Tampão de Fosfato (PBS): justificativa, preparação e usos

O Tampão de Fosfato Salino (PBS) é uma solução usada em laboratórios de biologia molecular e bioquímica para manter o pH de amostras biológicas estável durante experimentos. Esta solução é preparada a partir da mistura de fosfato, cloreto de sódio e água destilada, resultando em uma solução isotônica e com pH neutro.

A justificativa para o uso do PBS está na sua capacidade de manter a estabilidade das amostras biológicas, evitando alterações no pH que poderiam comprometer os resultados dos experimentos. Além disso, o PBS é compatível com a maioria dos processos bioquímicos e não interfere nas reações enzimáticas.

Os usos do Tampão de Fosfato Salino incluem a diluição de amostras, lavagem de células e tecidos, reações de imunofluorescência, western blotting, entre outros. Sua versatilidade e eficácia tornam o PBS um reagente essencial em laboratórios de pesquisa biomédica.

Benefícios e aplicações do tampão fosfato na área de biologia molecular.

O tampão fosfato (PBS) é uma solução utilizada em diversas aplicações na área de biologia molecular devido aos seus benefícios e propriedades. Este tampão é composto por fosfato de sódio, cloreto de sódio e potássio, e tem um pH neutro, o que o torna ideal para manter a estabilidade de diversas moléculas biológicas.

Um dos principais benefícios do tampão fosfato é sua capacidade de manter o pH constante, o que é essencial para muitas reações bioquímicas. Além disso, o PBS também é isotônico, o que significa que ele não causa alterações significativas na osmolaridade das células, evitando danos e preservando sua integridade.

Para preparar o tampão de fosfato, basta misturar os componentes na proporção correta e ajustar o pH conforme necessário. Uma vez preparado, o PBS pode ser utilizado em uma variedade de aplicações na biologia molecular, como diluição de amostras, lavagem de células e tecidos, e reconstituição de proteínas.

Além disso, o tampão fosfato também pode ser usado em técnicas de imunofluorescência, western blotting, e ensaios de citometria de fluxo, onde a manutenção da integridade das amostras e a estabilidade das moléculas são essenciais para resultados precisos e confiáveis.

Em resumo, o tampão fosfato é uma ferramenta fundamental na área de biologia molecular, proporcionando estabilidade, controle de pH e osmolaridade, e facilitando uma variedade de técnicas e experimentos. Sua versatilidade e eficácia tornam o PBS um componente indispensável em qualquer laboratório de biologia molecular.

Qual é a utilidade do PBS?

O Tampão de Fosfato Salino (PBS) é uma solução utilizada em laboratórios para diversas aplicações, devido às suas propriedades que ajudam a manter a estabilidade de diversas substâncias. A sua principal utilidade é atuar como um tampão que mantém o pH constante, evitando variações que poderiam afetar as reações químicas em experimentos biológicos.

Para preparar o PBS, basta dissolver os componentes em água destilada e ajustar o pH de acordo com a necessidade do experimento. A solução final deve ter uma concentração de íons de fosfato e cloreto de sódio específica, para garantir sua eficácia.

Os usos mais comuns do PBS incluem a lavagem de células e tecidos em cultura, a diluição de amostras biológicas e a preparação de soluções para técnicas de imunohistoquímica. Além disso, o PBS pode ser utilizado em ensaios de western blot, PCR e outras análises laboratoriais.

Em resumo, o PBS é um componente essencial em laboratórios de biologia e bioquímica, garantindo a estabilidade das amostras e a precisão dos resultados dos experimentos realizados.

Tutorial completo para preparar o tampão PBS de forma rápida e eficiente em casa.

O Tampão de Fosfato Salino (PBS) é uma solução utilizada em laboratórios para diversos fins, como lavagem de células, diluição de amostras e preparação de anticorpos. É uma solução tampão isotônica que ajuda a manter a integridade das células durante os experimentos.

