Agar de conta padrão: justificativa, preparação e usos

Agar de conta padrão é um meio de cultura utilizado em microbiologia para a contagem de microorganismos presentes em amostras biológicas. A sua preparação envolve a dissolução de agar em água destilada, adição de nutrientes específicos e esterilização. É um método amplamente utilizado em laboratórios para determinar a concentração de microrganismos em amostras diversas, como alimentos, água, ar e produtos farmacêuticos. A contagem de microrganismos é fundamental para diversas áreas, como controle de qualidade de produtos, monitoramento de infecções e estudos microbiológicos.

Utilização do meio de cultura PCA na microbiologia para crescimento e identificação de bactérias.

O meio de cultura PCA, ágar de conta padrão, é amplamente utilizado na microbiologia para o crescimento e identificação de bactérias. Ele é um meio seletivo que permite o crescimento de uma ampla variedade de microrganismos, tornando-o ideal para o isolamento e identificação de diferentes cepas bacterianas.

Para preparar o meio de cultura PCA, é necessário seguir um protocolo específico que envolve a mistura de ingredientes como peptona, extrato de carne, cloreto de sódio, ágar e outros componentes. Após a preparação, o meio é esterilizado por autoclavagem e posteriormente distribuído em placas de Petri para ser inoculado com as amostras biológicas a serem analisadas.

Os usos do meio de cultura PCA são variados, sendo comumente empregado em laboratórios de microbiologia clínica, ambiental e de alimentos. Ele é essencial para o diagnóstico de infecções bacterianas, estudos de controle de qualidade de produtos alimentícios e análises microbiológicas de água e solo, entre outros.

Em resumo, o ágar de conta padrão é uma ferramenta fundamental na microbiologia, proporcionando um ambiente propício para o crescimento e identificação de bactérias de interesse. Sua versatilidade e eficácia o tornam indispensável em diversas áreas da ciência e da saúde.

Composição do Agar PCA: Ingredientes, Propriedades e Aplicações na Indústria Alimentícia.

Agar PCA é um meio de cultura utilizado para contar bactérias em alimentos. Sua composição inclui ingredientes como Peptona de Caseína, Cloreto de Sódio, Agar e pH ajustado para 7,0. Essa combinação de ingredientes fornece um ambiente favorável para o crescimento de bactérias presentes nos alimentos, permitindo a contagem e identificação de microrganismos.

As propriedades do Agar PCA incluem a capacidade de solidificar o meio de cultura, permitindo o crescimento de bactérias de forma isolada. Além disso, sua transparência facilita a visualização das colônias bacterianas, tornando mais fácil a contagem e identificação dos microorganismos presentes nos alimentos.

Na indústria alimentícia, o Agar PCA é amplamente utilizado para monitorar a qualidade e segurança dos alimentos. Ele permite a detecção de bactérias patogênicas e indicadoras de contaminação, auxiliando na prevenção de doenças transmitidas por alimentos e na garantia da qualidade dos produtos finais.

Agar de conta padrão: justificativa, preparação e usos.

O Agar de conta padrão é um meio de cultura utilizado para contagem de microrganismos em amostras de alimentos. Sua justificativa está na necessidade de monitorar a presença de bactérias e outros microorganismos nos alimentos, garantindo a segurança e qualidade dos produtos consumidos pela população.

Para preparar o Agar de conta padrão, é necessário dissolver os ingredientes em água destilada, ajustar o pH e esterilizar o meio antes de utilizá-lo para a contagem de microrganismos. A preparação cuidadosa do meio é essencial para garantir resultados precisos e confiáveis.

Os usos do Agar de conta padrão incluem a contagem de bactérias totais, coliformes e outros microrganismos presentes em alimentos. Essa técnica é fundamental para avaliar a qualidade sanitária dos alimentos e garantir a conformidade com os padrões de segurança alimentar estabelecidos pelas autoridades regulatórias.

Procedimento padrão para contagem (PCA) simplificado e eficiente em 15 passos

O Agar de contagem padrão é um meio de cultura utilizado para estimar a densidade de microrganismos presentes em uma amostra. Para realizar a contagem de forma simplificada e eficiente, é importante seguir um Procedimento Padrão para Contagem (PCA) em 15 passos.

1. Justificativa: A contagem de microrganismos é essencial em diversos campos, como a indústria alimentícia, farmacêutica e ambiental, para garantir a qualidade e segurança dos produtos.

