Teste da coagulase: justificativa, procedimento e usos

O teste da coagulase é uma técnica laboratorial utilizada para identificar bactérias do gênero Staphylococcus que possuem a enzima coagulase, a qual é responsável pela formação de coágulos no sangue. Esta técnica é importante para diferenciar Staphylococcus aureus, que é coagulase positiva, de outras espécies de Staphylococcus que são coagulase negativa.

O procedimento do teste consiste em adicionar plasma humano ao meio de cultura contendo a bactéria em questão e observar se ocorre a formação de coágulos. Se houver coagulação, significa que a bactéria é coagulase positiva, enquanto a ausência de coágulos indica que é coagulase negativa.

Os usos do teste da coagulase incluem a identificação de infecções causadas por Staphylococcus aureus, a seleção de tratamentos adequados e a monitorização da resistência bacteriana aos antibióticos. Além disso, a técnica também é útil em estudos epidemiológicos e de vigilância de infecções hospitalares.

Finalidade e importância do teste de coagulase na identificação de bactérias patogênicas.

A coagulase é uma enzima produzida por algumas bactérias patogênicas, como o Staphylococcus aureus. O teste de coagulase é utilizado para identificar a presença desta enzima em uma cultura bacteriana, o que é crucial na diferenciação de Staphylococcus aureus de outras espécies de estafilococos não-patogênicos.

A finalidade do teste de coagulase é determinar se uma determinada cepa de estafilococo é capaz de produzir a enzima coagulase, que é responsável pela formação de coágulos sanguíneos. A presença desta enzima é um importante marcador de virulência, pois as bactérias que a produzem são capazes de causar infecções mais graves.

A importância do teste de coagulase na identificação de bactérias patogênicas está relacionada à sua capacidade de distinguir o Staphylococcus aureus de outras espécies de estafilococos. Uma vez que o Staphylococcus aureus é uma das principais causas de infecções hospitalares e comunitárias, a sua identificação rápida e precisa é essencial para o tratamento adequado dos pacientes.

Em resumo, o teste de coagulase desempenha um papel fundamental na identificação de bactérias patogênicas, permitindo a diferenciação do Staphylococcus aureus de outras espécies de estafilococos e contribuindo para o tratamento eficaz das infecções causadas por estas bactérias.

Entenda o mecanismo de ação da coagulase no processo de coagulação sanguínea.

A coagulase é uma enzima produzida por certas bactérias, como o Staphylococcus aureus, que desempenha um papel crucial no processo de coagulação sanguínea. Esta enzima atua convertendo o fibrinogênio, uma proteína presente no plasma sanguíneo, em fibrina, que é responsável pela formação de coágulos.

Quando uma infecção bacteriana ocorre, a presença de coagulase pode levar à formação de coágulos sanguíneos, ajudando as bactérias a se protegerem do sistema imunológico do hospedeiro. Este mecanismo de ação da coagulase é uma estratégia evolutiva inteligente adotada por certas bactérias patogênicas para garantir sua sobrevivência no corpo humano.

Em resumo, a coagulase atua convertendo o fibrinogênio em fibrina, promovendo a coagulação sanguínea e facilitando a formação de coágulos que podem ajudar as bactérias a se protegerem do sistema imunológico. Este é um processo fundamental para a sobrevivência de certas bactérias patogênicas no organismo humano.

Teste da coagulase: justificativa, procedimento e usos.

Passo a passo para produzir coagulase de forma eficiente e segura.

Para produzir coagulase de forma eficiente e segura, é importante seguir alguns passos específicos. A coagulase é uma enzima que pode ser produzida por algumas bactérias, como o Staphylococcus aureus, e é utilizada em testes laboratoriais para identificar a presença dessa bactéria. Aqui estão os passos para produzir coagulase de forma eficiente e segura:

Relacionado:  Ganoderma lucidum: características, habitat e benefícios

1. Cultura da bactéria: O primeiro passo é crescer a bactéria produtora de coagulase em um meio de cultura apropriado. Certifique-se de que a cultura esteja bem estabelecida antes de prosseguir para a próxima etapa.

2. Extração da enzima: Após o crescimento da bactéria, é necessário extrair a enzima coagulase. Isso pode ser feito por meio de técnicas de lise celular e purificação da enzima.

3. Teste de atividade: Antes de utilizar a coagulase em testes laboratoriais, é importante verificar a sua atividade. Realize testes para garantir que a enzima está ativa e pronta para uso.

4. Armazenamento adequado: Para garantir a estabilidade da coagulase, armazene a enzima adequadamente, seguindo as condições recomendadas de temperatura e pH.

5. Utilização segura: Ao utilizar a coagulase em testes laboratoriais, siga as boas práticas de laboratório para garantir a segurança do experimento e dos indivíduos envolvidos.

