O Ágar Eosina Azul de Metileno (EMB) é um meio seletivo e diferencial utilizado na microbiologia para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas, especialmente as pertencentes ao gênero Escherichia coli. Desenvolvido pelo microbiologista norte-americano Edward E. Ewing em 1947, o Ágar EMB é composto por extrato de carne, peptona, lactose, ágar, cloreto de sódio, eosina e azul de metileno. Sua principal função é inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas e permitir o crescimento de bactérias Gram-negativas, facilitando a identificação de colônias de E. coli pela cor característica que adquirem no meio. Este meio é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia para a detecção e isolamento de bactérias patogênicas, sendo fundamental para o diagnóstico de infecções bacterianas.
Microorganismos e utilidade do agar EMB: conheça quais são desenvolvidos e sua importância.
Os microorganismos são seres vivos de tamanho muito reduzido, que só podem ser vistos através de um microscópio. Eles estão presentes em todos os lugares, desde o solo até o nosso próprio corpo, desempenhando papéis essenciais no equilíbrio dos ecossistemas. Existem diferentes tipos de microorganismos, como bactérias, fungos, vírus e protozoários.
O agar EMB (Eosina Azul de Metileno) é um meio de cultura seletivo e diferencial utilizado para o crescimento de bactérias gram-negativas, principalmente aquelas da família Enterobacteriaceae. Ele foi desenvolvido por Holt-Harris e Teague em 1916 e é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia.
Para preparar o agar EMB, é necessário dissolver os ingredientes em água destilada e, em seguida, esterilizar o meio por autoclavagem. Após o resfriamento, o agar EMB solidifica, formando um gel que contém corantes especiais que facilitam a identificação das bactérias.
O agar EMB é um meio seletivo porque inibe o crescimento de bactérias gram-positivas, permitindo apenas o crescimento de bactérias gram-negativas. Além disso, ele é diferencial porque permite distinguir entre diferentes tipos de bactérias gram-negativas com base na capacidade de fermentar lactose e produzir ácido, o que resulta em diferentes colorações no meio.
A importância do agar EMB está relacionada à sua capacidade de auxiliar na identificação de bactérias patogênicas, ajudando os profissionais de saúde a diagnosticar infecções bacterianas e a prescrever o tratamento adequado. Além disso, o agar EMB é fundamental para pesquisas científicas e para o controle de qualidade de alimentos e produtos farmacêuticos.
Principais meios de cultura para bactérias Gram-positivas: conheça os mais utilizados no cultivo.
Os principais meios de cultura para bactérias Gram-positivas são aqueles que fornecem os nutrientes necessários para o crescimento e desenvolvimento desses microrganismos. Alguns dos meios mais utilizados incluem o Ágar sangue, o Ágar chocolate e o Ágar Mueller-Hinton.
O Ágar sangue é um meio de cultura comum, composto por sangue de ovelha ou cavalo e utilizado para o crescimento de bactérias que requerem fatores de crescimento adicionais. Já o Ágar chocolate é enriquecido com sangue, hemina e NAD, sendo ideal para o cultivo de bactérias fastidiosas, como o Haemophilus influenzae.
O Ágar Mueller-Hinton, por sua vez, é um meio de cultura utilizado para testes de sensibilidade a antibióticos, sendo recomendado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para testes de microrganismos Gram-positivos.
Ágar EMB: fundação, preparação e uso
O Ágar EMB (Eosina Azul de Metileno) é um meio seletivo e diferencial utilizado para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas, como as da família Enterobacteriaceae. Foi desenvolvido por Holt-Harris e Teague em 1916 e é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia.
Para preparar o Ágar EMB, é necessário dissolver o meio em água destilada e aquecê-lo até a ebulição, garantindo a homogeneização da solução. Após o resfriamento, o meio é dispensado em placas de Petri e esterilizado em autoclave antes do uso.
No laboratório, o Ágar EMB é utilizado para o cultivo e identificação de bactérias Gram-negativas, especialmente aquelas que fermentam a lactose. O meio permite distinguir entre bactérias fermentadoras de lactose (que produzem colônias rosas a vermelhas) e não fermentadoras (colônias incolores a transparentes).
Diferenças entre Ágares MacConkey sangue e Cled: o que você precisa saber.
Os ágares MacConkey sangue e Cled são meios de cultura utilizados em microbiologia para o isolamento e identificação de bactérias. Ambos possuem composições diferentes que permitem o crescimento de diferentes tipos de microorganismos.
O ágar MacConkey sangue contém sais biliares e cristal violeta, que inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas e permitem o crescimento de bactérias Gram-negativas. Além disso, possui lactose como fonte de carboidratos, facilitando a identificação de bactérias fermentadoras de lactose, que produzem ácido láctico e formam colônias de cor rosa.
Já o ágar Cled (Cysteine Lactose Electrolyte Deficient) é um meio seletivo para o isolamento de bactérias do trato urinário. Ele contém cistina e lactose, além de não possuir eletrólitos, o que favorece o crescimento de bactérias patogênicas que podem estar presentes na urina.