2. Preparação do meio de cultura: Prepare o Agar de contagem padrão conforme as instruções do fabricante, garantindo que esteja esterilizado e em condições ideais para o crescimento microbiano.

3. Distribuição do meio em placas: Despeje o meio de cultura em placas estéreis, em quantidade suficiente para cobrir toda a superfície da placa.

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4. Inoculação da amostra: Utilize uma alça de inoculação esterilizada para transferir a amostra para a placa contendo o meio de cultura.

5. Espalhamento da amostra: Espalhe a amostra de forma homogênea pela superfície do meio de cultura, garantindo que não haja sobreposição de microrganismos.

6. Incubação das placas: Coloque as placas em uma estufa a uma temperatura adequada para o crescimento dos microrganismos presentes na amostra.

7. Tempo de incubação: Deixe as placas incubando por um período determinado, geralmente entre 24 e 48 horas, dependendo do microrganismo em questão.

8. Contagem das colônias: Após o período de incubação, conte o número de colônias presentes em cada placa, utilizando um contador de colônias ou um método automatizado.

9. Cálculo da densidade de microrganismos: Calcule a densidade de microrganismos na amostra com base no número de colônias presentes e no fator de diluição utilizado.

10. Repetição do processo: Repita o procedimento com outras diluições da amostra, se necessário, para garantir resultados precisos.

11. Registro dos resultados: Registre os resultados obtidos em um formulário específico, incluindo a densidade de microrganismos em cada diluição.

12. Interpretação dos resultados: Analise os resultados obtidos para identificar possíveis contaminações ou variações na densidade de microrganismos na amostra.

13. Validação do método: Certifique-se de que o PCA foi realizado de acordo com as normas e procedimentos estabelecidos, garantindo a confiabilidade dos resultados.

14. Armazenamento das placas: Após a contagem, as placas podem ser descartadas de forma adequada ou armazenadas para futuras análises, se necessário.

15. Usos do Agar de contagem padrão: O Agar de conta padrão é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia para avaliação da qualidade de alimentos, água, produtos farmacêuticos e outros materiais sensíveis à contaminação microbiana.

Seguindo esses 15 passos, é possível realizar uma contagem de microrganismos de forma simplificada, eficiente e confiável, garantindo a segurança e qualidade dos produtos analisados.

Guia prático para realizar análise de componentes principais em formato PDF.

Quando se trata de análise de componentes principais, é importante contar com um guia prático que possa auxiliar no processo. Neste sentido, ter um documento em formato PDF pode facilitar a compreensão e execução das etapas necessárias. A análise de componentes principais é uma técnica estatística utilizada para reduzir a dimensionalidade de um conjunto de dados, mantendo as informações mais relevantes. Através dela, é possível identificar padrões, tendências e relações entre as variáveis.

Para iniciar a análise de componentes principais em formato PDF, é importante seguir alguns passos. Primeiramente, é necessário realizar a coleta e organização dos dados a serem analisados. Em seguida, é preciso calcular a matriz de covariância ou correlação, dependendo do tipo de dados. Posteriormente, é realizada a decomposição da matriz para obter os autovetores e autovalores, que vão definir as novas variáveis (componentes principais).

Com os componentes principais identificados, é possível realizar a interpretação dos resultados e avaliar a contribuição de cada variável para a formação dos mesmos. Além disso, a visualização dos dados através de gráficos pode facilitar a compreensão dos padrões identificados. Por fim, é importante documentar todo o processo em um formato PDF, para que outras pessoas possam ter acesso e compreender as etapas realizadas.

Em resumo, ter um guia prático em formato PDF para realizar análise de componentes principais pode ser de grande ajuda para aqueles que desejam explorar e interpretar dados de forma mais eficiente e objetiva. Com as informações corretamente organizadas e documentadas, é possível obter insights valiosos e tomar decisões mais embasadas.

Agar de conta padrão: justificativa, preparação e usos

O ágar-conta padrão é um meio de cultura sólido e não seletivo, projetado para a quantificação da carga microbiana aeróbia presente em amostras de água potável, esgoto, bebidas com leite, entre outros alimentos. Esse meio também é conhecido como ágar PCA, por seu acrônimo Plate Count Agar. Foi criado em 1953 por Buchbinder, Baris e Goldstein.

O meio de agar médio padrão é composto de extrato de levedura, trytein, glicose, ágar e água destilada . Esta formulação contém elementos nutricionais básicos que permitem o desenvolvimento da carga microbiana aeróbica presente, não exigente.

