Ágar de soja tripticaseína: justificativa, preparação e usos

A soja triptona ágar ou Trypticase Soy Agar é um meio de cultura sólido, e não selectivo nutricional. É designado pelas letras TSA pelo acrônimo Trypticase I am Agar. É composto por triptein, peptona de soja, cloreto de sódio e ágar-ágar.

Devido ao seu alto poder nutricional, é ideal para o cultivo de microorganismos moderadamente exigentes e não exigentes. O meio sem suplementos adicionais não é recomendado para as culturas primárias, mas é muito útil para subcultura de linhagens puras e mantê-las viáveis, entre outros usos.

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Cunhas de ágar tripticaseína de soja em tubos com tampa de baquelite. Fonte: Fotografia tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Além disso, esse ágar serve de base para a preparação de meios enriquecidos, como o ágar sangue, especialmente quando é necessário observar os padrões de hemólise e montar os taxa de optoquina e bacitracina, necessários no diagnóstico de Streptococcus pneumoniae e Streptococcus pyogenes, respectivamente.

Por outro lado, quando combinado com antibióticos, é útil para isolar microorganismos anaeróbicos facultativos e estritos de importância clínica a partir de amostras com flora mista.

Finalmente, a composição do ágar tripticaseína de soja e seu desempenho atendem aos requisitos estabelecidos pelas diferentes farmacopeias (européia, japonesa e norte-americana).

Fundação

Para o bom desenvolvimento da bactéria é necessária a presença de contribuições energéticas, como aminoácidos, vitaminas, bases pítricas e pirimida.

Nesse sentido, a tripona e a peptona da soja fornecem esses nutrientes aos microrganismos, permitindo assim seu pleno desenvolvimento. No entanto, para bactérias exigentes, é necessário suplementar este ágar com sangue desfibrinado ou sangue aquecido para aumentar seu enriquecimento.

Por outro lado, se antibióticos são adicionados ao meio, ele se torna um meio seletivo. Você também pode adicionar 0,6% de extrato de levedura para promover o isolamento de espécies do gênero Listeria, enquanto a adição de telurito de cistina e sangue de cordeiro é ideal para Corynebacterium diphteriae.

Finalmente, o cloreto de sódio fornece o equilíbrio osmótico ao meio e o ágar fornece a consistência sólida.

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Preparação

Placas de ágar tripticaseína de soja

Para preparar o ágar tripticaseína de soja, 40 gramas do meio comercial seco em uma balança digital devem ser pesados. Ele se dissolve em um litro de água destilada contida em uma fiola.

A mistura é deixada repousar por 5 minutos e depois é levada a uma fonte de calor para ajudar a dissolver o meio. Mexa frequentemente e ferva por 1 ou 2 minutos. Posteriormente, o meio é esterilizado na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

Deixe esfriar até 50 ° C e distribua em placas de Petri estéreis. Deixe solidificar, inverter, pedir em plaquetas e guardar na geladeira.

O pH final do meio deve ser 7,3 ± 0,2.

Deve-se levar em consideração que a cor do meio de cultura desidratado é bege claro e deve ser armazenada entre 10 e 35 ° C, em local seco.

Por sua vez, o ágar preparado é âmbar claro. As placas preparadas devem ser armazenadas em uma geladeira (2 a 8 ° C) até o uso.

As placas devem atingir a temperatura ambiente antes de serem usadas.

Placas de ágar tripticaseína de soja suplementadas com sangue

O ágar-sangue é preparado adicionando 5% de sangue desfibrinado no momento do resfriamento do ágar de soja tripticaseína a 50 ° C. A mistura é homogeneizada girando com movimentos suaves.

Sirva em placas de Petri estéreis. A cor do meio deve ser vermelho cereja.