Em resumo, as principais diferenças entre os ágares MacConkey sangue e Cled estão na composição dos meios e nos tipos de bactérias que cada um permite crescer.
Ágar EMB: fundação, preparação e uso
O ágar EMB (Eosina Azul de Metileno) é um meio de cultura seletivo e diferencial utilizado para o isolamento de bactérias Gram-negativas, em especial as do gênero Escherichia coli. Ele foi desenvolvido por Holt-Harris e Teague em 1916 e é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia.
Para preparar o ágar EMB, é necessário dissolver o pó do meio em água destilada aquecida, seguindo as instruções do fabricante. Após a preparação, o meio deve ser esterilizado em autoclave a 121°C por 15 minutos e, em seguida, resfriado até atingir a temperatura de solidificação.
O ágar EMB é utilizado para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas, em especial as que fermentam lactose. As colônias de Escherichia coli, por exemplo, possuem cor verde metálica devido à fermentação da lactose e à produção de ácido acético. Além disso, o ágar EMB inibe o crescimento de bactérias Gram-positivas, facilitando a identificação das bactérias de interesse.
Em suma, o ágar EMB é um meio de cultura seletivo e diferencial amplamente utilizado em microbiologia para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas, como Escherichia coli. Sua preparação e uso requerem cuidado e seguimento das instruções para garantir resultados precisos e confiáveis.
Entenda o meio de cultura MacConkey e sua importância em microbiologia laboratorial.
O meio de cultura MacConkey é um meio seletivo e diferencial amplamente utilizado em microbiologia laboratorial. Ele foi desenvolvido por Alfred Theodore MacConkey no final do século XIX e é especialmente útil para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas, como a Escherichia coli.
Para preparar o meio de cultura MacConkey, são utilizados ingredientes como peptona, lactose, sais biliares, vermelho de neutro e ágar. A presença de sais biliares inibe o crescimento de bactérias Gram-positivas, enquanto a lactose e o vermelho de neutro permitem a diferenciação entre bactérias fermentadoras e não fermentadoras de lactose.
A importância do meio de cultura MacConkey na microbiologia laboratorial reside na sua capacidade de fornecer informações valiosas sobre a composição da microbiota de uma amostra clínica ou ambiental. Por exemplo, a presença de colônias coradas de rosa indica a fermentação da lactose, o que pode ser um indicativo de infecções por bactérias patogênicas como a E. coli.
Em resumo, o meio de cultura MacConkey é uma ferramenta essencial para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas, auxiliando no diagnóstico de infecções e no monitoramento da qualidade microbiológica de alimentos e ambientes.
Ágar EMB: fundação, preparação e uso
O agar EMB é um diferencial selectivo e meio utilizado para o isolamento de cultura sólido de bacilos Gram negativas, principalmente da família Enterobacteriaceae, e outras bactérias Gram negativas pouco exigente. Também é conhecido pelo acrônimo EAM, que significa azul de eosina-metileno.
Este meio foi criado por Holt-Harris e Teague em 1916. Contém peptona, lactose, sacarose, fosfato dipotássico, ágar, eosina, azul de metileno e água. É muito semelhante ao ágar MacConkey, especialmente se o ágar EMB modificado por Levine, que não contém sacarose, for usado.
De fato, cada laboratório decide se trabalha com um ou outro, pois cumpre a mesma função, mesmo que sejam bioquimicamente diferentes.
Ele ainda tem a mesma desvantagem do ágar MacConkey clássico em termos de produção de enxames pelo gênero Proteus. Portanto, para evitar esse fenômeno, a concentração do ágar pode ser aumentada em até 5%.
Fundação
Seletiva
O ágar EMB é sutilmente seletivo porque contém corantes de anilina (eosina e azul de metileno), que atuam como inibidores, impedindo o crescimento da maioria das bactérias Gram-positivas e de alguns bacilos Gram-negativos exigentes.
No entanto, este ágar tem a desvantagem de que algumas bactérias Gram-positivas podem resistir à presença de substâncias inibidoras e crescer como pequenas colônias pontuais incolores, como Enterococcus faecalis e alguns Staphylococcus .
Certas leveduras também podem crescer, como o complexo de Candida albicans , que dará colônias rosa muito pequenas. Até clamidosporos podem ser desenvolvidos a partir desta levedura se a amostra for semeada em profundidade.
Diferencial
Por outro lado, o ágar EMB também é um meio diferencial, uma vez que esses corantes juntos (eosina e azul de metileno) têm a propriedade de formar um precipitado em pH ácido, servindo como indicadores de sua produção.
Portanto, bactérias de lactose ou sacarose que fermentam pouco produzem colônias roxas em 24 a 48 horas. Por exemplo, os gêneros Klebsiella, Enterobacter e Serratia.
As bactérias que fermentam fortemente a lactose, como Escherichia coli, ou sacarose, como Yersinia enterocolitica ou Proteus penneri, formam um precipitado esverdeado preto, dando uma aparência característica de brilho metálico nessas espécies.
