O BIGGY agar é um sólido de cultura selectivo e diferencial médio. Foi desenvolvido para isolar e auxiliar na identificação das principais espécies de Candida. Seu nome BIGGY vem do acrônimo em inglês Bismuth Glucose Glycine Yeast.
A fórmula original foi criada por Nickerson, então esse meio também é conhecido como ágar Nickerson. Atualmente é composto por extrato de levedura, glicina, dextrose, citrato de amônio, citrato de bismuto, sulfito de sódio e ágar.
O agar BIGGY é formulado para a diferenciação das espécies complexas C. albicans, C. tropicalis, C. krusei e C. kefyr, mas outras espécies como Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum também crescem e Saccharomyces cerevisiae.
Possui boa sensibilidade e especificidade, no entanto, quando comparado a outras mídias com função semelhante, está em segundo lugar, sendo superado pelo CHROMagar. Por esse motivo, muitos laboratórios preferem o último, embora seja muito mais caro.
Deve ficar claro que o uso do agar BIGGY, bem como outros meios semelhantes, ajuda na identificação presuntiva rápida, mas nunca confirmatória. Portanto, métodos de identificação adicionais devem estar disponíveis; por exemplo, sistemas de identificação Vitek 32 e API 20.
Fundação
O ágar BiGGY é considerado um meio parcialmente seletivo para o isolamento de leveduras, principalmente do gênero Candida, embora outros gêneros possam crescer.
É também um meio diferencial, pois, dependendo das espécies envolvidas, diferentes características serão observadas em termos de aparência, cor, forma e tamanho. É considerado um meio cromogênico, devido ao desenvolvimento de diversas cores nas colônias.
A cor das colônias de levedura é devida à presença de sulfito de bismuto no ágar. Nickerson percebeu que leveduras do gênero Candida realizam uma redução extracelular do sulfito de bismuto, transformando-o em sulfeto de bismuto (substância preta insolúvel). Isso causa colônias entre o marrom claro e o preto.
Este ágar contém extrato de levedura e dextrose, que fornece a fonte de nutrientes básicos e energia para o desenvolvimento de leveduras. A glicina é um estimulante do crescimento de leveduras, enquanto inibe o desenvolvimento de certas bactérias .
Nesse mesmo sentido, o citrato de amônio e o bismuto, assim como o sulfito de sódio, atuam como inibidores de crescimento bacteriano. O ágar é o agente que confere ao meio uma consistência sólida.
Preparação
Pesar 45 g do meio de cultura desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Mexa e aqueça a mistura, fervendo por 1 minuto até a dissolução completa. Este meio de cultura não é autoclavado.
Ao resfriar a aproximadamente 45 ° C em banho-maria, despeje 20 ml em placas de Petri estéreis.
A cor do meio desidratado é cinza amarelado e preparado é um gel branco amarelado, no qual pode ser observado um leve precipitado de floculante.
O pH deve ser 6,8 ± 0,2.
O meio preparado deve ser armazenado em uma geladeira (4 ° C) e protegido da luz. Como é um meio que não autoclave, ele deve ser usado o mais rápido possível. Recomenda-se a sua utilização antes dos 3 dias da sua preparação.
Use
As placas são incubadas em temperatura ambiente (25 ° C) por 24, 48 e 72 horas, e o tempo de incubação pode ser prolongado até 5 dias.
Cada espécie de Candida desenvolve certas características que as diferenciam uma da outra.Os fabricantes do meio descrevem as seguintes características para cada espécie:
Complexo -Candida albicans: desenvolve-se neste ágar como colônias lisas, redondas, marrons ou pretas, com uma leve borda micelial. Com a condição de que a cor escura não se espalhe para o meio.
-Candida tropicalis: colônias brilhantes, pequenas e marrom-escuras, com centro preto e discreta borda micelial. A cor escura difunde-se para o meio, característica característica desta espécie, após incubação por 72 horas.
-Candida Krusei desenvolve colônias acidentadas, planas e de tamanho grande, com a fronteira entre o marrom e o preto.
-Candida parakrusei : colônias de tamanho médio, na maioria das vezes com uma aparência áspera e plana. A cor pode variar entre marrom avermelhado brilhante e marrom avermelhado claro. A fronteira das colônias possui um extenso micélio amarelado.
-Candida stellatoidea : desenvolve colônias médias e planas, marrom escuro, quase preto. O desenvolvimento micelial é muito escasso.
Um estudo realizado por Yücesoy e Marol em 2003 mostrou que o meio CHROMagar apresenta melhor sensibilidade e especificidade para diferenciação e identificação de diferentes espécies de Candida do que o ágar BIGGY.
Controle de qualidade
Para controle da esterilidade, as placas não inoculadas são incubadas a 25 ° C, no escuro por 24 a 48 horas, é esperado que não haja crescimento de qualquer tipo, nem mudança de cor.
As cepas ATCC recomendadas para o controle de qualidade do meio são:
Candida albicans complexa ATCC 60193 , Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Em todas elas é esperado crescimento como descrito acima.
As seguintes linhagens também podem ser usadas:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 e Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Nos dois primeiros, a inibição total é esperada, mas se as colônias crescerem parcialmente, elas serão de cor creme.
No caso de S. aureus, espera-se que seja totalmente inibido, mas se crescerem parcialmente, suas colônias são brancas.
Limitações
Algumas bactérias são capazes de se desenvolver nesse ambiente e podem até ficar de cor escura, simulando uma colônia de Candida, mas ao estender a colônia e observá-la ao microscópio, é facilmente descartável.
Tabela: Características das colônias de algumas leveduras em ágar BIGGY, de acordo com o trabalho de Yücesoy M e Marol S.
Referências
- Yücesoy M, Marol S. Desempenho de CHROMAGAR candida e agar BIGGY para identificação de espécies de leveduras.Ann Clin Microbiol Antimicrob . 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Folha de dados do BIGGY Agar. Disponível em: mcdlab.net/
- Lab Neogen Ágar BIGGY. Disponível em: foodsafety.neogen.com
- Laboratórios Conda Pronadisa. Ágar BIGGY. Disponível em: condalab.com
- Laboratórios BD Agar BD BiGGY (Agar de levedura de glicose e glicose de bismuto). 2011. Disponível em: bd.com