Meio MIO: fundação, preparação e usos

O meio MIO é um teste bioquímico usado para ajudar a identificar espécies de bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae. É bastante nutritivo e é composto de glicose, extrato de levedura, peptona, triptein, cloridrato de L-ornitina, roxo de bromocresol e ágar.

O significado de sua sigla (MIO) descreve cada um dos parâmetros que podem ser observados neste meio; Motilidade, indole e ornitina. Motilidade é a capacidade do microrganismo de se mover através da presença de flagelos. Para que essa propriedade seja observada, a consistência do meio deve ser semi-sólida, para que a preparação tenha menos ágar.

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Esquema de interpretação dos resultados no meio MIO. Fonte: Elaborado pelo autor MSc. Marielsa Gil

A produção de indol evidencia a presença da enzima triptofanase que atua no aminoácido triptofano, sendo necessário o uso de um reagente revelador para tornar visível a produção de indol.

Finalmente, a ornitina determina se a bactéria é capaz de descarboxilar o aminoácido, ou seja, se possui a enzima orinitina descarboxilase.

Fundação

Peptona, extrato de levedura e triptina

Esses elementos contribuem para o poder nutricional deste meio. Eles servem como fonte de nutrientes e aminoácidos essenciais para o desenvolvimento bacteriano.

Além disso, o triptein é uma fonte de triptofano para mostrar a presença da enzima triptofanase, que degrada o triptofano por uma desaminação redutora que libera indol, ácido pirúvico, amônia e energia.

O indol é incolor, portanto sua presença é revelada pela adição de cinco gotas do reagente Ehrlich ou Kovacs, ambos com p-dimetilaminobenzaldeído.

O grupo aldeído desse composto reage com o indol, gerando um produto vermelho fúcsia em forma de anel na superfície do ágar.

Qualquer traço de cor deve ser considerado como um teste positivo. O teste deve ser lido imediatamente, à medida que o tempo passa, a cor diminui.

Por outro lado, este teste deve ser revelado após o registro dos resultados de motilidade e descarboxilação da ornitina.

Interpretação

Teste positivo: formação de um anel vermelho fúcsia pela adição de gotas do reagente Kovacs.

Teste negativo: não há formação de anéis.

Motilidade

A capacidade das bactérias se moverem será evidenciada se um ambiente nublado for observado ou se houver uma linha de crescimento espessa que se expande em torno da inoculação inicial.

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Um teste de motilidade negativo será evidenciado pela observação de uma fina linha de crescimento, e tudo ao seu redor será sem crescimento.

É importante que a motilidade seja lida antes de revelar o indol, uma vez que o agregado de reagente borra todo o meio.

Nas bactérias móveis, mas com crescimento lento, é difícil demonstrar sua motilidade com este meio. Nesse caso, recomenda-se o uso de outros testes ou métodos, como o meio de motilidade ou o método pendente de queda.

Glicose

A glicose é o carboidrato fermentável que, além de fornecer energia, acidifica o meio, uma condição necessária para a descarboxilação do aminoácido ornitina.

A fermentação da glicose deve sempre ocorrer, com base no princípio de que todas as bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae fermentação da glicose.

L-Ornitina

Se a bactéria produz a enzima ornitina descarboxilase, ela pode agir assim que o meio for acidificado pela fermentação da glicose.

A enzima ornitina descarboxilase atua no grupo carboxila do aminoácido produzindo uma amina chamada putresina que alcaliniza novamente o meio.

Este teste deve ser lido após 24 horas de incubação, porque se você tentar ler antes, poderá interpretar mal o teste com um falso negativo.

Lembre-se de que a primeira reação que ocorre é a fermentação da glicose; portanto, o meio fica amarelo em uma fase inicial (primeiras 10 a 12 horas). Se a descarboxilação da ornitina ocorrer posteriormente, o meio ficará roxo.

É importante interpretar o teste de descarboxilação da ornitina antes de revelar o indol, pois o agregado de reagente de Kovacs modifica a cor do meio.

Interpretação

Teste negativo: fundo amarelo ou amarelo médio.

Teste positivo: meio completamente roxo.

