Caldo de tioglicolato: justificativa, preparação e usos

O caldo de tioglicolato é um meio enriquecido consistência fluida. Ele é conhecido pelo acrônimo FTM por seu acrônimo Fluid Thioglycollate Medium. Foi criado por Brewer e modificado em 1944 por Vera, que incorporou a caseína peptona.

Este meio tem um baixo potencial de oxidação – redução, motivo pelo qual não é recomendado para o desenvolvimento de bactérias aeróbicas estritas, mas é ideal para recuperar bactérias aeróbicas facultativas, anaeróbios estritos e microaerófilos pouco exigentes.

Caldo de tioglicolato: justificativa, preparação e usos 1

Caldo de tioglicolato sem indicador. Mostra corrimento vaginal. Fonte: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

O alto desempenho observado com este meio no isolamento e recuperação de uma grande variedade de microrganismos tornou aceito pela Farmacopeia dos Estados Unidos (USP), pela Associação Oficial de Químicos Agrícolas (AOAC) e pela Farmacopeia Europeia ( EP).

Essas organizações o recomendam para testes de controle de esterilidade de produtos farmacêuticos e para o enriquecimento de vários tipos de amostras.

O teor de tioglicolato é composto de extrato de levedura, caseína pancreática digerida, dextrose anidra, L-cistina, cloreto de sódio, tioglicolato de sódio, resazurina e ágar em pequenas quantidades.

Várias versões desta forma, estes incluem: tioglicolato de caldo de carne com indicador de tioglicolato sem indicador, tioglicolato de caldo de IC enriquecido com hemina e vitamina K Indicador 1, e tioglicolato com carbonato de cálcio.

Deve-se notar que a variante do caldo de tioglicolato enriquecido com hemina e vitamina K serve para melhorar o crescimento de anaeróbios estritos estritos, e a variante do caldo de tioglicolato contendo carbonato de cálcio é útil para neutralizar os ácidos produzidos durante o crescimento microbiano.

Fundação

O caldo de tioglicolato é considerado um meio de enriquecimento, não seletivo, pois permite o desenvolvimento da maioria das bactérias não exigentes. As necessidades nutricionais são fornecidas pelo extrato de levedura, digerido pelo pâncreas e glicose.

Por outro lado, esse meio, apesar de ser caldo, contém uma pequena quantidade de ágar; Isso significa que ele tem um baixo potencial de redução da oxidação, porque diminui a entrada de oxigênio, de modo que o oxigênio diminui à medida que se aprofunda no tubo.

É por isso que este meio é ideal para o desenvolvimento de bactérias aeróbicas facultativas, microaerofílicas e anaeróbias estritas, as últimas 2 sem a necessidade de incubar sob essas condições. O mesmo meio regula a quantidade de oxigênio dentro do meio, estando ausente no fundo do tubo e em quantidade suficiente na superfície.

Relacionado:  Ahuehuete: Ciclo de Vida, Significado e Características

Da mesma forma, o tioglicolato e a L-cistina atuam como agentes redutores, contribuindo para a prevenção do acúmulo de substâncias nocivas ao desenvolvimento bacteriano, como o peróxido. Além disso, esses compostos contêm grupos sulfidrila (-SH-), neutralizando os efeitos inibitórios de derivados mercuriais e arsênicos, entre outros metais pesados.

Por outro lado, a resazurina é um indicador de redução da ferrugem. Esta substância é incolor quando reduzida e rosa quando oxidada. Existem variantes de caldo de tioglicolato com indicador e sem indicador. Seu uso dependerá do tipo de amostra e da preferência do laboratório.

Enquanto isso, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico do caldo de tioglicolato e o uso de glicose na forma anidra evita o excesso de umidade no meio desidratado.

Preparação

Caldo de tioglicolato com indicador

Pesar 29,75 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada . A mistura é deixada repousar por aproximadamente 5 minutos. Leve a uma fonte de calor e mexa frequentemente até que se dissolva completamente.

Despeje o meio em tubos de ensaio e autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe esfriar antes de usar. Verifique a inserção da casa comercial para sua conservação. Alguns recomendam armazenar em temperatura ambiente em local escuro e outros em uma geladeira protegida da luz.

O pH do meio preparado é de 7,1 ± 0,2.

A cor do meio desidratado é bege claro e preparado é âmbar claro com alguma opalescência.

Caldo de tioglicolato com indicador enriquecido com hemina e vitamina K 1

Não são meios comerciais que já têm hemina e vitamina K 1 , especialmente para o cultivo de anaeróbios.

Se o meio enriquecido para anaeróbios não estiver disponível, o caldo básico de tioglicolato pode ser preparado. Para isso, são adicionados 10 mg de cloridrato de hemina e 1 mg de vitamina K1 por litro de meio. No entanto, se for adicionado sangue ou soro ao caldo de tioglicolato, não é necessário adicionar hemina ou vitamina K.