Para preparar o tampão PBS em casa de forma rápida e eficiente, siga os passos abaixo:

Materiais necessários:

  • Água destilada
  • Cloreto de sódio (NaCl)
  • Fosfato de sódio dibásico anidro (Na2HPO4)
  • Fosfato de sódio monobásico monoidratado (NaH2PO4.H2O)
  • Balança analítica
  • pHmetro
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Procedimento:

  1. Pese 8g de NaCl, 0.2g de Na2HPO4 e 0.2g de NaH2PO4.H2O
  2. Adicione os sólidos em 800ml de água destilada em um recipiente limpo
  3. Misture bem até que os sólidos estejam completamente dissolvidos
  4. Ajuste o pH da solução para 7.4 com o pHmetro
  5. Complete o volume para 1 litro com água destilada
  6. Filtre a solução com um filtro estéril de 0.22um para esterilização

O tampão PBS está pronto para ser utilizado em seus experimentos. Armazene a solução em temperatura ambiente para uso futuro.

Usos do tampão PBS:

O PBS é utilizado em diversas aplicações laboratoriais, tais como:

  • Lavagem de células: O PBS é utilizado para lavar células e remover resíduos e meios de cultura antes de realizar experimentos
  • Resuspensão de células: É utilizado para ressuspender células antes de contar ou semear em placas de cultura
  • Diluição de amostras: O PBS é utilizado para diluir amostras biológicas para análises

Com este tutorial, você será capaz de preparar o tampão PBS de forma rápida e eficiente em casa, garantindo a qualidade e integridade de suas amostras e experimentos.

Preparo de solução tampão fosfato com pH 7,2: passo a passo.

Os tampões de fosfato (PBS) são soluções utilizadas em laboratórios para manter o pH estável durante experimentos bioquímicos e biológicos. O pH 7,2 é particularmente importante, pois é próximo do pH fisiológico, o que garante a estabilidade de muitas proteínas e enzimas.

Para preparar uma solução tampão fosfato com pH 7,2, siga os seguintes passos:

  1. Prepare uma solução mãe de fosfato: dissolva 6,8g de Na2HPO4 e 0,2g de KH2PO4 em 1 litro de água destilada;
  2. Ajuste o pH: utilizando ácido clorídrico (HCl) ou hidróxido de sódio (NaOH), ajuste o pH da solução mãe para 7,2;
  3. Dilua a solução mãe: dilua a solução mãe conforme necessário para obter a concentração desejada.

Após seguir esses passos, a solução tampão fosfato com pH 7,2 estará pronta para uso em suas experiências. Lembre-se de armazená-la adequadamente e de verificar o pH antes de cada utilização.

Usos do Tampão de Fosfato (PBS)

O Tampão de Fosfato (PBS) é amplamente utilizado em diversas aplicações laboratoriais, incluindo imunohistoquímica, western blotting, citometria de fluxo, entre outros. Sua capacidade de manter o pH estável o torna indispensável em experimentos que envolvem proteínas e enzimas sensíveis à variações de pH.

Além disso, o PBS é frequentemente utilizado em técnicas de biologia molecular, microbiologia e bioquímica, sendo uma solução versátil e confiável para diversos procedimentos laboratoriais.

Tampão de Fosfato (PBS): justificativa, preparação e usos

O tampão fosfato, BPS ou solução salina tamponada com fosfato é uma solução tampão e isotônica, cuja função é manter o pH e a pressão osmótica o mais próximo possível do ambiente biológico (fisiológico) natural. A sigla PBS significa solução salina tamponada com fosfato.

PH e osmolaridade são dois aspectos muito importantes que devem ser controlados em certos protocolos de laboratório. No caso do pH, é essencial que ele seja controlado, principalmente em reações bioquímicas, pois elas podem variar ou não funcionar se os reagentes estiverem com um pH inadequado.

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PBS tampão fosfato salino em dois pH diferentes. Fonte: Pixinio.com

Enquanto, o controle da osmolaridade é essencial, especialmente quando se trabalha com células vivas, uma vez que as membranas plasmáticas das células reagem de acordo com a concentração de solutos em que são encontradas.

