O Ágar Baird Parker é um meio seletivo utilizado para o isolamento e identificação de Staphylococcus aureus em alimentos e produtos lácteos. Foi desenvolvido por Baird e Parker em 1962 e é preparado a partir de uma base de ágar com lactose, gema de ovo, sais e corante cristal violeta. Sua seletividade é devida à presença de sais de lítio, telurito de potássio e cristal violeta, que inibem o crescimento de bactérias gram-positivas não estafilocócicas. O Ágar Baird Parker é um meio amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia de alimentos para detecção e contagem de Staphylococcus aureus, uma bactéria patogênica responsável por intoxicações alimentares.
Preparo do Agar Baird Parker: Passo a passo para uma cultura bacteriana eficaz.
O Ágar Baird Parker é um meio de cultura seletivo utilizado para o isolamento e identificação de bactérias do gênero Staphylococcus, especialmente o Staphylococcus aureus. Este meio é composto por nutrientes que favorecem o crescimento dessas bactérias, ao mesmo tempo que inibem o crescimento de outras bactérias que não são do gênero Staphylococcus.
Para preparar o Ágar Baird Parker, siga os seguintes passos:
1. Preparação dos ingredientes: Pese os ingredientes necessários, como o pó do meio de cultura, a gema de ovo, o lecitina e o tellurito de potássio.
2. Dissolução do meio de cultura: Adicione o pó do meio de cultura em água destilada e aqueça até que o meio se dissolva completamente.
3. Adição dos outros ingredientes: Após a dissolução do meio de cultura, adicione a gema de ovo, a lecitina e o tellurito de potássio, mexendo bem para garantir que estejam bem misturados.
4. Esterilização: Esterilize o meio de cultura em autoclave a 121°C por 15 minutos. Certifique-se de que o meio esteja bem esterilizado para evitar contaminações.
5. Distribuição do meio de cultura: Após a esterilização, distribua o meio de cultura em placas de Petri de forma a obter uma camada uniforme e deixe solidificar.
O Ágar Baird Parker está pronto para ser utilizado na cultura de bactérias do gênero Staphylococcus. Este meio permitirá o crescimento seletivo dessas bactérias, facilitando sua identificação em laboratório.
Em resumo, o preparo do Ágar Baird Parker é um processo simples e eficaz para a obtenção de uma cultura bacteriana seletiva e de qualidade.
Como produzir a enzima coagulase de forma eficiente em laboratório.
Para produzir a enzima coagulase de forma eficiente em laboratório, é necessário seguir um processo de cultivo e extração cuidadoso. A coagulase é uma enzima produzida por algumas cepas de Staphylococcus aureus, e é amplamente utilizada em testes laboratoriais para identificação da bactéria.
Primeiramente, é importante cultivar a cepa de Staphylococcus aureus em um meio de cultura apropriado, como o Ágar Baird Parker. Este meio contém nutrientes que favorecem o crescimento da bactéria e a produção da enzima coagulase. Após o crescimento da cultura, é possível extrair a enzima através de técnicas de purificação, como a centrifugação e a cromatografia.
Para garantir a eficiência na produção da enzima coagulase, é essencial manter condições ideais de cultivo, como temperatura e pH adequados. Além disso, é importante monitorar o processo de produção para garantir a qualidade e a pureza da enzima.
O uso do Ágar Baird Parker é fundamental para o cultivo da cepa de Staphylococcus aureus e a produção da enzima coagulase. Este meio de cultura foi desenvolvido na década de 1950 por Ruth Baird e Howard Parker, e desde então tem sido amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia.
Em resumo, a produção eficiente da enzima coagulase em laboratório requer um cuidadoso processo de cultivo e extração, utilizando o Ágar Baird Parker como meio de cultura. Com as condições adequadas e as técnicas corretas, é possível obter uma enzima de alta qualidade para uso em testes laboratoriais.
Ágar Baird Parker: fundação, preparação e uso
O ágar Baird Parker é um sólido de cultura selectivo e diferencial médio. Foi criado em 1962 para a detecção e contagem de estafilococos coagulase-positivos ( Staphylococcus aureus ).