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Diluições decimais para a contagem de UFC em ágar de conta padrão. Fonte: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

Como o meio não contém inibidores, as bactérias podem se desenvolver sem restrições, sendo ideal para a contagem geral de colônias.No entanto, a técnica de quantificação de placas não detectará todas as bactérias presentes, mas apenas aquelas que são capazes de crescer sob as condições ambientais às quais o ágar-padrão semeado é submetido.

Nesse sentido, a técnica de quantificação de placas geralmente procura determinar a quantidade de bactérias mesofílicas aeróbicas, ou seja, aquelas que se desenvolvem a temperaturas entre 25 e 40 ° C, com uma temperatura ideal de crescimento a 37 ° C. .

Este grupo bacteriano é muito importante, porque a maioria das bactérias patogênicas para o homem é encontrada lá.

Deve-se notar que, às vezes, pode ser interessante quantificar a quantidade de bactérias psicrofílicas presentes nos alimentos. Essas bactérias são aquelas que se desenvolvem a baixas temperaturas (<20 ° C) e são responsáveis ​​pela quebra mais rápida dos alimentos, mesmo na geladeira.

Da mesma forma, bactérias termofílicas, que se desenvolvem entre 50 ° C e 80 ° C ou mais, podem ser importantes em certos tipos de alimentos, como alimentos enlatados.

A quantificação microbiana é expressa em unidades formadoras de colônias (UFC) por grama ou mililitro de amostra.

Fundação

O meio de contagem padrão é projetado para permitir o desenvolvimento satisfatório de bactérias aeróbicas não exigentes, uma vez que o extrato de levedura, triptein e glicose fornecem os nutrientes necessários para um bom desenvolvimento microbiano.

Por outro lado, o meio possui uma cor clara e uma aparência transparente, razão pela qual é ideal para visualizar colônias desenvolvidas pelo método de semeadura profunda (vazamento de placas).

A contagem de colônias também é possível pelo método de semeadura de superfície com uma espátula de Drigalski.

Quando a carga microbiana é alta, devem ser feitas diluições decimais da amostra em estudo para poder contar a UFC.

Deve-se notar que este meio é recomendado pela Associação Americana de Saúde Pública (APHA) para contagem aeróbica de mesofílicos.

Preparação

Pesar 23,5 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Para dissolver completamente, a mistura deve ser aquecida mexendo sempre até ferver. As etapas a seguir dependem da técnica de semeadura a ser usada.

Para técnica de vazamento de placas

Distribua a distribuição de 12 a 15 ml em tubos de ensaio. Posteriormente, esterilize em autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe solidificar verticalmente na forma de um bloco. Guarde na geladeira até o uso.

Derreta o taco quando for usado. Depois de derretido, mantenha-o em banho-maria a 44-47 ° C enquanto prepara as amostras.

Para semeadura de superfície

Esterilize o meio em autoclave a 121 ° C e depois distribua 20 ml em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar, inverter e guardar na geladeira até o uso.

Tempere as placas antes de usar. O pH do meio deve ser 7,0 ± 0,2.

Use

O ágar de contagem padrão é utilizado na técnica de contagem aeróbica mesofílica durante a análise microbiológica da água e dos alimentos. A contagem de mesófilos aeróbicos é necessária, pois determina a qualidade sanitária da amostra em estudo.

A aplicação desta técnica (usando este meio) permite a visualização macroscópica de colônias isoladas para quantificação.

Técnica de vazamento de placa (semeada em profundidade)

-Procedimento

A técnica consiste no seguinte:

1) Homogeneizar a amostra para redistribuir as bactérias presentes.

2) Uma suspensão inicial é feita em um frasco ou saco estéril, respeitando a razão 10 gr ou 10 ml de amostra em 90 ml de diluente (10 -1 ).

3) A partir da suspensão inicial, as diluições decimais relevantes são feitas dependendo do tipo de amostra. Ex: (10 -2 , 10 -3 , 10 -4 ). As diluições são feitas com água peptonada ou solução tampão de fosfato.

Para fazer isso, 1 ml da suspensão inicial é tomado e colocado em 9 ml de diluente, continue as diluições, se necessário, agora tomando 1 ml da diluição 10-2 e assim por diante.

4) 1 ml de cada diluição é tomado e colocado em placas de Petri estéreis vazias.

