Agar Vogel-Johnson: fundação, preparação e usos

O ágar Vogel-Johnson é um sólido meio de cultura selectivo e diferencial, especialmente formulado para o isolamento de Staphylococcus aureus . Este meio foi criado por Vogel e Johnson em 1960 a partir da modificação do agar de glicina telurita formulado em 1955 por Zebovitz, Evans e Niven.

A modificação foi aumentar a concentração de manitol presente no meio e a incorporação de um indicador de pH. A fórmula atual é composta por triptina, extrato de levedura, manitol, fosfato dipotássico, cloreto de lítio, glicina, vermelho de fenol, ágar, solução de telurito de potássio a 1% e água.

Agar Vogel-Johnson: fundação, preparação e usos 1

Fonte: Pixinio.com/Laboratorio da Clínica ProcreaTec. Flickr

Deve-se notar que existem outros meios que, como o ágar Vogel-Johnson, são seletivos para o isolamento de S. aureus , como o ágar manitol salgado e o ágar Baird Parker. Nesse sentido, pode-se dizer que a base do ágar Vogel-Johnson é uma mistura entre o ágar manitol salgado e o ágar Baird Parker.

Na primeira, as colônias de S. aureus são diferenciadas fermentando o manitol e colocando o indicador de pH em amarelo. Por outro lado, no segundo, o S. aureus é caracterizado por reduzir o telurito ao telúrio e formar colônias cinza a pretas. Ambas as propriedades são observadas no ágar Vogel-Johnson.

Este meio, assim como seus pares, é útil para a detecção de Staphylococcus aureus em amostras de alimentos, controles sanitários de produtos industriais e em amostras clínicas.

Fundação

Ingestão de nutrientes

O meio Vogel-Johnson contém triptina e extrato de levedura; Ambas as substâncias fornecem aminoácidos de cadeia longa que servem como fontes de carbono e nitrogênio necessárias para o crescimento bacteriano. As bactérias capazes de crescer neste meio levar nutrientes a partir destas substâncias.

Poder seletivo

O ágar Vogel – Johnson é capaz de inibir o crescimento de bactérias Gram-negativas e até algumas bactérias Gram-positivas, favorecendo o desenvolvimento de estafilococos coagulase-positivos. As substâncias inibidoras são telurito de potássio, cloreto de lítio e glicina.

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Poder diferencial

As substâncias que compõem esse meio diferencial são manitol e telurito de potássio. O manitol é um carboidrato, e quando são produzidos ácidos fermentados que transformam o meio de vermelho em amarelo, o que acontece graças à presença do indicador vermelho de pH do fenol.

Considerando que, o telurito incolor, quando reduzido a telúrio livre metálico, assume uma cor cinza escuro a preto.

O Staphylococcus aureus fermenta manitol e reduz telurito de telúrio. É por isso que as colônias típicas de S. aureus neste meio são cinza ou preto cercadas por um meio amarelo.

As bactérias que crescem neste meio e não reduzem o telurito ou fermentam o manitol, formarão colônias transparentes cercadas por um meio vermelho, ainda mais intenso que a cor original, devido à alcalinização do meio pelo uso de peptonas.

Por outro lado, as bactérias que reduzem o telurito, mas não fermentam o manitol, crescerão como colônias cinza ou pretas cercadas por uma cor vermelha escura.

Se o meio fosse preparado sem a adição de telurito de potássio, as colônias de S. aureus se desenvolveriam como colônias amarelas, cercadas por um meio amarelo, como no ágar de manitol salgado.

Balanço osmótico e agente solidificante

O fosfato dipotássico mantém o equilíbrio osmótico do meio e ajusta o pH à neutralidade 7.2. Enquanto o ágar dá a consistência sólida ao meio de cultura.

Preparação

Solução de telurito de potássio a 1% p / v

Esta solução não está incluída no meio desidratado, porque não pode ser esterilizada em uma autoclave. Por esse motivo, é preparado separadamente e adicionado ao meio já esterilizado.

Algumas casas comerciais vendem a solução pronta para uso de telurito de potássio a 1%. Se você deseja se preparar em laboratório, faça o seguinte:

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Pesar 1,0 g de telurito de potássio e medir 100 ml de água destilada. Dissolva o telurito de potássio em uma parte da água e complete a quantidade de água até atingir 100 ml. Esterilize a solução pelo método de filtração.

Base de ágar médio Vogel-Johnson

Pesar 60 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura é aquecida até ferver para ajudar na dissolução completa. Durante o processo de dissolução, o meio é frequentemente agitado.

Esterilize em uma autoclave a 15 libras de pressão e 121 ° C por 15 minutos. Retire da autoclave e deixe repousar até que o meio atinja uma temperatura aproximada de 45 a 50 ° C. Adicione 20 ml da solução de telurito de potássio a 1% previamente preparada.

Misture e despeje em placas de Petri estéreis. Deixar solidificar e pedir invertido em plaquetas para armazenamento posterior na geladeira até o uso.

O pH final do meio preparado deve ser 7,2 ± 0,2.

Antes de semear uma amostra, aguarde a placa atingir a temperatura ambiente.

A cor do meio preparado é vermelho.

Use

Embora possa ser utilizado para o isolamento de S. aureus em qualquer tipo de amostra, é utilizado principalmente para análises microbiológicas de produtos farmacêuticos, cosméticos e alimentícios.

Recomenda-se que o inóculo seja denso. A semeadura pode ser feita riscando com uma alça de platina ou pela superfície com uma espátula de Drigalski.

As placas são incubadas a 35-37 ° C por 24 a 48 horas em aerobiose.

Controle de qualidade

As seguintes cepas de controle podem ser usadas para executar o controle de qualidade do meio Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ou Proteus mirabilis ATCC 43071.

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O resultado esperado é o seguinte: para S. aureus estirpe crescimento satisfatório com colônias negras cercadas por meio amarelo. Para S. epidermidis, o crescimento é regular, com colônias translúcidas ou negras, cercadas por metade da cor vermelha.

Da mesma forma, para E. coli, espera-se que haja inibição total e para Proteus mirabilis inibição parcial ou total; se crescer, dificilmente e as colônias serão negras cercadas por metade da cor vermelha.

Referências

  1. Laboratórios BD. VJ (Vogel e Johnson Agar). 2006. Disponível em: bd.com
  2. Laboratórios britânicos. Agar Vogel-Johnson. 2015. Disponível em: britanialab.com
  3. Laboratórios britânicos. Telúrito de potássio. 2015. Disponível em: britania.com
  4. Laboratório Himedia. Meio de ágar Vogel-Johnson. 2018. Disponível em: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Ágar-base Vogel-Johnson. Manual de Microbiologia da Merck. 12ª Edição, pp 502-503. Disponível em: Usuários / Equipe / Downloads
  6. Colaboradores da Wikipédia, «Ágar Vogel Jonhson», da Wikipédia para o livro enciclopédico, disponível em: wikipedia.org.
  7. Norma da Aliança Venezuelana 1292-89. (1989). Alimento. Isolamento e contagem de Staphylococcus aureus. Disponível em: sencamer.gob.ve

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