Agar sangue: fundação, usos e preparação

O agar de sangue é um meio de cultura sólido diferencial enriquecido mas não selectivo. É usado para a recuperação e crescimento de uma grande variedade de microorganismos a partir de amostras clínicas ou subculturas.

O ágar-sangue clássico deve ser incluído para a semeadura da maioria das amostras clínicas recebidas em laboratório; com exceção das amostras de fezes nas quais não é útil, a menos que seja preparado com certas modificações.

Agar sangue: fundação, usos e preparação 1

Placa de ágar-ágar

Este meio de cultura é basicamente composto por um ágar-base enriquecido e 5% de sangue.A base de ágar pode variar de acordo com as necessidades, mas principalmente será composta por peptonas, aminoácidos, vitaminas, extrato de carne, cloreto de sódio, ágar, entre outros.

Quanto ao sangue, geralmente é necessário ter contato com um bioterium para obter sangue de animais, como carneiro, coelho ou cavalo. No entanto, isso nem sempre é possível e, às vezes, é usado sangue humano.

O meio de ágar-sangue pode ser preparado em laboratório ou pode ser comprado pronto para empresas dedicadas a ele.A preparação deste meio é uma das mais delicadas, qualquer descuido em sua preparação resultará em um lote contaminado.

É por isso que todas as precauções possíveis devem ser tomadas e, no final, um controle de qualidade deve ser realizado através da incubação a 37 ° C 1 de placa para cada 100 preparadas.

Fundação

Agar sangue: fundação, usos e preparação 2

Staphylococcus aureus cultivado em ágar-sangue. Nathan Reading no Flickr Nathan R. no twitter [CC BY 2.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0)], via Wikimedia Commons
Já foi mencionado que o ágar-sangue tem a característica de ser um meio enriquecido, diferencial e não seletivo. A base de cada uma dessas propriedades é explicada abaixo.

O ágar-sangue é um meio enriquecido porque carrega como aditivo principal 5 a 10% do sangue em uma base de ágar-ágar. Ambos os compostos contêm muitos nutrientes e essa propriedade permite que a maioria das bactérias aráveis ​​cresça nele.

Esse crescimento ocorre sem restrição; Por esse motivo, não é seletivo.No entanto, se compostos que impedem o crescimento de alguns microorganismos e favorecem o de outros são adicionados a este meio, ele se torna seletivo. Este é o caso se certos tipos de antibióticos ou antifúngicos forem adicionados.

Da mesma forma, o ágar-sangue é um meio diferencial, pois permite distinguir três tipos de bactérias: beta-hemolítica, alfa-hemolítica e gama-hemolítica.

Os beta-hemolíticos são aqueles que têm a capacidade de lisar ou quebrar completamente os glóbulos vermelhos , formando um halo claro ao redor das colônias, portanto eles produzem hemólise ß ou ß-hemólise e os microorganismos são chamados ß-hemolíticos.

Exemplos de bactérias β-hemolíticas são Streptococcus pyogenes e Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolíticos são aqueles que realizam uma hemólise parcial, em que a hemoglobina é oxidada em metemoglobina, gerando uma cor esverdeada ao redor das colônias. Esse fenômeno é conhecido como α ou α hemólise – a hemólise e as bactérias são classificadas como α – hemolíticas.

Exemplos de bactérias α-hemolíticas são Streptococcus pneumoniae e Streptococcus do grupo viridans.

Finalmente, existem bactérias chamadas gama-hemolíticas ou não hemolíticas. Estes crescem no ágar sem gerar alterações, um efeito conhecido como γ-hemólise, e os microrganismos são γ-hemolíticos.

Relacionado:  Veado: características, subespécies, reprodução, alimentação

Exemplo de bactérias γ-hemolíticas: algumas estirpes do Streptococcus do grupo D ( Streptococcus bovis e Enterococcus faecalis ).

Usos

O meio de cultura de ágar-sangue é um dos mais comumente usados ​​no laboratório de microbiologia.

Entre os microrganismos capazes de crescer no meio de ágar-sangue estão: bactérias aeróbicas estritas, facultativas, microaerofílicas, anaeróbicas, Gram-positivas ou Gram-negativas, bactérias de crescimento rápido ou de crescimento lento.

Eles também cultivam algumas bactérias exigentes ou irritantes do ponto de vista nutricional, bem como fungos e leveduras.Da mesma forma, é útil para subculturas ou reativações de cepas que são metabolicamente muito fracas.

