Ágar nutritivo: fundação, preparação e usos

O agar nutriente é um meio de cultura sólido e não – não selectivo diferencial. Nesse ambiente, crescem todos os tipos de bactérias que não são exigentes do ponto de vista nutricional.

É um meio simples e, apesar do nome, contém um valor nutricional mais baixo em comparação com outros meios semelhantes, como o ágar de infusão cerebral do coração ou o ágar tripticase de soja.

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Contagem de colônias em ágar nutriente

Sua utilidade no laboratório é muito variada. Serve principalmente para a subcultura de espécies, manutenção de linhagens, contagem de colônias, como base para a preparação de ágar-sangue, entre outros.

Da mesma forma, devido à sua cor bege claro, a produção de pigmentos gerados por algumas cepas bacterianas pode ser distinguida excepcionalmente, como o pigmento esverdeado de Pseudomonas aeruginosa , o pigmento de tijolo vermelho produzido por Serratia marcescens à temperatura ambiente, o pigmento amarelo dourado de Staphylococcus aureus, entre outros.

Além disso, é um dos meios de cultura mais econômicos encontrados no mercado.

Fundação

Como já mencionado acima, é um meio muito simples que se baseia no fornecimento de substâncias nutritivas para o crescimento bacteriano sem restrição e sem reações complexas para interpretar.

Como o meio é translúcido, é ideal contar colônias pelo método de semeadura em profundidade.

Composição:

É composto principalmente de extrato de carne ou de levedura, peptonas ou digestão pancreática de gelatina, ágar-ágar, cloreto de sódio e água destilada.

O extrato de carne ou levedura e peptonas representa as fontes de carbono e minerais essenciais (nitrogênio, fósforo e enxofre), que serão utilizados pelas bactérias como fonte de energia e fatores de crescimento.

Da mesma forma, o ágar-ágar é a base de todos os meios de cultura sólidos, substituindo a gelatina, que foi o primeiro composto base usado por Robert Koch para dar consistência sólida ao seu meio.

O ágar é um polissacarídeo composto de galactose, galactomanano, agarose e agaropectina. É fixado em 40 ° C e derrete perto de 100 ° C.

Por outro lado, o cloreto de sódio confere ao ambiente a osmolaridade necessária para o desenvolvimento bacteriano.

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Finalmente, a água serve para hidratar e dissolver compostos liofilizados. Água destilada ajustada para pH neutro deve ser usada. A água corrente não deve ser usada porque contém cálcio e magnésio que podem reagir com os fosfatos no meio e formar sais insolúveis.

Preparação

Para um litro de ágar nutriente, 31 gramas do meio desidratado devem ser pesados. É colocado em uma fiola e dissolvido em um litro de água destilada. Após 5 minutos de descanso, é aquecido em uma fonte de calor e constantemente misturado até ferver por 1 ou 2 minutos.

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Preparação do meio de cultura.

A fiola é então colocada em uma autoclave e esterilizada a 121 ° C por 20 minutos.

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Esterilização em autoclave

Depois que o tempo termina, ele é retirado da autoclave e servido em placas de Petri estéreis, usando um exaustor laminar ou queimador de Bunsen .

Se as placas de Petri forem descartáveis ​​(plástico), o meio deverá ser distribuído quando o ágar tiver uma temperatura aproximada de 50 ° C, para evitar que sejam deformadas pelo calor excessivo.

Deixar solidificar e armazenar em um suporte de placa invertido e refrigerar em uma geladeira de 2-8 ° C até o uso.

As placas devem ser temperadas antes de serem semeadas. As placas de ágar nutriente não devem ser usadas se estiverem contaminadas ou desidratadas.

O pH do meio preparado deve ser ajustado para 7,3 ± 0,2.

Usos

É o meio de cultura mais simples usado no laboratório de microbiologia. Sua formulação é excelente para o crescimento de bactérias não exigentes.