Placas de ágar tripticaseína de soja suplementadas com sangue aquecido

Para preparar o ágar-sangue com a base TSA, os procedimentos descritos acima são seguidos, mas ao sair da autoclave é permitido repousar até que a temperatura do meio esteja aproximadamente entre 56 e 70 ° C. Nesse momento, o sangue é colocado e misturado até que o meio fique marrom.

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Sirva em placas de Petri estéreis. A cor do meio é marrom chocolate.

Fatias de ágar tripticaseína de soja

O procedimento de preparação do ágar é o mesmo descrito para as placas, com a diferença de que, em vez de servir o meio em placas de Petri, é distribuído entre 10 a 12 ml em tubos com tampa de baquelite antes da esterilização.

Posteriormente, os tubos são autoclavados a 121 ° C por 15 minutos. Quando partem, inclinam-se com a ajuda de um suporte e podem solidificar-se.

As cunhas preparadas são semeadas pela superfície e servem para manter viáveis ​​certos microorganismos não exigentes por um certo tempo.

Usos

O agar de soja trippticaseína é usado nos seguintes casos:

-Como base para preparar o ágar-sangue clássico que é usado rotineiramente na maioria dos laboratórios.

-O isolamento de bactérias exigentes.

-Observação do padrão de hemólise.

-Execução de testes de diagnóstico.

-Como base para a preparação de ágar-sangue especial para Corynebacterium diphteriae, com telurito de cistina e sangue de cordeiro.

-Como base para a preparação de agar de sangue de cordeiro, além de canamicina-vancomicina para crescimento anaeróbico, especialmente Bacteroides sp.

Para manutenção de cepas não exigentes (Bacterioteca).

Contagem microbiana aeróbica no estudo do limite microbiano de amostras de água, meio ambiente, alimentos e cosméticos.

Semeado

As amostras podem ser semeadas diretamente na superfície do ágar de soja tripticaseína suplementado com sangue ou outros aditivos. É semeado por exaustão.

Enquanto isso, placas de ágar tripticaseína de soja sem aditivos são geralmente usadas para subcultivar linhagens microbianas (bactérias ou leveduras).

Controle de qualidade

Controle de esterilidade

Para verificar a esterilidade dos diferentes meios preparados com o ágar tripticaseína à base de soja, recomenda-se o seguinte: de cada lote preparado, 1 ou 2 placas ou tubos devem ser incubados a 37 ° C por 24 horas para demonstrar a esterilidade. Em todos os casos, deve permanecer sem crescimento.

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Se a contaminação for verificada, todo o lote deverá ser descartado.

Controle de crescimento

As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para estudar o funcionamento adequado do ágar tríptico de soja: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 e Enterococcus faecalis ATCC 29212.

As cepas são semeadas e incubadas em aerobiose a 37 ° C por 24 horas.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório.

Também podem ser usados ​​cogumelos como o complexo Candida albicans ATCC 10231 e Aspergillus niger ATCC 16404. É esperado um bom crescimento para ambas as linhagens.

Controle do crescimento e padrão de hemólise do ágar de soja tripticaseína suplementado com sangue

Para verificar o bom funcionamento do ágar-sangue preparado com esta base, podem ser utilizadas as seguintes cepas: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 e Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Eles são semeados e incubados a 37 ° C em microaerofilia por 24 horas.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório, levando em consideração que em S. pyogenes beta-hemólise (halo claro ao redor da colônia) deve ser observada e em ambas as cepas de hemólise alfa de S. pneumoniae (halo esverdeado ao redor do colônias)

Referências

  1. Contribuidores da Wikipedia. Trypticase eu sou ágar. Wikipedia, A Enciclopédia Livre. 17 de dezembro de 2018, 15:47 UTC Disponível em: https://en.wikipedia.org
  2. Laboratórios britânicos. Agar de soja Tryptein. 2015. Disponível em: britanialab.com
  3. Laboratórios Neogen Agar tripético de soja. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA
  5. Laboratórios BD Trypticase Eu sou ágar. 2014. Disponível em: .bd.com

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