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5) Adicione a cada placa 12 a 15 ml de agar fundido padrão previamente derretido e repouse a 44-47 ° C.

6) Faça movimentos rotativos suaves nas placas para distribuir uniformemente a amostra ao lado do ágar e deixar solidificar.

7) Inverta as placas e incube a 37 ° C em aerobiose por 24 a 48 horas.

8) Após o tempo, as placas são examinadas e as colônias são contadas na diluição que permite. As placas com entre 30 e 300 UFC são escolhidas para contagem.

A contagem pode ser feita manualmente ou você pode usar o equipamento do contador de colônias.

Os valores permitidos por ml de amostra podem variar de um país para outro de acordo com as regras pelas quais são regidos.

Cálculo -UFC

O cálculo geral é feito usando a seguinte fórmula:

Agar de conta padrão: justificativa, preparação e usos 2

Fórmula para o cálculo geral da quantificação da UFC. Fonte: Administração Nacional de Medicamentos Alimentares e Tecnologia Médica (ANMAT). Análise microbiológica de alimentos, metodologia analítica oficial, microrganismos indicadores. 2014 Volume 3. Disponível em: anmat.gov.ar

Expresse os resultados em 1 ou 2 dígitos, multiplicando pela base apropriada 10. Exemplo: se o resultado for 16.545, ele será arredondado com base no terceiro dígito para 17.000 e será expresso da seguinte forma: 1,7 x 10 4 . Agora, se o resultado for 16.436, ele será arredondado para 16.000 e 1,6 x 10 4 será expresso .

Técnica semeada na superfície

-Procedimento

– Inocule com 0,1 ml da amostra direta, se for líquido, suspensão inicial 10 -1 ou diluições consecutivas 10 -2 , 10 -3 etc., no centro de uma placa de ágar-conta padrão.

-Distribua a amostra uniformemente com uma espátula de Drigalski ou uma haste de vidro em forma de L. Deixe repousar por 10 minutos.

-Inverta as placas e incube na aerobiose a 37 ° C por 24 a 48 horas.

-Proceda para contar as colônias, escolha as placas que estão entre 20 e 250 UFC.

Cálculo -UFC

Para o cálculo, é aplicado o fator de diluição, que é o inverso. O número é arredondado para 2 dígitos significativos (arredondamento de acordo com o terceiro dígito) e expresso em potência base 10. Por exemplo, se 224 CFUs são contadas na amostra não diluída (10 -1 ), 22 x 10 1 CFU são relatados , mas se o número fosse 225, 23 x 10 1 UFC é relatado.

No entanto, se 199 CFU forem contados na diluição de 10 -3 , 20 x 10 4 CFU serão relatados, mas se 153 CFU forem contados na mesma diluição, 15 x 10 4 CFU serão relatados.

Controle de qualidade

O meio de cultura de contagem padrão pode ser avaliado usando cepas conhecidas certificadas, como: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Se o meio de cultura estiver em ótimas condições, é esperado um crescimento satisfatório em todos os casos, com exceção de L. fermentum, que pode ter um rendimento regular.

Para avaliar a esterilidade do meio de cultura, uma ou duas placas de cada lote preparado (sem inoculação) devem ser incubadas a 37 ° C em aerobiose por 24 horas. Após esse período, nenhum crescimento ou mudança de cor do meio deve ser observado.

Limitações

-Não derreta o ágar mais de uma vez.

-O meio preparado pode durar até 3 meses, desde que seja mantido na geladeira e protegido da luz.

-Este meio não é adequado para microorganismos exigentes nem anaeróbios.

Referências

  1. Administração Nacional de Medicamentos Alimentares e Tecnologia Médica (ANMAT). Análise microbiológica de alimentos, metodologia analítica oficial, microrganismos indicadores. 2014 Volume 3. Disponível em: anmat.gov.ar
  2. Laboratorios Disco Francisco Soria Melguizo, SA Agar de contagem de placas. 2009. Disponível em: http://f-soria.es
  3. Laboratórios Conda Pronadisa. Ágar para métodos padrão (PCA) de acordo com APHA e ISO 4833. Disponível em: condalab.com
  4. Laboratórios britânicos. Contagem de placas de ágar. 2015. Disponível em: britanialab.com
  5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B e Velázquez O. 2009. Técnicas de análise microbiológica de alimentos. 2nd ed. Faculdade de Química, UNAM. México Disponível em: depa.fquim.unam

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