Orceína: fundação e preparação

O orceína é uma cor púrpura, extraído de várias líquenes como orchilla ou tintura lilás, fruticose líquen naturais Tinctoria Rocella e Lecanora Parella principalmente. La Rocella tinctoria é encontrada no continente africano e americano, embora possa ser substituída por outras espécies localizadas na Europa.

Este corante tem sido amplamente utilizado em estudos citogenéticos desde os tempos antigos. Nesse sentido, a preparação da orceína, que inclui ácido acético, foi introduzida por LaCourt em 1941, razão pela qual foi inicialmente referida como a técnica de LaCourt.

Orceína: fundação e preparação 1

Estrutura química da solução de orceína e orceína. Fonte: Wikipedia.org/ Oguenther em de.wikipedia (Dr. Guenther) [Domínio público]

Além disso, por sua simplicidade e baixo custo, tem sido utilizado na fabricação de tornassol (corante extraído do líquen) e em estudos histológicos (coloração de células e tecidos).

Vários estudos usaram essa coloração combinada com outros produtos químicos, como piccarminato amoniacal e ácido acético, para tingir fibras elásticas e cromossomos, respectivamente.Atualmente, a orceína ainda é usada em estudos citogenéticos de animais e plantas.

Recentemente, Silva et al. 2017 usou com sucesso essa mancha para observar as várias alterações que ocorrem nas fibras elásticas da pele do polegar em idosos chilenos. Este estudo revelou como as fibras do polegar são alteradas com o envelhecimento.

Nesse sentido, as fibras elásticas eram marrom-negras em indivíduos com mais de 80 anos; enquanto nos mais jovens (a partir dos 60 anos) são marrom avermelhados. O citoplasma e outras estruturas celulares ficam verde amareladas.

Isso permitiu corroborar a presença e condição das fibras elásticas, em termos de disposição, quantidade e integridade.Por outro lado, também foi apontado que a orceína é de grande ajuda para identificar aneurismas e diagnosticar arterites, entre outras condições.

Fundação

A orceína faz parte do grupo de corantes oxazina e a coloração é baseada em sua afinidade pelo DNA. O corante se liga à carga negativa desta molécula, representada pelo grupo fosfato. É por isso que os cromossomos ficam roxos.

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No entanto, o restante das estruturas celulares assume outra cor. Especificamente, no caso das fibras elásticas, elas são de cor marrom avermelhado, os núcleos celulares de azul escuro a violeta, enquanto o colágeno não mancha.

Portanto, a orceína é usada para tingir a cromatina e diferenciar o sexo em algumas espécies de moscas. Da mesma forma, núcleos e algumas inclusões hepáticas produzidas por antígenos da hepatite B podem ser coloridos.

As soluções Orcein têm funções específicas na coloração. A orceína A tem a função de amolecer as membranas celulares, causando sua morte e paralisando o processo de divisão das mesmas.Enquanto isso, a Orcein B é responsável por completar a coloração por adesão aos cromossomos.

Preparação

Solução de aceto-orceína a 1%

Para preparar uma solução a 1% de aceto-orceína, 2 gramas de orceína são dissolvidos em 45 ml de ácido acético glacial, de preferência quente e 55 ml de água destilada são adicionados à temperatura ambiente.

Em seguida, é constantemente misturado para homogeneizar a solução e, em seguida, deixe repousar até que ela esfrie. Finalmente, é armazenado a 4 ° C em frascos escuros. Esta preparação foi utilizada por Flores 2012, para a observação das fases de maturação dos oócitos de vaca.

Neste caso, por exemplo, a solução de aceto-orceína é colocada no tecido previamente fixado em ácido acético-etanol por 24 horas. Esse processo de coloração é realizado por 30 minutos e, em seguida, o tecido é sujeito a descoloração.

Da mesma forma, isso pode ser usado na identificação de organelas em tecidos multicelulares. Nesse caso, um esfregaço da mucosa oral é corado com uma gota da solução de aceto-orceína, a lamela é colocada na folha e o núcleo celular com suas subestruturas pode ser imediatamente observado.

Solução lactopropônica 1% orceína

Além disso, a orceína pode ser preparada com outros produtos químicos, como ácido lático e ácido propiônico. Para fazer isso, um grama de orceína é dissolvido em uma solução pré-misturada à temperatura ambiente de 23 ml de ácido lático e 23 ml de ácido propiônico; completando o volume com água destilada até 100 ml.

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Com esta solução de orceína lacto-propiônica, podem ser observadas as diferentes fases da divisão meiótica das células vegetais. Nesse caso, a amostra previamente predefinida e hidrolisada é colocada por 15 minutos na solução de orceína lacto-propiônica e, em seguida, o tecido é espalhado em folhas de lâminas.

No estudo de Duque de 2016 sobre cromossomos poligênicos, ele usou uma preparação de 2 gramas de orceína diluída em 85% de ácido acético e ácido lático, diluindo com uma solução de 65% de ácido acético. Finalmente, ele observou os cromossomos nas glândulas salivares de Drosophila melanogaster.

Orceína A e Orceína B

É importante ter em mente que, dependendo da amostra e do que você deseja avaliar, a solução apropriada de orceína é preparada. Assim, por exemplo, o ácido clorídrico 1N é adicionado à solução de orceína A, para a observação das células em divisão.

Enquanto a solução de orceína B, ela se dissolve em 45% de ácido acético. Essa técnica constitui um método abreviado de coloração e, em geral, é utilizada como complemento à coloração das estruturas cromossômicas.

Considerações finais

Nos séculos passados, em países do continente americano como a Argentina, você pode obter líquen como: Lecanora, Parmelia e Umbilicaria , que são ótimas fontes de orceína. Também áreas européias, como as Ilhas Canárias, já foram grandes produtores de orquídeas.

Isso foi exportado para outras cidades do mesmo continente que Gênova e países como a Inglaterra, enquanto a Holanda monopolizava a fabricação de tornassol a partir da costa. Portanto, esse líquen foi reduzido até a extinção.

Isso levou a orquídea a ser substituída por outras plantas com propriedades de tingimento. No entanto, o surgimento de corantes sintéticos contribuiu para o fim do comércio desta fonte de líquen de orceína.

Isso foi possível graças a Cocq, que em 1812 descreveu a síntese da orceína, sabendo que ela é sintetizada por um composto fenólico chamado orcinol. No entanto, apesar disso, a orceína natural é atualmente preferida.

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Isso pode ser devido ao fato de o orcinol ser um composto com odor muito forte e cuja exposição prolongada pode levar a riscos para a saúde, como a perda da capacidade de detectar odores. Esses danos à hipófise podem ir de temporários a permanentes, quanto maior a exposição.

Referências

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