No entanto, a escolha do tipo sanguíneo e do ágar-base variará dependendo do microrganismo que provavelmente será recuperado e do uso que será dado à placa (cultura ou antibiograma).

Escolha do tipo sanguíneo

O sangue pode ser de cordeiro, coelho, cavalo ou humano.

O mais recomendado é o sangue de cordeiro, com algumas exceções. Por exemplo, para isolar espécies de Haemophilus, onde o sangue recomendado é o de cavalo ou coelho, já que o sangue de cordeiro possui enzimas que inibem o fator V.

O menos recomendado é o humano, porém é o mais utilizado, talvez porque seja o mais fácil de obter.

O sangue deve ser desfibrinado, obtido sem qualquer aditivo e de animais saudáveis.Para o uso de sangue humano, vários fatores devem ser lembrados:

Se o sangue vier de indivíduos que sofreram infecções bacterianas, eles terão anticorpos específicos. Sob essas condições, é provável que o crescimento de algumas bactérias seja inibido .

Se for obtido do banco de sangue, contém citrato e certas bactérias podem não se desenvolver na sua presença.Por outro lado, se o sangue vier de pacientes que estão tomando antibióticos, o crescimento de bactérias suscetíveis pode ser inibido.

E se o sangue é de uma pessoa diabética, o excesso de glicose interfere no desenvolvimento de padrões de hemólise.

Escolha do tipo de ágar-base

O ágar-base usado para a preparação do ágar-sangue pode ser muito amplo. Entre eles estão: ágar nutriente, ágar para infusão cerebral do coração, ágar tripticoa de soja, ágar Müeller Hinton, ágar Thayer Martin, ágar Columbia, ágar Brucella, ágar Campylobacter, etc.

Utilizações do ágar-sangue de acordo com o meio base usado para a sua preparação

Ágar nutriente

Esta base é a menos utilizada, pois irá crescer principalmente bactérias não exigentes, como bacilos entéricos, Pseudomonas sp , S. aureus, Bacillus sp, entre outros. Não é recomendado isolar o estreptococo.

Agar de infusão de coração e cérebro (BHI)

É um dos mais utilizados como base do ágar-sangue, pois possui os nutrientes necessários para o crescimento da maioria das bactérias, incluindo Streptococcus sp e outras bactérias exigentes. Embora não seja apropriado observar padrões de hemólise.

Com essa base, geralmente é usado sangue de cordeiro .

Também é possível preparar variantes de ágar-sangue, onde outros compostos são adicionados para isolar certos microorganismos.Por exemplo, o ágar de infusão cerebral, suplementado com sangue de coelho, cistina e glicose, serve para isolar Francisella tularensis.

Enquanto que, com o telurito de cistina, é útil para o isolamento de Corynebacterium diphteriae. Sangue humano ou de cordeiro pode ser usado.

Relacionado:  Os 12 animais mais comuns de rastreamento

Com a primeira beta-hemólise parecerá um halo estreito, enquanto com o segundo o halo será muito mais amplo.

Da mesma forma, essa base, juntamente com bacitracina, amido de milho, sangue de cavalo e outros suplementos de enriquecimento (IsoVitaleX), é utilizada para o isolamento do gênero Haemophilus sp de amostras respiratórias.

Além disso, se for adicionada a combinação de antibióticos cloranfenicol – gentamicina ou penicilina – estreptomicina com sangue de cavalo, é ideal para o isolamento de fungos patogênicos exigentes, mesmo com desempenho superior ao ágar Sabouraud glicose. Especialmente útil no isolamento de Histoplasma capsulatum .

Agar de soja Tryticasa

Essa base é a mais recomendada para uma melhor observação do padrão de hemólise e testes de diagnóstico, como os taxa de optoquina e bacitracina. É o ágar-sangue clássico que é usado rotineiramente.

Com esta base, você também pode preparar o ágar sanguíneo especial para Corynebacterium diphteriae, com telurito de cistina e sangue de cordeiro .

Da mesma forma, a combinação deste ágar com sangue de cordeiro, além de canamicina-vancomicina é ideal para o crescimento de anaeróbios, especialmente Bacteroides sp.

Ágar Müeller Hinton

Essa base suplementada com sangue é usada para realizar o antibiograma de microorganismos exigentes, como Streptococcus sp.

Também é útil para o isolamento de bactérias como Legionella pneumophila.

Agar de Thayer Martin

Este meio é ideal como base de ágar-sangue quando há suspeita do gênero Neisseria, especialmente Neisseria meningitidis, já que N. gonorrhoeae não cresce no ágar-sangue.