Seguindo esses passos, é possível produzir coagulase de forma eficiente e segura, garantindo resultados precisos nos testes laboratoriais.

Teste da coagulase: justificativa, procedimento e usos

O teste da coagulase é uma técnica de laboratório usada para destacar a presença da enzima coagulase. Esta enzima tem a propriedade de coagular o plasma. Loeb em 1903 foi o primeiro a descrever essa enzima.

Este teste é realizado em cocos Gram-positivos e catalase-positivos, permitindo distinguir cepas de Staphylococcus aureus do restante dos estafilococos, uma vez que é o único microorganismo de importância clínica que o produz.

Teste da coagulase: justificativa, procedimento e usos 1

Ambas as imagens revelam um teste coagulase positivo. Fonte: Imagem esquerda: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/)]. Imagem à direita: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Nesse sentido, os membros da família Staphylococaceae que fazem esse teste negativo são frequentemente referidos como Staphylococcus coagulase negativo.

Existem outras cepas além de S. aureus que podem produzir coagulase, como Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius e S. delphini.

No entanto, os três primeiros são de importância clínica em nível veterinário e muito raramente podem ser encontrados como um agente causador de infecções humanas, enquanto S. delphini é encontrado apenas em ambientes marinhos.

Além disso, eles são facilmente diferenciados porque S. hyicus e S. intermedius não fermentam manitol e S. schleiferi spp coagulans não fermentam maltose ou trealose, enquanto S. aureus fermenta esses carboidratos.

A presença da enzima coagulase tem sido associada à virulência das cepas. No entanto, essa teoria vem caindo, uma vez que outras espécies virulentas de coagulase negativa capazes de produzir infecções importantes são observadas.

Fundação

O Staphylococcus aureus produz dois tipos de coagulase, uma que permanece ligada à parede celular, também chamada fator de aglutinação ou fator reativo da coagulase (CRF) e um extracelular que é liberado em culturas líquidas. É por isso que eles são chamados coagulase unida e coagulase livre, respectivamente.

A enzima coagulase deve seu nome à ação que produz. Tem a capacidade de transformar fibrinogênio em fibrina, criando um coágulo óbvio quando está no plasma, ou seja, essa enzima simula a atividade da trombina da cascata de coagulação.

De fato, uma das teorias mais aceitas é que a coagulase ligada reage com a coagulase livre para ativar os fatores de coagulação. Essa ativação gera uma substância que age de maneira semelhante à da protrombina, criando um composto com a função de trombina.

A diferença com a cascata de coagulação normal é que essa reação não precisa da presença de cálcio e não é afetada pela heparina.

Relacionado:  Iguana chilena: características, habitat, comida

Para realizar o teste da coagulase, basta enfrentar uma nova cultura de Staphylococcus com um plasma de coelho de preferência e, assim, observar a formação ou não do coágulo.

Existem técnicas específicas para detectar coagulase ligada e coagulase ligada e livre ao mesmo tempo.

Algumas cepas de S. aureus dão um resultado positivo mais rápido que outras. A taxa de formação de coágulos é diretamente proporcional à concentração de coagulase presente.

A técnica de teste da coagulase deslizante detecta a coagulase ligada e a técnica do tubo detecta a coagulase ligada e livre.

Procedimento

Teste de lâmina -Coagulase

Materiais

– Slide de slide limpo

– De preferência, plasma de coelho, plasma humano ou de cavalo também pode ser usado. O plasma pode ser adquirido comercialmente liofilizado e reconstituído quando é para ser usado ou pode ser usado fresco (tomado recentemente). Outra alternativa viável é o uso de fibrinogênio.

Solução salina estéril (0,85%) (SSF).

Obtenção de plasma fresco

Extrair sangue venoso humano ou animal. Qualquer um dos seguintes anticoagulantes pode ser usado: EDTA, oxalato de cálcio, heparina ou citrato de sódio. Misture bem e centrifugue. Remover assepticamente o sobrenadante (plasma), sem glóbulos vermelhos e depositar em um tubo estéril.

Teste da coagulase: justificativa, procedimento e usos 2

Separação por plasma. Fonte: foto tirada pelo autor: MSc. Marielsa Gil.

Plasma liofilizado

Reconstitua conforme especificado no frasco do kit comercial.

Fibrinogênio fresco

A partir de um plasma citratado, misture o plasma em partes iguais com uma solução saturada de cloreto de sódio. Deixe precipitar e centrifugar.

Descarte o sobrenadante, reconstitua o precipitado até 5 vezes seu volume com água destilada estéril. Adicione 5 unidades de heparina por ml de fibrinogênio. Armazene em um tubo estéril.

Técnica

Uma gota de solução salina e uma gota de plasma são colocadas em uma lâmina separadamente. Tome 1 ou 2 colônias puras do microrganismo para serem testadas com a alça de platina.