É composto de hidrolisado de caseína pancreática, extrato de carne, extrato de levedura, cloreto de lítio, glicina, piruvato de sódio, telurito de potássio, agar e emulsão de gema de ovo.
O ágar Baird Parker baseia-se na capacidade de S. aureus reduzir o telurito e produzir lecitinase. Ambas as propriedades geram uma colônia com características específicas para esta espécie. Portanto, proporciona grande efetividade na detecção desse microrganismo.
As colônias típicas de S. aureus são pretas ou cinza escuro, com uma borda incolor e um halo claro que as cerca, diferindo do restante dos microrganismos. Este patógeno pode ser encontrado em amostras clínicas, águas, cosméticos e alimentos crus ou cozidos.
Seu diagnóstico ou detecção é de extrema importância, devido à variedade de patologias que produz, como intoxicação alimentar, síndrome da pele escaldada, síndrome do choque tóxico, abscessos, meningite, septicemias, endocardite, entre outras.
Fundação
Poder nutricional
O hidrolisado de caseína pancreática, o extrato de carne e o fermento são fontes de nutrientes, vitaminas e minerais necessários ao desenvolvimento microbiano geral, enquanto o piruvato e a glicina são compostos que favorecem o crescimento específico de Staphylococcus aureus .
Seletiva
O ágar Baird Parker é seletivo porque contém substâncias que inibem o crescimento da flora associada, promovendo o desenvolvimento de S. aureus. Os compostos inibidores são cloreto de lítio e telurito de potássio.
Diferencial
Este meio permite diferenciar S. aureus do restante dos estafilococos coagulase-negativos. O S. aureus tem a capacidade de reduzir o telurito ao telúrio metálico preto, formando colônias pretas ou cinza escuro.
Além disso, a gema de ovo fornece os substratos para demonstrar a presença da enzima lecitinase e lipase. S. aureus é lecitinase positiva e, portanto, um halo claro será observado ao redor da colônia, indicando que a lecitina foi hidrolisada.
Nesse sentido, a aparência neste ágar de colônias brilhantes de preto ou cinza escuro com auréola clara indica a presença de S. aureus.
Se uma zona de precipitação é formada, é indicativa da atividade da lipase. Algumas cepas de S. aureus são lipase positivas e outras negativas.
No caso de S. aureus ser lipase positiva, será observada uma área opaca ao redor da colônia preta ou cinza escura e, em seguida, o halo claro pela ação da lecitinase.
Colônias de bactérias diferentes de S. aureus capazes de crescer neste meio desenvolverão colônias incolores ou marrons, sem halo ao redor.
Também podem ser observadas colônias negras atípicas com ou sem uma borda incolor, mas sem uma auréola clara. Essas colônias não devem ser levadas em consideração, pois não correspondem a S. aureus .
Preparação
Emulsão de gema de ovo
Um ovo de galinha fresco é retirado, bem lavado e colocado 2 a 3 horas em álcool a 70%. Então, o ovo se abre assepticamente e a clara é cuidadosamente separada da gema. Posteriormente, são retirados 50 ml da gema e misturados com 50 ml de solução fisiológica estéril.
Telurito de potássio a 1% p / v
Algumas casas comerciais vendem telurito de potássio a 1% pronto para uso. É adicionado ao meio antes que o meio solidifique.
Para preparar esta solução em laboratório, 1,0 g de telurito de potássio são pesados e dissolvidos em uma parte da água. Posteriormente, a quantidade de água é completada até atingir 100 ml. A solução deve ser esterilizada pelo método de filtração.
Preparação do meio de cultura
Pesar 60 g do meio desidratado e dissolver em 940 ml de água destilada. Deixe a mistura repousar por aproximadamente 5 a 10 minutos.
Aplique calor agitando o meio frequentemente para melhorar o processo de dissolução. Deixe ferver por um minuto. Esterilizar na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
Deixe repousar até atingir uma temperatura de 45 ° C e adicione 50 ml de emulsão de gema de ovo e 10 ml de telurito a 1%. Misture bem e sirva entre 15 a 20 ml em placas de Petri estéreis.