Serve também para realizar testes de sensibilidade a Neisseria meningitidis .

Ágar-ágar

Essa base é excelente para a semeadura de amostras de biópsia gástrica em busca de Helicobacter pylori .

O meio é preparado pela adição de 7% de sangue de cordeiro desfibrinado com antibióticos (vancomicina, trimetoprim, anfotericina B e cefsulodina) para restringir o crescimento de outros tipos de bactérias que possam estar presentes.

Esta mesma base suplementada com sangue humano ou de cordeiro, ácido nalidíxico e colistina é útil para isolar Gardnerella vaginalis.Também é ideal para avaliar a suscetibilidade antimicrobiana a antibióticos do mesmo microorganismo.

Além disso, serve para a preparação de ágar-sangue para o cultivo de anaeróbios, adicionando aminoglicosídeos e vancomicina.

Essa base permite a observação adequada dos padrões de hemólise.

Agar Brucella

Este meio usado como base do ágar sanguíneo, juntamente com a adição de vitamina K, é ideal para o cultivo de bactérias anaeróbicas. Nesse caso, recomenda-se o uso de sangue de cordeiro.

Agar de Campylobacter

O ágar Campylobacter suplementado com 5% de sangue de ovelha e 5 antibióticos (cefalotina, anfotericina B, trimetoprim, polimixina B e vancomicina) é o meio utilizado para isolar o Campylobacter jejuni em amostras de fezes.

Relacionado:  Fase G1 (ciclo celular): descrição e importância

Preparação

Cada casa comercial traz as instruções na parte de trás da embalagem para preparar um litro de meio de cultura. Os cálculos correspondentes podem ser feitos para preparar a quantidade desejada, de acordo com o ágar-base selecionado.

Pesar e dissolver

O ágar-base é desidratado (em pó), portanto deve ser dissolvido em água destilada, ajustada para pH 7,3.

A quantidade indicada pelo ágar-base escolhido é pesada e dissolvida na quantidade correspondente de água em uma fiola, depois é aquecida em calor moderado e misturada com movimentos rotativos até todo o pó ser dissolvido.

Esterilizar

Uma vez dissolvido, autoclave a 121 ° C por 20 minutos.

Agregado de sangue

Ao sair da autoclave, deixe a fiola esfriar até a temperatura variar entre 40 e 50 ° C; É uma temperatura que a pele humana suporta e, ao mesmo tempo, o ágar ainda não solidificou.

Para isso, a fiola é tocada manualmente e, se o calor é tolerável, é a temperatura ideal para adicionar a quantidade correspondente de sangue desfibrinado (50 ml por litro de ágar). Misture delicadamente para homogeneizar.

A passagem do agregado sanguíneo é crucial, porque se for feita quando o meio estiver muito quente, os glóbulos vermelhos se romperão e o meio não servirá para observar hemólise.

Se for adicionado muito frio, formar-se-ão pedaços e a superfície do meio não será lisa para poder fazer o estriado adequadamente.

Despeje em placas de Petri

Servir em placas de Petri estéreis imediatamente após a homogeneização do sangue. São derramados cerca de 20 ml em cada placa de Petri. Este procedimento é realizado em um exaustor de fluxo laminar ou próximo ao isqueiro.

No momento de servir o ágar-sangue nas placas de Petri, nenhuma bolha de ar deve permanecer na superfície da placa.Se isso acontecer, a chama do queimador de Bunsen é passada rapidamente sobre a placa para eliminá-los.

As placas são deixadas solidificar e armazenadas em um refrigerador (2-8 ° C) de maneira invertida até serem usadas.Antes de usar as placas de ágar-sangue, elas devem ser temperadas (deixe-as à temperatura ambiente) para serem semeadas.

As placas preparadas têm uma duração aproximada de 1 semana.

Referências

  1. Bayona M. Condições microbiológicas para o cultivo de Helicobacter pylori . Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
  2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clínica prática. Universidade de Cádiz, 2ª edição. Serviço de Publicações da UCA.
  3. «Agar de sangue». Wikipedia, A enciclopédia livre . 10 de dez de 2018 às 14:55 27 dez 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA
  5. Centro de Diagnóstico Veterinário de Laboratório CEDIVET. Guatemala Disponível em: trensa.com.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA

Deixe um comentário

Este site usa cookies para lhe proporcionar a melhor experiência de usuário. política de cookies, clique no link para obter mais informações.

ACEPTAR
Aviso de cookies