Se as células forem transferidas para um meio hipertônico, elas serão desidratadas, uma vez que o gradiente de água será transportado para o lado onde há uma maior concentração de solutos. Se, pelo contrário, as células forem colocadas em um meio hipotônico, as células absorverão o líquido até que sejam lisadas.

É por isso que o tampão PBS é usado em protocolos de laboratório que exigem a manutenção de células in vitro , para que as células não sejam danificadas.

O PBS é composto por uma combinação de sais, como cloreto de sódio, fosfato de sódio, cloreto de potássio e fosfato de potássio. A composição do PBS pode variar dependendo do protocolo.

Fundação

Basicamente, a função da solução salina tamponada com fosfato é manter um pH fisiológico constante juntamente com uma concentração de eletrólitos semelhante à encontrada no interior do corpo.

Nesse ambiente, as células são capazes de permanecer estáveis, pois as condições fisiológicas são simuladas o máximo possível.

Outros compostos, se necessário, podem ser adicionados à formulação original de PBS, por exemplo, a adição de EDTA ao tampão é útil para lavar glóbulos vermelhos no teste de incompatibilidade cruzada.

O EDTA impede que a fração do complemento C1 presente no soro seja clivada e lisando os glóbulos vermelhos, ou seja, evita resultados falsos de incompatibilidade. Além disso, o EDTA ajuda a dissociar as células.

Preparação

A quantidade de sais que devem ser pesados ​​para a preparação do tampão fosfato salino PBS dependerá da quantidade que precisa ser preparada:

– Solução salina tamponada com fosfato tamponado (PBS 10X)

Para um litro de solução:

Pesar:

80,6 g de NaCl,

2,2 g de KCl,

11,5 g de Na 2 HPO 4 ,

2,0 g de KH 2 HPO 4

Técnica de Preparação

Em um copo, coloque os sais pesados, adicione água suficiente (80%) e misture na barra de agitação com a barra magnética até que os sais se dissolvam.

Tampão de Fosfato (PBS): justificativa, preparação e usos 2

Preparação do PBS usando barra de agitação com barra magnética. Fonte: Usuário: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filtre para remover partículas não dissolvidas. Use filtros com poros de 0,45 µm. Esterilize em uma autoclave e distribua assepticamente em uma coifa de fluxo laminar em frascos de vidro com tampa.

O pH não é ajustado para a solução 10X (concentrada). O ajuste é feito uma vez diluído para a concentração de tampão 1X PBS (diluição 1:10).

– Solução salina fosfato-tampão (PBS 1X)

O PBS 1X pode ser preparado diretamente, pesando as quantidades correspondentes de cada sal ou pode ser preparado diluindo a solução estoque (1:10) com água destilada estéril.

-Para preparar diretamente um litro de tampão fosfato salino PBS 1X, eses:

8,06 g de NaCl,

0,22 g de KCl,

1.15 g de Na 2 HPO 4 ,

0,20 g de KH 2 HPO 4

Técnica de Preparação

Prossiga conforme explicado na solução concentrada. Posteriormente, o pH deve ser ajustado. Para fazer isso, meça o pH e, dependendo do resultado, use ácido (HCl) ou base (NaOH) para diminuir ou aumentar o pH, respectivamente, conforme necessário, até que seja 7,4.

O ácido ou base é adicionado gota a gota enquanto o valor de pH da solução é monitorado usando um medidor de pH. Filtrar, esterilizar em autoclave e distribuir assepticamente em tubos ou frascos cônicos, conforme necessário.

-Para preparar o 1X PBS a partir da solução de estoque 10X:

Realize uma diluição de 1:10. Por exemplo, para preparar 1 litro de PBS 1X, meça 100 ml da solução-mãe e adicione 700 ml de água destilada estéril. Ajuste o pH e complete a quantidade de água para atingir 1000 ml.

O tampão PBS preparado é incolor e transparente.

O PBS para uso diário pode ser armazenado em temperatura ambiente e o restante em uma geladeira.

