Ágar CLED: fundação, usos e preparação

O ágar CLED (Cistina-Lactose-Electrólito-Deficiência) é um sólido diferencial meio de cultura, usados para o diagnóstico de infecções do tracto urinário. A composição do meio de cultura é projetada para o bom crescimento de patógenos urinários e é ideal para a quantificação de unidades formadoras de colônias (UFC).

O meio de cultura CLED é não seletivo, uma vez que microorganismos Gram-negativos e também Gram-positivos podem crescer nele. Mas isso não é um problema, pois a maioria das infecções urinárias é causada por um único tipo de microorganismo.

Ágar CLED: fundação, usos e preparação 1

Ágar CLED

No caso de infecções polimicrobianas, podem ser obtidas 2 ou 3 bactérias diferentes, mas são muito raras e na maioria das vezes são amostras contaminadas.

Entre as bactérias Gram-negativas que podem crescer nesse ambiente estão os bacilos pertencentes à família Enterobacteriaceae e outros bacilos entéricos, sendo os uropatógenos mais frequentemente isolados em amostras de urina: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa , entre outros.

Da mesma forma, entre as bactérias Gram-positivas que podem crescer nesse ambiente estão Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp e até leveduras que podem crescer, como o complexo de Candida albicans.

No entanto, devido à composição química do meio, não permite o crescimento de alguns patógenos geniturinários exigentes, como Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, entre outros.

Fundação de ágar CLED

O meio de cultura CLED tem como fonte de energia extrato de carne, hidrolisado de caseína pancreática e hidrolisado de gelatina. Eles fornecem nutrientes para o desenvolvimento de bactérias pouco exigentes.

Também contém cistina, um aminoácido que permite o crescimento de coliformes, distinguível por seu pequeno tamanho.

Da mesma forma, contém lactose como carboidrato fermentável, por esse motivo esse meio é diferencial; ser capaz de distinguir as bactérias fermentadoras da lactose não fermentativa.

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As bactérias fermentadoras fazem com que o pH do meio seja alterado pela produção de ácidos, desenvolvendo colônias amarelas, enquanto as bactérias não fermentadoras não geram alterações no meio, portanto assumem a cor do ágar verde original.

A reação de fermentação é revelada graças à presença do indicador de pH, que neste meio é azul de bromotimol.

Por outro lado, a baixa concentração de eletrólitos no meio inibe o crescimento invasivo típico do gênero Proteus , chamado efeito enxame. Isso gera uma vantagem sobre outros meios, pois permite a contagem dos UFCs, inclusive se o gênero Proteus estiver presente.

No entanto, a baixa concentração de eletrólitos inibe o crescimento de algumas espécies do gênero Shigella, sendo esta uma desvantagem em relação a outros meios.

Fundação CLED Agar (Bevis)

Existe uma variante ou modificação deste meio por Bevis, que incorporou a composição original de fucsina ácida (indicador Andrade). Atua em conjunto com o azul de bromotimol para diferenciar bactérias fermentadoras e não fermentadoras.

A diferença entre o meio convencional e o meio modificado é a cor que as colônias adotam. No caso de bactérias fermentadoras de lactose, as colônias adquirem uma cor laranja avermelhada com um halo rosa ou vermelho, enquanto os não fermentadores têm uma cor azul acinzentada.

Usos

O ágar CLED é usado exclusivamente para semear amostras de urina. O uso deste meio é especialmente frequente em laboratórios europeus, enquanto nos Estados Unidos é menos utilizado.

A coleta de amostras deve atender a certos parâmetros para obter resultados confiáveis, incluindo:

  • Não tome antibióticos antes da amostragem.
  • De preferência, tome a urina na primeira hora da manhã, pois é mais concentrada, quando não é possível coletar amostras por métodos invasivos.
  • Lave bem os órgãos genitais antes de colher a amostra.
  • Descarte o primeiro jato de urina e coloque o recipiente.
  • Colete entre 25 e 30 ml de urina em um recipiente estéril bem rotulado.
  • Leve imediatamente para o laboratório cercado por gelo.
  • Ele deve ser processado antes de 2 horas de emissão ou refrigerado a 4 ° C por no máximo 24 horas.
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Semeando amostras de urina

A amostra de urina deve ser diluída 1:50.