Relacionado:  Flora e fauna de Río Negro: espécies representativas

Caldo de tioglicolato com carbonato de cálcio

Vem comercialmente e é preparado seguindo as instruções da bula.

Caldo de tioglicolato sem indicador

Tem a mesma composição básica de tioglicolato, mas não contém resazurina.

Pesar 30 g do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. O restante da preparação é o mesmo descrito no caldo de tioglicolato com indicador.

Use

O caldo de tioglicolato é útil para o enriquecimento de amostras clínicas, especialmente para aquelas de locais estéreis. Também é útil para amostras não clínicas, como cosméticos, medicamentos, etc.

Para a inoculação de amostras líquidas (como LCR, líquido sinovial, entre outras), as amostras são primeiro centrifugadas e, em seguida, são retiradas 2 gotas do sedimento e colocadas no caldo de tioglicolato. Incubar a 35 ° C por 24 horas. Se neste momento não houver crescimento (turbidez), ele é incubado por até 7 dias.

Se a amostra for colhida com hissopo, o meio de cultura é inoculado primeiro nas placas e, finalmente, o swab é introduzido no caldo, a parte saliente é cortada e o tubo é tapado, deixando o swab dentro. Incubar a 35 ° C por 24 horas, 7 dias no máximo.

Para amostras sólidas, deve-se homogeneizar em solução fisiológica salina (SSF) e depois inocular o caldo de tioglicolato com 2 gotas da suspensão.

Às vezes, pode ser usado como meio de transporte para amostras em que se suspeita da presença de anaeróbios estritos ou como caldo de enriquecimento de reserva.

A variante do caldo de tioglicolato com carbonato de cálcio é utilizada para a manutenção das cepas de controle por mais tempo, pois possui a capacidade de neutralizar os ácidos produzidos pelo uso da glicose; Esses ácidos são tóxicos para certas bactérias.

O crescimento no caldo de tioglicolato será observado pela turbidez do meio. Recomenda-se a realização de uma coloração de Gram e subcultura subsequente em meio não seletivo e seletivo, dependendo do tipo de amostra e dos microrganismos suspeitos.

Controle de qualidade

Para o controle da esterilidade, recomenda-se incubar um ou dois caldos sem inocular. O resultado esperado é um caldo transparente, sem alteração de cor, embora seja normal observar uma leve cor rosa na superfície do tubo.

Relacionado:  Isolamento ecológico: mecanismo e exemplos

Para controlo de qualidade deve inocular entre 10-100 CFU de estirpes certificados, tais como controlos Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Incubar a 30-35 ° C em aerobiose por 24 horas até no máximo 3 dias, uma vez que esses microrganismos estão crescendo rapidamente.

Em todos os casos, é esperado um bom desenvolvimento, com exceção de Micrococcus luteus e Bacillus subtilis, onde pode haver um desenvolvimento moderado.

Para o controlo de tioglicolato de caldo de IC enriquecido com hemina e vitamina K qualidade 1 , podem ser usadas estirpes de controlo de Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 e Bacteroides fragilis ATCC 25285. O resultado esperado é um crescimento satisfatório.

Recomendações

-Em algumas ocasiões, pode-se observar que a superfície do caldo de tioglicolato com indicador fica rosa; Isto é devido à oxidação do meio. Se a cor rosa cobrir 30% ou mais do caldo total, ela pode ser aquecida em banho-maria por 5 minutos, resfriada novamente e usada.

Isso eliminará o oxigênio absorvido, retornando o meio à sua cor original. Este procedimento pode ser feito apenas uma vez.

-Para melhorar o crescimento de bactérias aeróbicas, deve-se incubar com a tampa ligeiramente frouxa. No entanto, é preferível usar um caldo de infusão de coração cerebral ou caldo de soja tripticasa para o desenvolvimento adequado de aeróbios estritos.

-O congelamento do meio ou superaquecimento deve ser evitado, pois as duas condições danificam o meio.

-Luz direta danifica o meio de cultura, deve ser mantido protegido da luz.

Referências

  1. Laboratórios britânicos. Tioglicolato USP com indicador. 2015. Disponível em: labBritania.com.
  2. Laboratórios Chios Sas. 2019. Caldo de tioglicolato. Disponível em: quios.com.co
  3. Laboratórios BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Disponível em: bd.com/Europe
  4. Meio BBL preparado em tubos para o cultivo de microrganismos anaeróbicos. Meios de tioglicolato. 2013. Disponível em: bd.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Deixe um comentário

Este site usa cookies para lhe proporcionar a melhor experiência de usuário. política de cookies, clique no link para obter mais informações.

ACEPTAR
Aviso de cookies