágar fornece a consistência sólida ao meio.

Preparação

Pesar 76 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Agite vigorosamente a mistura e deixe descansar por 10 a 15 minutos. Pode ser aquecido e fervido, dando movimentos rotacionais até sua dissolução total. Este meio não é autoclavado.

Quando o meio atinge uma temperatura aproximada de 45 ° C, um volume de 20 ml é diretamente derramado em placas de Petri estéreis.

O ágar é deixado solidificar. Naquele momento, eles estão prontos para uso. É aconselhável usá-los imediatamente. Se não for possível, eles são armazenados na geladeira até o uso.

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As placas devem ser removidas antecipadamente da geladeira antes de plantá-las em temperatura ambiente.

O pH do meio deve ser 7,5 ± 0,2. A cor do meio desidratado é roxa e preparada é verde marrom.

Use

O uso do ágar Hektoen é recomendado para a pesquisa de bactérias do gênero Shigella e Salmonella em amostras de fezes e alimentos.

A possibilidade de isolar essas bactérias aumenta consideravelmente se a amostra for previamente enriquecida em caldos especiais, como caldo de selenito, caldo de selenito de cistina, caldo de tetrationato, etc.

O inóculo deve ser forte e a semeadura é feita por listras. As placas são incubadas a 37 ° C por 24 a 48 horas em aerobiose.

A incubação por 48 horas é recomendada porque as características das colônias são mais claras para interpretação e diferenciação no momento.

Controle de qualidade

Cepas bacterianas certificadas, como: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 e Shigella sonnei ATCC 25931 são usadas para executar o controle de qualidade .

Os resultados esperados são os seguintes: Salmonella typhimurium e Salmonella enteritidis devem desenvolver colônias verde-azuladas com ou sem centro preto. Enquanto as espécies Shigella crescerão como colônias verde-azuladas.

Também podem ser incluídas cepas de Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis , Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Nestes casos, as características observadas são as seguintes: E. coli e K. pneumoniae se desenvolverão nessas colônias médias de laranja-salmão, com um precipitado da mesma cor ao redor. Enquanto isso, Proteus desenvolverá colônias verde-azuladas com ou sem um centro preto.

Embora o S. aureus e o E. faecalis devam ser inibidos, às vezes o E. faecalis consegue crescer como pequenas colônias amarelas.

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Por outro lado, como este meio não é autoclavado, é importante avaliar a esterilidade do meio. Portanto, cada lote preparado deve ser incubado com uma a duas placas sem inocular a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

Obviamente, espera-se que não haja crescimento de qualquer tipo no prato.

Limitações

-As espécies de Proteus podem se desenvolver nesse ambiente e as características de suas colônias podem ser confundidas com as espécies de Salmonella ou Shigella. Por esse motivo, todas as colônias suspeitas devem ser confirmadas com testes bioquímicos .

-É necessário acompanhar o uso deste meio com outros ágares menos seletivos, porque se o microrganismo desejado estiver em baixas concentrações, ele pode não se desenvolver nesse meio.

-Não superaqueça durante a preparação, pois o calor excessivo altera a composição do meio.

-Excepcionalmente, podem aparecer colônias de Salmonella fermentadoras de lactose que podem passar despercebidas.

Referências

  1. Contribuidores da Wikipedia. Agar entérico de Hektoen. Wikipedia, A Enciclopédia Livre. 13 de março de 2019 às 23:38 UTC. Disponível em: .wikipedia.org / Acessado em 16 de março de 2019.
  2. Laboratórios BD Agar entérico BD Hektoen (ágar HE). 2013. Disponível em: bd.com
  3. Laboratórios britânicos. Agar Hektoen entérico. 2015. Disponível em: britanialab.com
  4. Laboratórios Difco Francisco Soria Melguizo. Agar Hektoen agar. Disponível em: f-soria.es
  5. Disco & BBL Manual, Hektoen Entic Agar. 2ª Edição Disponível em: bd.com/europe

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