Agar TCBS: fundação, preparação e uso

O ágar TCBS é um meio de cultura sólido e altamente selectivo diferencial, utilizados para o isolamento e cultivo de Vibrio, especialmente de Vibrio cholerae, V. vulnificus e V. parahaemolyticus como patogenes importantes deste tipo.

O acrônimo TCBS significa tiosulfato de citrato de sacarose biliar. Esse ágar também é conhecido como meio seletivo para Vibrios. A fórmula original foi criada por Nakanishi e posteriormente modificada por Kobayashi.

Agar TCBS: fundação, preparação e uso 1

Meio TCBS comercial e placa de agar TCBS semeadas com Vibrio cholerae. Fonte: foto 1: tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Índia [Domínio público]

É composto de extrato de levedura, peptona de carne, triptein, citrato de sódio, tiossulfato de sódio, bile de boi, sacarose, cloreto de sódio, citrato férrico, azul de bromotimol, azul de timol e ágar.

Esta composição permite um desenvolvimento adequado das espécies de Vibrio a partir de amostras de água, alimentos e fezes; exceto Vibrio hollisae, que não cresce neste meio. Além disso, o meio TCBS é capaz de inibir o crescimento de outras bactérias acompanhantes, especialmente coliformes.

Devido aos sérios problemas gastrointestinais e extra-intestinais que algumas espécies do gênero Vibrio produzem, seu diagnóstico é muito importante. O ser humano é infectado principalmente pela ingestão de alimentos crus ou mal cozidos do mar ou de água contaminada, mas também por infecção de feridas.

Por esse motivo, os laboratórios clínicos devem incluir o ágar TCBS no estudo de co – culturas de amostras de fezes líquidas, especialmente com o aparecimento de água de arroz. Especialmente se o paciente relatar ter estado em contato com a água do mar ou ter consumido moluscos ou peixes.

Fundação

Extrato de levedura, peptonas de carne e triptein são a fonte nutricional deste meio. No entanto, o ágar TCBS é um meio inóspito para a maioria das bactérias.

Relacionado:  O que é uma apomorfia? (Com exemplos)

Sua alta seletividade é dada pela adição de citrato de sódio e bile de boi; ambos são agentes inibidores que também fornecem pH alcalino ao meio, restringindo o crescimento da flora acompanhante e favorecendo o crescimento de V. cholerae, entre outras espécies. Note-se que o Vibrio cholerae é muito sensível à acidez.

Por outro lado, o cloreto de sódio se equilibra osmoticamente no meio. Além disso, como sua concentração é alta, também atua como um agente inibidor, favorecendo o crescimento de bactérias halofílicas.

A sacarose é o açúcar fermentável que, juntamente com os indicadores de pH do azul de bromotimol e azul de timol, conferem ao meio um caráter diferencial. Por esse motivo, com este meio é possível diferenciar as cepas fermentadoras de sacarose das não fermentativas.

As colônias das cepas de fermentação de sacarose desenvolvem-se em amarelo e tornam o meio verde a amarelo pela produção de ácidos. Os não fermentadores crescem translúcidos e o meio é a cor original (verde).

Da mesma forma, este meio contém tiossulfato de sódio como fonte de enxofre e citrato férrico como revelador. Ambos mostram as bactérias capazes de produzir sulfeto de hidrogênio (gás incolor). O H 2 S é formado a partir de tiossulfato e subsequentemente fazendo reagir com formação de precipitado de citrato férrico visíveis preto.

Finalmente, o ágar é o que fornece a consistência sólida ao meio.

Preparação

Pesar 89 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Ajude a dissolução por aquecimento e agitação frequente. A mistura pode ser fervida por até 2 minutos.

Este meio não autoclave. Após a dissolução, é servido diretamente em placas estéreis. Ao solidificar, eles são encomendados invertidos em plaquetas e armazenados em uma geladeira (2-8 ° C) até o uso.

O meio após a preparação deve estar em pH 8,6 ± 0,2.

