Caldo de lactose: fundação, preparação e usos

O caldo de lactose é um meio líquido, não selectivo, utilizado principalmente como um meio de pré-enriquecimento no isolamento de estirpes de Salmonella a partir da análise microbiológica de alimentos processados, produtos lácteos ou água. Isso é recomendado pela Comissão Internacional de Especificações Microbiológicas para Alimentos (ICMPF).

O meio contém gelatina digerida enzimática, extrato de carne e lactose, substâncias necessárias para o crescimento bacteriano. Além disso, a lactose é um carboidrato fermentável; portanto, alguns coliformes são capazes de desdobram-na com a produção de gás.

Caldo de lactose: fundação, preparação e usos 1

Caldos de lactose com turbidez. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil

Portanto, o caldo de lactose é recomendado pela Associação Americana de Saúde Pública (APHA) para o estudo presuntivo de bactérias coliformes totais e fecais, qualificando-o como uma excelente alternativa para substituir o caldo de triptose de lauril sulfato na técnica padrão do Número Mais Provável (NMP ), usado para análises microbiológicas de amostras de alimentos, leite e águas superficiais, subterrâneas, recreativas, domésticas e industriais.

Fundação

Para a análise microbiológica de algumas amostras, a etapa de pré-enriquecimento é essencial para recuperar um microrganismo específico que pode estar em uma quantidade muito baixa ou em condições desfavoráveis ​​que violam ou minimizam sua viabilidade.

É o caso de alimentos secos e processados, possivelmente contaminados com Salmonellas sp . Nesses casos, se as bactérias estiverem presentes, elas sofreram abuso físico e químico durante o processo de produção do produto.

Para que os microrganismos sejam expostos a fatores adversos, como desidratação, exposição a produtos inibitórios ou tóxicos, e a sobreposição gerada pela presença de outras bactérias em maiores quantidades, entre outros.

Nesse sentido, o caldo de lactose exerce efeito reparador nas estruturas danificadas do microorganismo, fazendo com que ele se recupere e se reproduza, para que possa ser detectado.

Da mesma forma, o caldo de lactose tem a capacidade de diluir substâncias inibidoras que podem afetar sua viabilidade, permitindo seu desenvolvimento.Além disso, a composição nutricional do caldo de lactose é estratégica para favorecer o crescimento de Salmonella sp sobre outros microrganismos.

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Para identificação final, deve ser sub-cultivada em direção a outros meios de cultivo definitivo.

Por outro lado, a composição do meio também permite detectar microorganismos fermentadores de lactose que produzem gás.

Preparação

Para preparar um litro de caldo de lactose, 13 gramas do meio desidratado devem ser pesados ​​e dissolvidos em 1000 ml de água destilada.

Para ajudar a dissolver o meio na água, a solução pode ser aquecida levemente, mas não muito.

Uma vez homogênea, a solução é preparada da seguinte forma: se o caldo for usado para procurar coliformes, um rack com tubos de ensaio é preparado, no qual um tubo de fermentação Durham é inserido de cabeça para baixo.

O tubo de Durham é um detalhe muito importante, pois detecta a formação de gás, um grande valor na busca de coliformes.

Depois que os tubos são preparados, 10 ml de caldo de lactose são dispensados, uma quantidade que deve ser suficiente para cobrir todo o tubo de Durham.

Se o caldo de lactose for usado como caldo de pré-enriquecimento, não é necessário colocar o tubo de fermentação Durham. E n neste caso, metade do número (225 ml), que vai ser servido, em garrafas de 500 ml, de boca larga, o parafuso de calor superior resistente é necessária.

Posteriormente, os tubos ou frascos são levados para a autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

O meio deve estar em um pH final de 6,9 ​​± 0,2 a 25 ° C.

Os caldos são armazenados na geladeira até o uso.

Antes de usar os caldos devem ser temperados à temperatura ambiente.

Por outro lado, o caldo de lactose também pode ser preparado em dupla concentração.

Alguns laboratórios adicionam roxo de bromocresol ao caldo de lactose como um indicador de pH, para mostrar aos tubos onde houve fermentação de lactose devido à mudança de cor. Nesse caso, o caldo fica roxo e, se houver fermentação, fica amarelo.