Note-se que, se for utilizado o meio de levina EMB (sem sacarose), Yersinia enterocolitica e Proteus penneri produzirão colônias transparentes.
As bactérias que não fermentam lactose ou sacarose são nutridas pela presença de peptonas, que fornecem os aminoácidos e nitrogênio necessários ao desenvolvimento bacteriano e produzem colônias transparentes. Por exemplo, os gêneros Salmonella e Shigella, entre outros.
Da mesma forma, é importante enfatizar que o gênero Acinetobacter pode apresentar colônias de lavanda azul, mesmo que não seja fermentador de lactose, nem sacarose, mas possui a propriedade de fixar o azul de metileno em sua parede celular. Isso também pode acontecer com outras bactérias oxidativas.
Preparação
O meio desidratado original é bege claro.
Para preparar este meio de cultura, 36 gramas do meio desidratado devem ser pesados e suspensos em um frasco para injetáveis contendo um litro de água destilada.
Depois de deixar a mistura em repouso por 5 minutos, leve a fiola a uma fonte de calor, misturando vigorosamente e constantemente até ferver e dissolver completamente.
Posteriormente, o meio de cultura já dissolvido deve ser esterilizado usando a autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
Após o tempo, ele é removido da autoclave e deixado descansar brevemente. Em seguida, é servido mesmo quente (45-50 ° C) entre 15 a 20 ml de ágar em cada placa de Petri estéril. O meio deve ser azul tornassol.
Depois de servir, os pratos são deixados levemente descobertos até o ágar esfriar um pouco. Eles são cobertos e deixados solidificar completamente. Posteriormente, eles são pedidos em um suporte de placa invertido e armazenados em uma geladeira (8 ° C) até o uso.
Esse procedimento é preferencialmente realizado em uma cobertura de fluxo laminar ou em frente ao queimador de Bunsen para evitar contaminação.
É importante ter em mente que cada casa comercial indicará a quantidade a pesar para preparar o meio de cultura.
O pH final do meio deve ser 7,2 ± 0,2
Usos
Este meio é usado para semear urina e fezes ou qualquer tipo de amostra clínica, especialmente se houver suspeita de presença de bacilos Gram-negativos não exigentes, como bacilos pertencentes à família Enterobacteriaceae, que cresce muito bem nesse meio.
As bactérias enteropatogênicas dos gêneros Shigella e Salmonella são diferenciadas por suas colônias incolores ou levemente âmbar.
Outros bacilos de lactose não fermentativos, como Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, entre outros, também crescem.
Da mesma forma, esse meio é muito útil na análise microbiológica de alimentos e água, pois é ideal para a fase confirmatória completa da determinação de coliformes, ou seja, para corroborar a presença de E. coli de caldos CE turvos, de da técnica numérica mais provável (NMP).
Controle de qualidade
Para verificar se o meio de cultura preparado na hora funciona bem, é possível semear cepas de controle para observar as características das colônias e verificar se elas dão como esperado.
Para isso , podem ser utilizadas cepas ATCC ou cepas bem identificadas de E. coli , Enterobacter aerogenes , Klebsiella sp , Salmonella typhimurium , Shigella flexneri , Pseudomonas aeruginosa e algumas bactérias Gram-positivas, como S. aureus .
Espera-se que E. coli gere colônias negras azuladas bem desenvolvidas com brilho metálico verde.Enquanto isso, Enterobacter aerogenes e Klebsiella sp devem fornecer colônias mucosas bem desenvolvidas em preto azulado.
Por outro lado, Salmonella typhimurium e Shigella flexneri , devem desenvolver colônias grandes, incolores ou com uma ligeira cor âmbar.
Finalmente, o gênero Pseudomonas aeruginosa cresce como colônias incolores de tamanho irregular, enquanto as bactérias Gram-positivas devem ser totalmente inibidas ou crescer mal com colônias muito pequenas.
Considerações finais
Às vezes, a esterilização faz com que o azul de metileno encolha, com uma cor laranja média sendo observada. Para que o azul de metileno oxide e recupere a cor púrpura, ele deve ser misturado suavemente até que a cor seja recuperada.
Além disso, após a esterilização, o corante pode precipitar, portanto deve ser bem misturado antes de servir as placas de Petri.
Referências
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B e Velázquez O. 2009. Técnicas de análise microbiológica de alimentos. 2nd ed. Faculdade de Química, UNAM. México
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Caracterização e distribuição de cepas potencialmente patogênicas de Escherichia coli de frangos de corte de aves domésticas no Peru. Rev. Invest. veterinário Peru 2012 23 (2): 209-219. Disponível em: scielo.org.
- Laboratórios Conda SA Agar com Eosina e Azul de Metileno. 2010. Disponível em: condalab.com
- Laboratórios britânicos. Levine EMB (Com Eosina e Azul de Metileno) 2011. Disponível em: britanialab.com
- Laboratórios BD Agar BD EMB (Agar Eosina Azul de Metileno), Modificado. 2013. Disponível em: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA