
O caldo de tetrationato é um meio de cultura seletivo utilizado para o isolamento e identificação de Salmonella em amostras clínicas e de alimentos. Sua formulação específica inibe o crescimento de bactérias não desejadas, permitindo que apenas as cepas de Salmonella cresçam. A preparação do caldo de tetrationato envolve a dissolução do meio em água destilada, seguida pela esterilização em autoclave. Uma vez preparado, o caldo de tetrationato é utilizado em testes de cultivo bacteriano para detectar a presença de Salmonella, uma importante bactéria patogênica. Seu uso é fundamental para garantir a segurança alimentar e a saúde pública, uma vez que a Salmonella é uma das principais causas de intoxicação alimentar em todo o mundo.
Descubra a finalidade do caldo Tetrationato na microbiologia e seu uso clínico.
O caldo Tetrationato é um meio de cultura utilizado na microbiologia para o isolamento e identificação de bactérias do gênero Salmonella. Sua finalidade principal é a inibição de bactérias gram-positivas, permitindo o crescimento seletivo de bactérias gram-negativas, como as salmonelas.
A preparação do caldo Tetrationato envolve a adição de tetrationato de cristal violeta, que age como um agente seletivo, inibindo o crescimento de bactérias gram-positivas. Além disso, o caldo também contém sais nutritivos que favorecem o crescimento das bactérias alvo, como as salmonelas.
O uso clínico do caldo Tetrationato é de extrema importância para o diagnóstico de infecções causadas por Salmonella, uma vez que permite o isolamento e identificação precisa dessas bactérias. A detecção precoce de Salmonella é fundamental para o tratamento adequado e prevenção de complicações para os pacientes.
Portanto, o caldo Tetrationato desempenha um papel crucial na microbiologia clínica, auxiliando no diagnóstico de infecções por Salmonella e contribuindo para a saúde e bem-estar dos pacientes.
Caldo de tetrationato: justificativa, preparação e usos
O caldo de tetrationato ou caldo TT é um meio de cultura líquido selectivo para o enriquecimento e recuperação de isolados de Salmonella. Foi criado por Müeller e posteriormente modificado por Kauffmann, então há quem o chame de caldo de Müeller-Kauffmann.
O meio original continha peptonas protéicas, carbonato de cálcio e tiossulfato de sódio. Kauffmann adicionou sais biliares e criou outra modalidade com verde brilhante . Essas substâncias inibem o crescimento de coliformes, deixando o meio livre para o desenvolvimento de bactérias patogênicas, neste caso a Salmonella.
A modificação teve muito sucesso porque aumentou significativamente a sensibilidade do meio. Portanto, atualmente é útil para a pesquisa de Salmonella em qualquer tipo de amostra, mas principalmente em fezes e alimentos sólidos ou líquidos.
Sua preparação consiste em duas fases; O meio comercial é uma base para a preparação do caldo de tetrationato e, subsequentemente, para que o tetrationato possa ser formado, é adicionada uma solução de iodo iodado que completa o meio.
A Associação Americana de Saúde Pública (APHA) recomenda o uso de caldo de tetrationato suplementado com verde claro para o enriquecimento de amostras em busca de Salmonella, uma vez que é mais seletivo que o caldo de tetrationato e o caldo de selenito.
Em geral, o caldo de tetrationato é ideal quando se suspeita da presença de bactérias do gênero Salmonella em pequenas quantidades ou que são maltratadas pela exposição a substâncias inibidoras ou por processos industriais que minimizam sua viabilidade.
Fundação
As peptonas presentes correspondem a caseína digerida pancreática e tecido animal digerido péptico. Eles fornecem a fonte de carbono, nitrogênio e nutrientes em geral para o crescimento bacteriano.
Por outro lado, o tiossulfato de sódio reage com a solução iodada para formar o tetrationato. Isso inibe o crescimento de coliformes e favorece o desenvolvimento de bactérias que contêm a enzima tetrationato redutase, entre elas o gênero Salmonella, mas também Proteus.
Os sais biliares também atuam como um inibidor da maioria das bactérias Gram-positivas e algumas Gram-negativas (coliformes).
O carbonato de cálcio absorve substâncias tóxicas geradas pela decomposição do tetrationato, que forma o ácido sulfúrico . Nesse sentido, o carbonato de cálcio neutraliza a acidez, mantendo o pH do meio estável.
No caso da modalidade verde-clara, essa substância aumenta o poder seletivo do caldo de tetrationato, inibindo outros microorganismos além do gênero Salmonella.
Preparação
– Caldo de tetrationato
Solução de iodo iodo
Pesar:
- 6 gr de iodo.
- 5 gr de iodeto de potássio.