Misture a carga bacteriana na gota de plasma e repita a operação na gota de SSF. Observe os resultados imediatamente. Um resultado positivo será aquele em que a formação de um aglutinado macroscópico (precipitado branco) for observada após um minuto no lado da gota com plasma.

A queda do SSF serve como um controle negativo. Se a aglutinação é observada com o SSF, isso significa que o microorganismo se auto-aglutina, podendo fornecer resultados falso-positivos. Neste caso, deve ser corroborado com o teste do tubo.

Também é recomendável montar um controle positivo com uma cepa conhecida de S. aureus.

Interpretação

Aglutinação dentro de 5 a 20 segundos (teste positivo forte).

A aglutinação variável ocorreu entre 20 segundos e um minuto (teste positivo atrasado).

Algum grau de aglutinação após um minuto (teste duvidoso). Recomenda-se repetir o teste ou confirmar pelo método de tubo.

Não há aglutinação (teste negativo).

Resultado com SSF. Você deve sempre dar negativo, se você automaticamente testar positivo o resultado do teste é invalidado.

– Teste de coagulase em tubo

Materiais

-Tubo de ensaio estéril

-Plasma

-Banho de Maria a 37 ° C.

Técnica

Meça com uma pipeta estéril 0,5 ml de plasma e coloque-o em um tubo de ensaio 12 x 75. Carregue a alça de platina com 2 a 4 colônias puras para estudar a partir de uma cultura sólida por 18 a 24 horas e dissolva-a no plasma cuidadosamente, misture e incube a 37 ° C por 4 horas.

Relacionado:  O que é polinização direta?

Examine o tubo na primeira hora sem agitar, apenas incline suavemente. Se um coágulo ainda não for observado, ele poderá continuar a ser observado a cada 30 minutos até que 4 horas sejam concluídas. Se após 4 horas ainda for negativo, pode ser deixado por até 24 horas, mas à temperatura ambiente. Observe e relate o resultado.

Com base na experiência, alguns microbiologistas recomendam o uso de 500 µl de uma suspensão bacteriana de uma cultura de 18 horas em meio líquido para realizar o teste.

Parece oferecer resultados mais rápidos e confiáveis ​​do que quando as colônias de meios sólidos são emulsificadas, especialmente se o plasma humano obtido do banco de sangue tiver sido usado.

O uso de cepas de um caldo ajuda a diluir a possível presença de anticorpos anti-estafilococos humanos no plasma que podem inibir a ação da coagulase.

Interpretação

Se for observado um coágulo que cubra todo o líquido (coagulação completa) ou coágulo que nada no líquido restante (coagulação parcial) deve ser considerado como um teste positivo.

Se um coágulo não for formado, ou seja, a suspensão é homogênea, o teste é negativo.

-Coagulase usando fibrinogênio

O fibrinogênio é usado da mesma forma que o plasma e é usado para o teste de lâmina e o teste de tubo. Proceda como descrito para o plasma e interprete da mesma maneira.

Use

É utilizado para diferenciar Staphylococcus aureus de estafilococos coagulase-negativos.

Controle de qualidade

Ter culturas frescas de uma cepa de S. aureus para serem usadas como controle positivo. Uma cepa de S. epidermidis também pode estar disponível como controle negativo.

Limitações

-Um teste positivo não deve ser deixado em incubação por 24 horas, pois o S. aureus produz uma fibrinolisina que dissolve o coágulo.

-Para um teste confiável, deve-se usar plasma fresco ou recém-reconstituído, bem como culturas bacterianas frescas (18 a 24 h). Isso evita falsos negativos.

-O teste deve ser realizado junto com um controle negativo e um positivo.

-Alguns meios sólidos podem interferir no teste da coagulase. Não é recomendado o uso de colônias de ágar-manitol salgado.

-Se for utilizado plasma citrado, recomenda-se colocar 5 unidades de heparina por ml de plasma para evitar falsos positivos. Isso ocorre porque alguns microrganismos que não o S. aureus podem quebrar o citrato e causar a coagulação do plasma. Neste caso, é aconselhável fazer Gram e um teste de catalase.

-É importante, no teste do tubo, monitorar a reação a cada 30 minutos, pois há cepas de S. aureus que produzem altas concentrações de fibrinolisina e diluem rapidamente o coágulo recém-formado. Evite falsos negativos.

-Ao monitorar o teste, você deve evitar agitar o tubo abruptamente, isso pode destruir o início da formação de coágulos que não serão restaurados, causando falsos negativos.

Referências

  1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  3. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3rd ed. Editora Panamericana. Bons ares. Argentina
  4. Laboratórios Pró-Laboratório Plasma coagulase de coelho. Disponível em: pro-lab.com
  5. «Coagulase.» Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 12 de fev de 2019 às 04:23 UTC. 22 de abril de 2019 às 15h50 wikipedia.org.

Deixe um comentário