Deixe solidificar, ordem invertida em plaquetas e guarde na geladeira até o uso.
O pH final do meio preparado deve ser 6,8 ± 0,2.
Antes de semear uma amostra, aguarde a placa atingir a temperatura ambiente.Semeie as placas riscando ou semeando a superfície com uma espátula de Drigalski.
A cor do meio desidratado é torrada clara e a cor do meio preparado é âmbar claro.
Use
Amostras clínicas
As amostras clínicas são semeadas diretamente descarregando parte do material em uma extremidade da placa e, a partir daí, são estriadas por exaustão. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.
Amostras de alimentos
Pesar 10 g da amostra de alimentos e homogeneizar em 90 ml de água peptonada a 0,1%; a partir daí, são preparadas diluições, se necessário. Inocular as placas em triplicado com 0,3 ml das soluções preparadas e semear por superfície com a espátula de Drigalski. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C.
Essa metodologia permite contar as colônias típicas obtidas e é ideal quando se suspeita de presença de S. aureus acima de 10 UFC por gr / ml de amostra.
Se houver suspeita de que a quantidade de S. aureus seja pequena ou haja muita flora associada, sugere-se enriquecer a amostra em caldo de soja tripticase com 10% de NaCl e 1% de piruvato de sódio. Isso favorecerá o crescimento de S. aureus e inibirá o desenvolvimento da flora associada. Os tubos turvos resultantes serão semeados em ágar Baird Parker.
Amostras de água
Em um sistema de filtração a vácuo e esterilizado, 100 ml de água são filtrados em estudo e, subsequentemente, a membrana microporosa de 0,4 mícron é removida com uma pinça estéril e colocada em uma placa Baird Parker. Incubar por 24 a 48 horas a 35-37 ° C. Esta técnica permite contar colônias típicas de S. aureus .
Controle de qualidade
Cepas conhecidas como Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 ou Proteus mirabilis ATCC 43071 podem ser usadas para avaliar a qualidade do ágar Baird Parker .
No caso de cepas de S. aureus ATCC , é conhecido por reduzir o telurito, e são lipase e lecitinase positivas. Portanto, deve haver um desenvolvimento satisfatório e crescer colônias convexas com centro preto e borda incolor, com um halo opaco e outro halo externo claro.
Por sua vez, espera-se que S. epidermidis se desenvolva mal nesse ambiente, com colônias cinza-marrom a preto, sem uma auréola clara.
Para E. coli e P. mirabilis, espera-se que seja total ou parcialmente inibido. No caso de crescimento, colônias marrons se desenvolverão sem uma zona opaca, nem um halo claro.
Recomendações
-Não aqueça o meio depois de adicionar o telurito e a gema de ovo.
-A preparação da emulsão de gema de ovo e seu agregado no meio é uma etapa de contaminação muito vulnerável. Cuidado deve ser tomado.
-Se houver presença de colônias típicas de S. aureus , isso deve ser corroborado pela montagem de um teste de coagulase na referida cepa.
-Se houver resultados duvidosos com a coagulase, outros testes de confirmação devem ser realizados.
-Tenha cuidado para não confundir a presença de colônias típicas de S. aureus com colônias negras atípicas.
Referências
- Contribuidores da Wikipedia. Ágar Baird-Parker. Wikipedia, A Enciclopédia Livre. 15 de março de 2017 às 19:36 UTC. Disponível em: wikipedia.org/ Acessado em 18 de fevereiro de 2019.
- Laboratórios BD. Ágar Baird Parker. 2006. Disponível em: bd.com
- Laboratórios britânicos. Base de ágar Baird Parker. 2015. Disponível em: britanialab.com
- Laboratórios Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Disponível em: http://f-soria.es/Inform
- Laboratórios britânicos. Telúrito de potássio. 2015. Disponível em: britanialab.com
- Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Portação de Staphylococcus aureus enterotoxigênico tipo A, em esfregaços nasofaríngeos em manipuladores de alimentos. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
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