O iodeto de potássio é dissolvido em aproximadamente 5 ml de água destilada estéril, depois o iodo é adicionado gradualmente enquanto a mistura é aquecida. Depois de completamente dissolvido, é lavado com água destilada estéril até atingir um volume final de 20 ml.
Base média para caldo de tetrationato
Pesar 46 gramas do meio desidratado e suspender em 1 litro de água destilada estéril. Misturando e aquecendo até dissolver completamente, ele pode ferver apenas por alguns minutos. Não esterilize na autoclave. A base do meio é deixada arrefecer até aproximadamente 45 ° C e nessa altura são adicionados 20 ml da solução iodada.
Depois de adicionar a solução iodada ao meio, ela deve ser usada imediatamente. Se você não quiser usar a mistura inteira, faça o seguinte:
10 ml do meio base são distribuídos em tubos, e apenas os que serão inoculados com as amostras são adicionados 0,2 ml da solução iodada.
Os que não serão utilizados ainda podem ser armazenados na geladeira; no entanto, como o meio não é esterilizado, o ideal é preparar a quantidade exata necessária.
A cor do meio antes de adicionar a solução de iodo iodado é branca leitosa com precipitado branco e após agregado é marrom com um precipitado denso. O precipitado observado é normal e corresponde ao carbonato de cálcio que não se dissolve. O pH final do meio é 8,4 ± 0,2.
-Vário caldo de tetrationato com verde brilhante
Para preparar o caldo de tetrationato verde-claro, todos os passos descritos acima são realizados, mas adicionalmente 10 ml da solução verde-clara preparada a 0,1% são adicionados à mistura.
Verde brilhante
Esta solução é preparada da seguinte maneira:
Pesar 0,1 g de verde brilhante e suspender em 100 ml de água destilada. Aqueça até ferver para alcançar sua dissolução total. Armazenar em jarra de âmbar.
Use
Para amostras de fezes ( coprocultura ), o protocolo é o seguinte:
Inocule 1 g de fezes sólidas ou 1 ml de fezes líquidas em um tubo com 10 ml de caldo de tetrationato pronto para uso. Agitar vigorosamente e incubar em aerobiose a 43 ° C por 6-24 horas.
Posteriormente, tome uma alíquota de 10 a 20 µl do caldo e subcultura em meio seletivo para Salmonella, como ágar SS, ágar XLD, ágar verde brilhante, ágar entérico Hektoen, entre outros.
Paralelamente, os meios seletivos para Salmonella devem ser inoculados com a amostra direta (fezes) sem enriquecimento.Para amostras de zaragatoa retal, descarregue o material coletado no tubo e proceda como descrito acima.
Para amostras de alimentos, pesar 10 g de alimento sólido ou 10 ml de alimento líquido e inocular uma garrafa com 100 ml de caldo de tetrationato pronto para uso. Proceda da mesma maneira como descrito acima, mas incube a 37 ° C.
Como você pode ver, a proporção entre a amostra e o caldo será sempre 1:10.
Controle de qualidade
Para testar o meio de cultura, podem ser utilizadas cepas de controle conhecidas. As mais utilizadas são as linhagens certificadas ATCC.
As cepas a serem usadas são Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.
É esperado um excelente desenvolvimento para as cepas de Salmonella, enquanto Escherichia coli pode ter um desenvolvimento fraco ou regular, e as cepas Gram-positivas (Enterococcus e Staphylococcus) são parcial ou totalmente inibidas.
Recomendações
-Como esse meio não inibe o crescimento de Proteus, alguns laboratórios geralmente colocam 40 mg / L de novobiocina para impedir o desenvolvimento dessa cepa microbiana. O antibiótico deve ser adicionado antes da solução de iodo.
– Após a preparação do meio, incluindo a solução de iodo, não deve demorar mais de 2 horas para ser inoculado.
-No momento da distribuição do meio nos tubos, a mistura deve ser homogeneizada continuamente para ressuspender o precipitado formado.
-Em amostras menos contaminadas, o caldo de tetrationato é incubado a 35-37 ° C, e em amostras altamente contaminadas é recomendada a incubação a 43 ° C.
Referências
- Laboratório Conda Pronadisa. 2010. Base de caldo de tetrationato de acordo com Müeller-Kauffmann. Disponível em:
- Laboratórios BD 2003. Base de caldo de tetrationato. Disponível em:
- Laboratórios britânicos. 2015. Caldo de base de tetrationato. Disponível em:
- Mídia BBL. 2005. Preparado em tubo para o cultivo de espécies de Salmonella.
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Comparação entre meios de cultura de selenito de sódio e tetrationato de sódio, ambos incubados a 37 ° C e 42 ° C por o isolamento de Salmonella spp das fezes dos portadores. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220