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Usos

Nos laboratórios de microbiologia, o caldo de lactose é amplamente utilizado porque é um meio relativamente barato que oferece resultados confiáveis ​​e rápidos (24-48 horas).

Pode ser usado para a análise de coliformes totais e fecais em água e alimentos ou como caldo de pré-enriquecimento para Salmonella.

Pré-enriquecimento

O pré-enriquecimento é um passo anterior para enriquecer a amostra, o que melhora muito a recuperação das bactérias Salmonella em alimentos processados.

Para isso, a amostra de alimento sólido (25 gramas) ou líquido (25 ml) é semeada em 225 ml de caldo de lactose, incubando por 24 a 48 horas. Posteriormente, será subcultivado em um meio enriquecido, como caldo de selenito cistina ou caldo de tetrationato.Depois, vai para a mídia seletiva XLD e SS.

Análise dos coliformes totais e fecais

É um excelente meio como indicador de contaminação fecal.

Portanto, o caldo de lactose é ideal para a fase presuntiva do estudo de coliformes pelo método do Número Mais Provável.

Para amostras nas quais há suspeita de um grande número de coliformes, uma quantidade menor será inoculada (1 ml), enquanto para amostras nas quais há suspeita de uma quantidade menor de coliformes, mais volume de amostras (10 ml) será inoculado.

Para as análises , são feitas as diluições 10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , formando uma bateria de 3-5 tubos para cada concentração utilizada.

De cada diluição, o mesmo volume é semeado nos caldos de lactose.

Os tubos são incubados por 24 horas. Os caldos negativos são incubados por mais 24 horas.

A interpretação dos resultados é feita pela observação de duas características: a primeira é a presença ou ausência de turbidez e, como esse meio não contém um indicador de pH, não haverá alteração de cor.

O segundo é a produção ou não de gás. O gás é facilmente evidenciado no tubo de Durham, pelo aparecimento de uma ou várias bolhas de ar no interior.

É considerado positivo se ambas as características forem observadas, isto é, turbidez com a produção de gás.Os tubos positivos devem ser semeados novamente em meio de confirmação (Caldo Verde Brilhante 2% Bile e Caldo CE).

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Controle de qualidade de mídia

– Na preparação do meio, é importante não esquecer de colocar os tubos Durhams se o objetivo do mesmo for o estudo de coliformes.

– Não superaqueça o meio antes de esterilizar.

– Distribua nos tubos de ensaio antes da esterilização, nunca depois.

– Não use se o meio tiver mais de 3 meses de preparação.

– Não use se notar alguma alteração nas características usuais do meio.

– Ao preparar um lote de caldo de lactose, teste sua qualidade semeando estirpes conhecidas como Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii e Klebsiella pneumoniae. Eles crescem muito bem, com produção de gás (controle positivo).

– Também pode incluir Pseudomonas aeruginosa , Salmonella typhimurium ou Enterococcus faecalis, que crescem bem, mas sem produção de gás (controle negativo).

– Deve-se esperar que a cor original do meio desidratado seja bege e a do meio preparado seja amarelo muito claro e transparente. Se houver uma alteração na cor ou na aparência, pode haver deterioração.

Referências

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologia e microbiologia ambiental. (2013) 1ª edição. Universidade de Cartagenas, Colômbia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B e Velázquez O. (2009). Técnicas de análise microbiológica de alimentos. 2nd ed. Faculdade de Química, UNAM. México
  3. Laboratórios Conda Pronadisa. 2017. Concentração dupla de caldo de lactose (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Comparação de técnicas para a extração de bactérias coliformes do sedimento do lago Xochimilco, México. Rev. Argentina Microbiol . 2013; 45 (3): 180-184. Disponível em: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Determinação da qualidade microbiológica das águas dos poços artesianos de distritos dos departamentos do município Central, Cordilheira e Capital. Mem. Inst. Invest. Cem Saúde 2013; 11 (1): 5-14. Disponível em: scielo.iics.

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