Relacionado:  Subsidiária de primeira geração (F1): características, exemplos

A cor do meio desidratado é bege claro ou bege esverdeado, e a cor do meio é verde floresta ou verde-azulado.

É importante deixar as placas temperarem antes de semear as amostras.

Use

A amostra mais comum para o isolamento de Vibrios são as fezes diarreicas.

As amostras de fezes, se não puderem ser semeadas imediatamente no meio seletivo, devem ser transportadas no meio Cary Blair.

Para aumentar a sensibilidade da cultura, as fezes podem ser passadas através de água peptonada a pH 8,4 como meio de enriquecimento por um máximo de 8 horas, de onde são subcultivadas ao meio TCBS.

Também deve-se ter em mente que algumas cepas de Vibrios podem causar sepse em pacientes imunossuprimidos, para que possam ser isoladas de hemoculturas. Da mesma forma, amostras de água e alimentos do mar podem ser analisadas quando há surtos epidêmicos da doença da cólera.

Semeado

O inóculo da amostra em estudo deve ser proeminente, a semeadura é realizada pelo método de estriação por exaustão. As placas são incubadas a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

As colônias presuntivas de Vibrio cholerae são de tamanho médio, lisas, opacas, finas e de cor amarela porque fermentam sacarose.

Da mesma forma, as espécies de V. alginolyticus , V. fluvialis , V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii e alguns V. vulnificus crescem . Outras espécies de Vibrios clinicamente importantes, como V. parahaemolyticus , não fermentam sacarose, desenvolvendo-se como colônias de oliveiras.

Agar TCBS: fundação, preparação e uso 2

Placa de agar TCBS semeada com Vibrio parahaemolyticus. Fonte: isis325 Flickr

Por outro lado, devemos ter em mente que algumas cepas de Aeromonas e Plesiomonas que são oxidase (+) podem crescer nesse meio, desenvolvendo colônias amarelas que podem confundir o clínico. Enquanto algumas cepas de Pseudomonas oxidase (+) também crescem como colônias verdes, assim como V. parahaemolyticus.

Limitação

O teste da oxidase positivo para o gênero Vibrio nunca deve ser realizado a partir de colônias obtidas do ágar TCBS, pois o resultado obtido será falso negativo. Os compostos do meio interferem fortemente neste teste. Portanto, deve ser feito a partir de subculturas em ágar sangue.

Relacionado:  21 animais que respiram pela traquéia

Controle de qualidade

Para provar que o meio está em boas condições, é aconselhável semear cepas de controle conhecidas ou certificadas e verificar se o crescimento atende às características esperadas.

Para isso, cepas de:

-Vibrio cholerae – crescimento satisfatório (colônias amarelas, borda translúcida).

-Vibrio parahaemolyticus ——– crescimento satisfatório (colônia com centro verde e borda translúcida).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 – crescimento satisfatório (colônias amarelas com halos da mesma cor ao redor da colônia).

– Enterococcus faecalis ATCC 29212 – inibição total ou parcial (pequenas colônias amarelas ou translúcidas).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 – inibição parcial ou total (colônias azuis).

-Escherichia coli ATCC 25922 – completamente inibida .

-Proteus mirabilis ATCC 43071 – Inibição total ou parcial. (Pequenas colônias verdes centram a borda translúcida).

A incubação de um meio sem inoculação não deve mudar.

Referências

  1. Laboratórios Difco Francisco Soria Melguizo. Ágar TCBS 2009. Disponível em: f-soria.es
  2. Laboratório BD. BD. TCBS Agar 2003. Disponível em: bd.com
  3. Laboratórios britânicos. TCBS Medium 2015. Disponível em: britanialab.com
  4. Laboratórios Acumedia. TCBS Agar. 2016. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Deixe um comentário

Este site usa cookies para lhe proporcionar a melhor experiência de usuário. política de cookies, clique no link para obter mais informações.

ACEPTAR
Aviso de cookies