.Soluções para ajuste de pH

HCl

Para 100 ml de HCL (ácido clorídrico) a 1 molar.

Meça 91 ml de água destilada e coloque-a em um copo de 250 ml.

Meça 8,62 mL de HCl concentrado e adicione-o lentamente ao copo que contém a água (nunca faça o contrário). Tome as medidas relevantes de biossegurança ao manusear ácidos fortes (substância altamente corrosiva).

Misture por 5 minutos, de preferência usando uma placa de agitação com uma barra magnética dentro do copo. Transferir para a bola de 100 ml e até 100 ml com H 2 O destilada.

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NaOH

Para 100 ml de NaOH (hidróxido de sódio) 10 molares.

Meça 40 mL de água destilada e coloque-a em um copo de 250 ml. Meça 40 g de NaOH e adicione à água. Misture usando uma placa de agitação com uma barra magnética dentro do copo.

Mover para um balão volumétrico de 100 ml e completar o volume com água destilada. Cumprir os padrões de biossegurança, porque essa reação é exotérmica (libera energia na forma de calor).

Se você deseja preparar outras quantidades de solução salina de fosfato, consulte a tabela a seguir:

Tampão de Fosfato (PBS): justificativa, preparação e usos 3

Fonte: «Laboratório de Genômica Viral e Humana, Faculdade de Medicina da UASLP»

Usos

É usado principalmente em laboratórios de biologia celular, imunologia, imuno-histoquímica, bacteriologia, virologia e pesquisa.

É ideal para lavagens celulares por centrifugadoras (glóbulos vermelhos), lavagens em monocamada celular, em técnicas de elipsometria espectroscópica, na quantificação de biofilmes bacterianos, na manutenção de culturas celulares para vírus, como solução de lavagem na técnica de imunofluorescência indireta e em técnicas para a caracterização de anticorpos monoclonais.

Também serve para transportar células ou tecidos, como um diluente para a contagem de células, a preparação de enzimas celulares (tripsina), como um diluente do método de secagem de biomoléculas e para a preparação de outros reagentes.

Por outro lado, Martin e colaboradores em 2006 demonstraram que o PBS é útil em laboratórios de ciências forenses, especificamente na recuperação de esperma de esfregaços vaginais ou na recuperação de células vaginais de esfregaços penianos. Dessa forma, você pode estabelecer se houve um relacionamento sexual.

Limitações

-Alguns tampões de PBS trazem como conservante uma substância chamada azida de sódio. Este composto pode gerar substâncias explosivas se entrar em contato com chumbo ou cobre. Por esse motivo, deve-se tomar cuidado especial ao descartar este reagente pelo ralo. Se descartado por esta rota, muita água deve ser adicionada para diluir ao máximo.

-O tampão de zinco não deve ser adicionado zinco, pois causa a precipitação de alguns sais.

-Wangen e colaboradores em 2018 determinaram que o uso de PBS não era adequado para a lavagem de células primárias de leucemia mielóide aguda (LMA) extraídas do sangue periférico, porque muitas células são perdidas por lise, com uma grande diminuição no material proteína

Portanto, eles determinaram que as células primárias de LMA não deveriam ser lavadas com PBS após armazenamento em nitrogênio líquido.

Referências

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  2. Rodríguez M, Ortiz T. Cultura de células. Mudança de Meio Departamento de Citologia e Histologia Normal e Patológica da Universidade de Sevilha. Disponível em personal.us.es
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  5. Pietrasanta L, Von-Bilderling C. Tópicos em biofísica molecular. Disponível em: users.df.uba.ar
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  8. Wangen R., Aasebø E, Trentani A, et al . O método de preservação e a lavagem com solução salina tamponada com fosfato afetam o proteoma agudo da leucemia mielóide.Int J Mol . Sci . 2018; 19 (1): 296. Disponível em: ncbi.nlm.nih.gov
  9. Martínez R, Gragera R. (2008). Fundamentos teóricos e práticos da histoquímica. Conselho Superior de Pesquisa Científica. Madrid Disponível em: books.google.co.ve

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