Ágar Czapek: fundação, preparação, usos e limitações

O Czapek (CZA) é um meio selectivo de cultura sólido especificamente concebidos para o crescimento de bactérias e fungos saprófitas. Foi criado pelo botânico Friedrich Johann Franz Czapek, de origem polonesa, e pelo químico americano Arthur Wayland Dox; Portanto, este ágar também é conhecido como meio Czapek-Dox.

O meio original era líquido, mas mais tarde foi adicionado ágar para torná-lo um meio sólido. O meio Czapek é composto por nitrato de sódio, fosfato bipotássico, sulfato de magnésio, cloreto de potássio, sulfato ferroso, sacarose, ágar e água destilada .

Ágar Czapek: fundação, preparação, usos e limitações 1

Ágar Czapek Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Fonte: A. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0))// Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

O pH do ágar Czapek é 7,3, mas existe uma variante à qual é adicionado ácido lático a 10%, cujo pH é 3,5. Este meio ácido é utilizado para o cultivo de microrganismos acidófilos.

Por outro lado, algumas casas comerciais modificaram a composição do ágar Czapek alterando o sulfato de magnésio e o fosfato bipotássico em glicerofosfato; Esta modificação evita o precipitado de fosfato de magnésio observado com a fórmula convencional.Da mesma forma, há outra variante à qual o extrato de levedura é adicionado.

Finalmente, o ágar Czapek é recomendado pela Associação Americana de Saúde Pública APHA para o estudo de Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp e Penicillium sp. Essas espécies são caracterizadas como microorganismos ambientais e patógenos oportunistas.

Fundação

Este meio contém sacarose; Esse carboidrato serve como fonte de carbono, enquanto o nitrato de sódio é a fonte de nitrogênio, mas, diferentemente de outros meios, o nitrogênio fornecido é do tipo inorgânico.

Por esse motivo, o meio Czapek é considerado seletivo, porque apenas microorganismos capazes de usar compostos inorgânicos podem ser desenvolvidos como a única fonte de nitrogênio.

O fosfato bipotássico é a substância reguladora da osmolaridade do meio. Por outro lado, sulfato de magnésio, cloreto de potássio e sulfato ferroso fornecem minerais essenciais para o crescimento de microorganismos saprófitos (de vida livre). Com esta fórmula é formado um precipitado de fosfato de magnésio.

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Finalmente, o ágar-ágar é o composto que fornece ao meio consistência sólida e a água é o solvente de todos os componentes.

Com a fórmula modificada de agar Czapek, não há formação de precipitados e melhora o desempenho de crescimento de alguns fungos.

A extrema acidez do ágar Czapek ácido torna esse meio mais seletivo, permitindo apenas o crescimento de microrganismos acidófilos, capazes de usar nitrogênio inorgânico.Enquanto isso, o agar de levedura Czapek melhora o desempenho de certos fungos.

Preparação

Czapek-Dox Medium

Pesar 49 g do meio de cultura seco e dissolver em água destilada. Aplique calor até ferver. Mexa a mistura frequentemente até dissolver completamente.

-Cunhas de ágar-ázita

Distribua a mistura dissolvida em tubos e autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Ao remover da autoclave, homogeneize antes de colocar os tubos e deixe solidificar.

Placas de ágar-Czapek

Autoclave a mistura dissolvida a 121 ° C por 15 minutos e, ao sair, deixe esfriar até 50 ° C, homogeneize e despeje 20 ml em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar, inverter e guardar na geladeira até o uso.

O pH deve ser 7,3 ± 0,2. A cor do meio desidratado é branca e preparada é âmbar clara, ligeiramente turva devido à presença de um precipitado floculante.

Meio Czapek a pH ácido

Prepare como já descrito, mas adicione 10 ml de ácido lático estéril a 10% por litro de meio preparado. O meio Czapek modificado deve estar em pH 3,5 ± 0,2.

Meio Czapek modificado

Pesar 45,4 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água. O restante da preparação é o mesmo descrito acima. A cor do meio desidratado é branca e preparada é esbranquiçada. O pH final do meio é 6,8 ± 0,2.

Meio de levedura czapek

Também chamado ágar de extrato de levedura Czapek (CYA). Ele contém os elementos do ágar Czapek clássico e extrato de levedura.