Indicador PH

Nesse caso, o roxo de bromocresol é usado; aquele encarregado de revelar quando há uma mudança de pH no meio. Quando acidificado, o indicador fica amarelo e, quando alcalinizado, fica roxo.

Sementeira e técnica de desenvolvimento

Para semear o meio MIO, é usada uma agulha ou anse reta e com ela é coletada uma porção da colônia a ser estudada.

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Uma punção profunda é feita no MIO do meio em uma linha reta. Não é aconselhável realizar punção dupla, pois pode dar uma imagem falsa de motilidade se as punções não forem realizadas no mesmo local.

Incubar por 24 a 48 horas a 37 ° C em aerobiose.Observe os resultados nesta ordem: motilidade, descarboxilação da ornitina e, finalmente, revele o indol.

É aconselhável remover assepticamente 2 ml do meio, transferi-lo para um tubo estéril e realizar o teste de indol, para que, se for negativo, o restante do tubo original possa ser incubado por mais 24 horas, para revelar o indol novamente.

O desenvolvimento do indol é realizado da seguinte forma: 3 a 5 gotas do reagente Kovacs são adicionadas ao meio MIO e agitadas vigorosamente. Observa-se se um anel vermelho fúcsia aparece ou não.

Preparação

Metade da minha

Pesar 31 g do meio MIO e dissolver em um litro de água destilada.

Aqueça até a mistura ferver por um minuto, mexendo sempre até que o ágar se dissolva completamente. Distribua 4 ml do meio nos tubos de ensaio 13/100 com tampa de algodão.

Esterilizar em autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Retire da autoclave e deixe repousar sobre um rack, para formar um bloco semi-sólido.

Conservar no frigorífico 2-8 ° C. Deixe temperar antes de semear a cepa bacteriana.

A cor do meio desidratado é bege e a cor do meio preparada roxa ligeiramente opalescente.

O pH final do meio preparado é de 6,5 ± 0,2

O meio fica amarelo com pH ácido e é roxo em pH alcalino.

Reagente de Kovacs (desenvolvedor de teste indole)

Este reagente é preparado da seguinte forma:

São medidos 150 ml de álcool amílico, isoamílico ou butílico (qualquer um dos três). São dissolvidos 10 g de p-dimetilaminobenzaldeído. Subsequentemente, 50 ml de ácido clorídrico concentrado são adicionados lentamente .

O reagente preparado é incolor ou amarelo claro. Deve ser armazenado em uma garrafa de âmbar e mantido em uma geladeira. Uma cor marrom escura mostra sua deterioração.

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O reagente de Kovacs também pode ser substituído pelo reagente de Ehrlich. O último, sendo mais sensível, é preferido para revelar indol em bactérias que o produzem em quantidades mínimas, como em alguns bacilos Gram-negativos não fermentativos e em alguns anaeróbios.

Use

Este meio é um teste que complementa uma bateria de testes bioquímicos para a identificação de bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae.

Os dados de descarboxilação de ornitina servem para diferenciar Shigella sonnei, que é positiva, de Shigella boydii, Shigella flexneri e S. dysenterieae, que são negativas.

Também diferencia o gênero Klebsiella, que é negativo, do gênero Enterobacter, onde a maioria de suas espécies é positiva.

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Fonte: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Controle de qualidade

Cada vez que um lote de mídia MIO é preparado, um teste de controle pode ser realizado. Para isso, cepas conhecidas ou certificadas são usadas para observar o comportamento do meio.

As estirpes que podem ser utilizadas são Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes e Proteus mirabilis.

Os resultados esperados são E. coli e M. morganii. Eles dão M: +, I: + e O: +.

Klebsiella pneumoniae dá tudo negativo (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis e Enterobacter aerogenes fornecem M: + I: – e O: +.

Referências

  1. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3rd ed. Editora Panamericana. Bons ares. Argentina
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  4. Laboratórios britânicos. MIO Medio 2015. Disponível em: britanialab.com
  5. Laboratórios BD Meio BBL Motility Indole Ornithine (MIO). 2007. Disponível em: bd.com
  6. Laboratórios Valtek MIO médio Motilidade, Índole, Ornitina. 2010. Disponível em: andinamedica.com

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