Para diluição, coloque 0,5 ml da urina do paciente e dilua com 24,5 ml de solução fisiológica estéril.

Meça 0,1 ml da urina diluída e semeie por superfície com uma espátula drigalski no meio CLED. Este é o método de semeadura indicado para contar colônias. É por isso que é utilizado em amostras de urina, uma vez que os resultados devem ser expressos em UFC / ml.

Para a quantificação das colônias obtidas, proceda da seguinte maneira: conte as colônias da placa e multiplique por 10 e depois por 50. Dessa forma, você obtém a quantidade de UFC / ml de urina.

Interpretação

Contagens acima de 100.000 UFC / ml – indica infecção do trato urinário

Contagens abaixo de 1000 UFC / ml – Nenhuma infecção

Conta entre 1000-10.000 UFC / ml – duvidoso, possível contaminação, amostragem repetida.

ID

As colônias cultivadas em ágar CLED devem ter um grama e, dependendo das características morfotetoriais do microrganismo, é realizada uma subcultura específica.

Por exemplo, se for um bacilo Gram negativo, será plantado em um ágar MacConkey, onde a fermentação ou não de lactose é corroborada. Além disso, um ágar nutriente é anexado para realizar o teste da oxidase.

Se o Gram revelar cocos Gram-positivos, pode ser subcultivado em ágar de manitol salgado e ágar de nutrientes. Neste último, o teste de catalase é realizado. Finalmente, se forem observadas leveduras, elas serão semeadas em um ágar Sabouraud.

Muitos laboratórios evitam o uso do meio CLED e preferem usar apenas ágar-sangue , MacConkey e ágar nutritivo para semear amostras de urina.

Preparação

Num frasco para injetáveis ​​com um litro de água destilada, dissolva 36,2 gramas de ágar em pó CLED. Após 5 minutos de descanso, aqueça o ágar ressuspenso, misturando constantemente até ferver por 1 minuto.

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Em seguida, esterilize a 121 ° C por 15 minutos na autoclave. Terminado o tempo, ele é removido da autoclave e deixado esfriar até atingir uma temperatura de 45 ° C. Posteriormente, 15-20 ml são servidos em cada placa de Petri estéril.

O procedimento de servir a placa deve ser realizado dentro de uma cobertura de fluxo laminar ou na frente do queimador de Bunsen para evitar contaminação.

As placas servidas podem solidificar, são solicitadas em um transportador invertido e armazenadas em uma geladeira (2-8 ° C) até o uso.

O pH final do meio preparado deve ser 7,3 ± 0,2.

Referências

  1. Recomendações para o diagnóstico microbiológico de infecção urinária. chil infectol . 2001; 18 (1): 57-63. Disponível em: scielo.org.
  2. Panchi J. Identificação do agente microbiano que causa infecções urinárias em pacientes internos submetidos a cateterismo da bexiga. 2016. Trabalho de graduação para se qualificar para o Diploma em Laboratório Clínico. Universidade Técnica de Ambato. Equador
  3. Laboratórios britânicos. Meio CLED. Disponível em: britanialab.com.
  4. Laboratórios Renylab Instruções de uso, ágar CLED. 2013 Disponível em: es.renylab.ind.br.
  5. Laboratórios Cultimed Manual Básico de Microbiologia. Disponível em: ictsl.net.
  6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, MD Díaz, Vicente T, Bouza E. A opção de ágar CLED na rotina de cultura de urina. Uma avaliação prospectiva e comparativa. Diagn Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
  7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clínica prática. Universidade de Cádiz, 2ª edição. Serviço de Publicações da UCA.

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