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Use

O meio Czapek é usado para procurar microorganismos saprófitos em amostras de solo, vegetais, grãos, ar, insetos, entre outros.

O ágar Czapek ácido é utilizado para o crescimento de microrganismos acidófilos, enquanto o ágar Czapek modificado é especialmente útil para a formação de clamidosporos em espécies do complexo de Candida albicans.

Finalmente, o ágar de levedura Czapek é muito útil para o isolamento de Aspergillus e Penicillium.

Semeado

-Ágar de Capek

Para procurar Actinomycetes no solo, proceda da seguinte forma: a amostra é tratada com água fenolizada por 30 min e, posteriormente, 1 mL da suspensão é semeado no ágar Czapek. Incubar a 28 ° C por 5 a 7 dias.

Para amostras de vegetais, grãos e insetos são colocados diretamente no ágar. Também podem ser feitas diluições e semeados 0,1 ml na superfície do ágar.

– Agar Czapek modificado

Para a semeadura, é utilizada uma alça ou agulha reta, é impregnada com a zaragatoa e o ágar é inoculado fazendo uma punção até tocar a base da placa. Incube por 24 horas a 28 ° C e examine com um microscópio acima e abaixo da placa para verificar se os clamidosporos se formaram.

Temperatura e tempo de incubação

A temperatura e o tempo de incubação variam dependendo do tipo de microrganismo a ser isolado.As placas são geralmente incubadas por uma a duas semanas em uma faixa de temperatura de 20 a 25 ° C.

No entanto, existem condições específicas para algumas cepas. Por exemplo, a maioria das espécies do gênero Aspergillus tem crescimento ideal a 30 ° C; no entanto, A. fumigatus cresce a 50 ° C.

Quanto ao tempo de incubação, uma ou duas semanas é normal, no entanto, Candida albicans pode se desenvolver em 24 a 48 horas a 25 ° C.

Características de algumas colônias neste meio

-Penicillium atrovenetum

Desenvolve-se em 12 dias de incubação a 27 ° C. Suas colônias são pequenas (25 mm).

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As colônias têm uma aparência aveludada, com uma borda branca definida e no centro têm um tom azul esverdeado que se torna cinza à medida que envelhece. O reverso da colônia é laranja, colocando o meio da mesma cor para a produção de pigmentos.

-Aspergillus niger

Desenvolve-se com um micélio branco a amarelo e esporos pretos.

-Candida albicans

Colônias cremosas de cor bege claro se desenvolvem. No ágar Czapek modificado, forma clamidosporos.

-Aspergillus parasiticus

Um micélio verde escuro se desenvolve em 7 dias a 25 ° C.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do meio de cultura, podem ser semeadas cepas de controle certificadas, como: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

O Aspergillus niger desenvolve micélio branco a amarelo e esporos pretos em aproximadamente 5 dias, enquanto Candida albicans terá um crescimento satisfatório em 24 horas de incubação a 25 ° C; As colônias são de cor creme.

Limitações

Alguns estudos revelaram que, para a recuperação de Actinomycetes, o ágar de melhor desempenho é o ágar papa dextrose , com o ágar Czapek sendo o segundo, mas para a recuperação de Aspergillus e Penicillium, o ágar Czapek é o que oferece a maior taxa de recuperação.

Referências

  1. Dávila M, et al. Actinomicetos antagonistas contra fungos fitopatogênicos de importância agrícola. Rev. Mex. Cem Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponível em: scielo.org.
  2. Luna M, Lozada Y, Trigos Á. Isolamento de linhagens de Aspergillus niger , produtoras de ocratoxina A, em café verde (Arabica coffea) armazenado. Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Disponível em www.scielo.org.
  3. Contribuidores da Wikipedia. Meio Czapek. Wikipedia, A Enciclopédia Livre. 13 de janeiro de 2019 às 20:30 UTC. Disponível em: en.wikipedia.org
  4. Laboratórios Conda Pronadisa. Agar modificado Czapek-Dox. Disponível em: condalab.com
  5. Microkit Culture Media. Ágar Czapek-Dox. Diosponible in: mediacultivo.com

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