Seus principais usos são explicados abaixo:

Como base para a preparação de ágar-sangue

Às vezes, esse meio é usado como base para preparar o ágar-sangue, porém não é a base mais usada.

Estimular a esporulação de bactérias formadoras de esporos

Este meio de cultura é especialmente útil para estimular a esporulação de bactérias formadoras de esporos, como Bacillus sp.

Para isso, uma cepa do gênero Bacillus é semeada e incubada por 24 horas a 37 ° C em aerobiose. Depois que as colônias crescem, a placa é submetida a estresse de temperatura, ou seja, a temperatura do fogão é aumentada para 44 ° C e deixada por mais 24 horas ou é colocada na geladeira por 24 horas.

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No final do tempo, eles são estendidos da colheita e corados com coloração de Gram ou com coloração de esporos de Shaeffer-Fulton. Neles, bacilos com endosporos (esporos dentro do bacilo) e exósporos (esporos fora do bacilo) serão observados.

Manutenção da tensão

Alguns laboratórios de apoio à pesquisa ou ensino universitário exigem a manutenção de bactérias viáveis ​​de importância clínica pelo maior tempo possível, a fim de utilizar o banco de bactérias (bacterioteque) para trabalhos de pesquisa ou para a preparação de práticas de ensino, onde Os alunos aprenderão a manipular e identificar esses microorganismos.

O ágar nutritivo, bem como o ágar de infusão do coração, podem ser utilizados para esse fim. O ágar é preparado, vertido em tubos com uma tampa de baquelite e inclinado sobre uma base, de modo que o ágar se solidifique formando um bloco no fundo e um chanfro na superfície (pico da flauta).

Cada tubo é rotulado colocando o nome da bactéria a ser semeada e a data. Cada uma das bactérias será semeada no chanfro e incubada por 24 horas, após o crescimento das colônias, os tubos são armazenados em temperatura ambiente.

A bacterioteque deve ser renovada por 1 a 3 meses, para evitar a contaminação e desidratação do meio ambiente e também a morte da bactéria.

Somente bactérias não exigentes podem ser mantidas dessa maneira.

Contagem de Colônias

Embora existam meios especializados para a contagem de colônias, como o ágar de contagem padrão, o ágar de nutrientes pode ser utilizado para esse fim, seja por semeadura de superfície com uma espátula drigalski ou por profundidade. Portanto, é muito útil na análise microbiológica de alimentos e água.

Execução de testes de diagnóstico

Por ser um meio que não contém sangue ou qualquer outro aditivo, é ideal levar colônias cultivadas nesse meio para realizar o teste de catalase.

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Da mesma forma, devido à sua cor clara, é indicado realizar testes de oxidase diretamente em uma área do ágar-semente, sem interferência.

Recuperação de aeróbios mesofílicos recreativos de água salgada (Praias)

O ágar nutriente preparado com 10% de água do mar é útil para a avaliação de mesófilos aeróbicos em águas da praia.

Dessa forma, o nível de contaminação real que as águas apresentam com esses microrganismos pode ser apreciado, pois nesses tipos de amostras os resultados são sobrepostos ao usar meios de cultura preparados da maneira convencional.

Isso foi demonstrado por Cortez et al. em 2013 em um trabalho de pesquisa.

Isso é explicável devido à mudança repentina que as bactérias sofrem quando se deslocam de um ambiente hipersalato para um ambiente com pouco sal; portanto, os microrganismos entram em um estado de letargia no qual são viáveis, mas não cultiváveis.

Referências

  1. «Agar nutritivo». Wikipedia, A enciclopédia livre . 13 de setembro de 2016 às 20:33 UTC. 29 de dezembro de 2018 às 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Efeito de meios de cultura preparados com água do mar sobre indicadores sanitários em águas marinhas de spas de Chichiriviche, estado de Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M e Cardoso M. Qualidade da Água Microbiológica para Doses de Inseminação, para Suinos. Cient.Agro.Amaz . 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clínica prática. Universidade de Cádiz, 2ª edição. Serviço de Publicações da UCA.

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