Vermelho do Congo: características, preparação e aplicações

O vermelho do Congo é um corante azóico de proteínas formadas por acoplamento de um sal diazónio e um anel aromático activo. Esta substância é capaz de absorver radiação eletromagnética no espectro visível, razão pela qual possui uma cor intensa.

É cobrado negativamente. Portanto, possui uma afinidade por componentes celulares carregados positivamente, como certas substâncias proteicas. Sua cor varia de acordo com o pH. Nesse sentido, se o meio é ácido (<pH3), a cor é azul profundo. Entre pH3 – pH 5,2, é fúcsia (zona de curva) e, com> pH 5,2, a cor é vermelho escuro.

Vermelho do Congo: características, preparação e aplicações 1

Solução desidratada e coloidal do vermelho do Congo. Fonte: Pixinio.com e Wikipedia.com

É uma substância muito versátil, pois possui várias utilidades. Foi utilizado como corante na indústria têxtil e também para células e tecidos.

Realizar também meios de cultura que medem a ação enzimática, como indicador de pH, como substância controle na avaliação do bom funcionamento dos espectofotômetros, no estudo da formação de biofilme ou no diagnóstico de amilóide.

Da mesma forma, permitiu distinguir sorotipos e fungos bacterianos pela identificação de estruturas específicas em sua parede (lipopolissacarídeos).

Recursos vermelhos do Congo

Esta substância foi descoberta por Böttiger em 1884. É um derivado de diazônio formado pelo ácido bis-diazóico da benzidina com ácido naftiônico. A molécula vermelha do Congo mede 21 Armstrong e o peso molecular é de aproximadamente 8000 g / mol.

O vermelho do Congo é caracterizado por ser solúvel em água e, mais ainda, em solventes orgânicos como o etanol, formando uma solução coloidal.

Tem uma afinidade pela celulose, pelo tecido amilóide e pelos componentes celulares com carga positiva.

Preparação

O vermelho do Congo é preparado em diferentes concentrações, dependendo da técnica a ser usada. A maioria usa vermelho do Congo a 1%, 2%, 0,1%, entre outros.

Por exemplo, para preparar 2% de vermelho do Congo, devem ser pesados ​​2 g de corante desidratado e adicionados 100 ml de água destilada. Em seguida, é armazenado em um frasco de âmbar.

Aplicações

Como corante na indústria têxtil

Por um tempo, foi amplamente utilizado na indústria têxtil devido à sua fixação no algodão, mas atualmente está em desuso por ser cancerígeno e também porque a cor não é estável, desbotando pela fricção.

Determinação da capacidade de formação de biofilme

Foi demonstrado que a capacidade de formação de biofilme de microorganismos é um fator de virulência.

Nesse sentido, o corante vermelho do Congo é usado como um método para a determinação da formação de biofilme. O vermelho do Congo se liga aos exopolissacarídeos presentes no biofilme. No entanto, comparado a outros métodos, é o menos recomendado para os altos falsos negativos que ocorrem.

O método utiliza ágar vermelho do Congo, composto por ágar sanguíneo como base, glicose (10 g / l) e corante vermelho do Congo (0,4 g / l). As cepas a serem avaliadas são semeadas no meio e incubadas por 24 horas a 37 ° C e subsequentemente incubadas por 48 horas em temperatura ambiente.

Um teste positivo é evidenciado se forem observadas colônias cristalinas de aspecto preto e seco.

Controle de qualidade por espectrofotômetro

Para avaliar se um dispositivo de medição de absorbância ou papelada está em conformidade com os parâmetros fotométricos estabelecidos por regulamentos internacionais, uma técnica simples pode ser usada para determinar se o equipamento emite resultados dentro dos limites de aceitabilidade.

Uma das técnicas de avaliação é usar o vermelho do Congo, com base no ponto isosbestic.

O comprimento de onda em que o vermelho do Congo emite a mesma absorbância independentemente do pH, concentração e temperatura é chamado ponto isosbestic. O valor da absorbância é fixo e pode ser usado como referência.

Sabe-se que o ponto isosbéstico teórico do vermelho do Congo é 541 nm. Se o valor obtido for diferente, sabe-se que o equipamento apresenta problemas de desvio do comprimento de onda e precisa ser verificado por um técnico especializado.

Preparação dos meios de cultura

Ortiz e outros Descrever um meio de cultura preparado com corante vermelho do Congo e carboximetilcelulose chamado ágar CMC, a fim de detectar cepas microbianas da celulite; isto é, produtores de celulases (endogluconases, exoglucanase e β-glucosidase).

Este meio tem uma coloração intensa. A cor será dissipada pela ação da enzima endoglucanase que quebra a estrutura da carboximetilcelulose. Isso sugere uma reação positiva.

A diminuição da viscosidade e absorvância permite quantificar a atividade enzimática. Por exemplo, em cepas de Streptomyces sp.

Identificação de microrganismos

O vermelho do Congo tem uma afinidade pelas estruturas polissacarídicas de certas cepas, conseguindo a identificação desses microorganismos. Entre eles estão Escherichia coli e Shigella flexneri.

As placas de ágar vermelho do Congo também são usadas para obter colônias características, como Azospirillum sp, que fornece colônias vermelhas escarlate , entre outras.

Corante de células e tecidos

Uma das aplicações mais comuns do vermelho do Congo é sua utilidade no diagnóstico de amiloidose. Esta doença estranha consiste no acúmulo extracelular de uma proteína anormal em vários órgãos. Essa proteína anormal é produzida na medula óssea e é chamada de amilóide.

O vermelho do Congo tem uma alta afinidade por essa substância. Esta propriedade tem sido usada para mostrar sua presença em cortes histológicos de tecido. O vermelho do Congo é usado junto com hematoxilina / eosina para esse fim.

A união do tecido amilóide e do vermelho do Congo ocorre através das ligações de hidrogênio não polares, entre os grupos carboxila e o grupo amino. A proteína amilóide fornece os grupos carboxila (COOH) e o vermelho do Congo o grupo amino.

O tecido amilóide é colorido em várias tonalidades, variando de rosa a vermelho escuro, visto ao microscópio óptico. Em microscópios com luz polarizada dupla, essas preparações são observadas com uma birrefringência patognomônica verde-maçã.

Ou seja, eles têm dicroísmo, uma vez que as fibras amilóides são anisotrópicas. Esta observação confirma o diagnóstico.

A coloração dos tecidos com o vermelho do Congo é compatível com outras metodologias de diagnóstico, como os métodos imunocitoquímicos, podendo até recolorir.

Como indicador de pH

A propriedade de se voltar contra as mudanças de pH é usada pela técnica chamada cromoendoscopia.

Essa técnica utiliza corantes e indicadores de pH que permitem detectar determinadas patologias. Entre eles está o uso do vermelho do Congo, que pode revelar focos de câncer no início da mucosa gástrica, sendo usado como marcador de acidez.

A técnica baseia-se no fato de o vermelho do Congo a pH ácido ser preto. Portanto, depois de colocar uma solução de vermelho do Congo na mucosa gástrica, serão escolhidas as áreas onde há palidez para colher a amostra para biópsia, ou seja, onde não há produção de ácido. Isso sugere a presença de um foco canceroso ou a perda de células parietais.

Referências

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