Agar XLD: fundação, preparação e usos

O ágar XLD ou ágar desoxicolato Xilose Lisina é uma cultura sólida meio selectivo diferencial e para o isolamento de enteropatogénios. Taylor projetou a fórmula do agar XL (Xilosa, Lisina) para melhorar o isolamento do gênero Shigella.

Ele observou que esse gênero foi inibido na maioria dos meios destinados ao isolamento de enteropatógenos. Posteriormente, desoxicolato de sódio, tiossulfato de sódio e citrato de amônio férrico foram adicionados para aumentar sua seletividade. Esta fórmula provou ser útil para o isolamento de Shigella e Salmonella.

Agar XLD: fundação, preparação e usos 1

Diferenças das colônias de Shigella, Salmonella e coliformes no ágar XLD. A. Shigella sp., B. Salmonella sp., C. Coliformes. Fontes: A. Por: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, Cortesia: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Por: CDC / Dr. JJ farmer, Cortesia: Public Health Image Library

O ágar XLD é composto por extrato de levedura, desoxicolato de sódio, xilose, lisina, lactose, sacarose, tiossulfato de sódio, citrato férrico de amônio, cloreto de sódio, vermelho de fenol e ágar. Na maioria dos laboratórios de bacteriologia, o ágar XLD e o ágar SS são usados ​​para estudar amostras fecais em busca de Shigella e Salmonella.

Outros laboratórios preferem a combinação de CHROMagar Salmonella e ágar XLD, entre outras opções disponíveis. Essas duplas podem ser preparadas em pratos duplos de Petri. De um lado, colocam o ágar XLD e, do lado oposto, o outro meio escolhido.

Fundação

-Nutritivo

O ágar XLD possui o extrato de levedura, que serve como fonte de nutrientes para os microrganismos que se desenvolvem nesse ágar. Além disso, a presença de carboidratos (xilose, sacarose e lactose) fornece energia às bactérias que podem fermentá-los.

-Selectividade do meio

Como substância inibidora, possui desoxicolato de sódio; Isso impede o crescimento de bactérias Gram-positivas, dando ao ambiente um caráter seletivo.

-Poder diferencial

Colônias típicas de Shigella

Como já mencionado, o ágar XLD contém xilose; Este carboidrato é fermentado por todas as bactérias que crescem neste meio, exceto o gênero Shigella.

Essa é uma das características que lhe confere um caráter diferencial, uma vez que as colônias de Shigella são diferenciadas das demais pelo desenvolvimento de colônias vermelhas, enquanto as outras bactérias produzem colônias amarelas.

Colônias típicas de Salmonella

O gênero Salmonella também fermenta xilose, gerando inicialmente colônias amarelas. No entanto, após a depleção de carboidrato de xilose, ele ataca a lisina por sua enzima lisina descarboxilase. A descarboxilação da lisina gera álcalis que tornam a cor da colônia e do meio circundante no vermelho original.

Esse comportamento é realizado apenas por Salmonella, uma vez que os coliformes que descarboxilam a lisina não alcalinizam o meio. Isso ocorre porque os coliformes também fermentam a lactose e a sacarose presentes; portanto, a produção de ácidos é muito alta, deixando a colônia amarela nessas bactérias.

Note-se que o gênero Salmonella não fermenta sacarose ou lactose.

Produção de H 2 S

Agar XLD também detectar espécies de Salmonella produzir H 2 S; para isso, possui a fonte de enxofre representada pelo tiossulfato de sódio e um desenvolvedor da reação que é o citrato férrico de amônio.

Este último reage com H 2 S (incolor) e formar uma visível sulfato de ferro insolúvel precipitado preto. Nesse sentido, as características das colônias de salmonela serão vermelhas com um centro preto.

Note-se que para a reacção de formação de H dar 2 S, é necessário um pH alcalino. Isso é porque outras enterobactérias formar H 2 S não pode fazer ou fazer mal neste meio devido à elevada acidez produzido através da fermentação de hidratos de carbono presentes inibem ou impedem a reacção.

-Cloreto de sódio, ágar e vermelho de fenol

Finalmente, o cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico; o ágar é o agente solidificante e o vermelho fenol detecta mudanças no pH, mudando a cor das colônias e do meio.

Preparação

Pesar 55 gr de meio XLD desidratado e dissolver em 1 litro de água. Aqueça e mexa a mistura até atingir o ponto de ebulição. Não superaqueça, pois o calor danifica o meio ambiente e cria um precipitado que altera a morfologia das colônias típicas.

Este meio não deve ser autoclavado. Ao dissolver, deve ser transferido para um banho de água a 50 ° C. Ao esfriar, deve ser servido diretamente em placas de Petri estéreis. Eles podem ser servidos em pratos simples ou duplos. Eles podem solidificar e são armazenados na geladeira até o uso.

Tempere antes de usar. Por ser um meio não esterilizado, recomenda-se prepará-lo próximo à data de seu uso.

O pH final do meio deve ser 7,4 ± 0,2. A cor do meio preparado é vermelho alaranjado, translúcido, sem precipitado.

Se você possui o ágar-base Xilosa Lisina (XL), pode adicionar desoxicolato de sódio, tiossulfato de sódio e citrato de ferro e amônio. Desta forma, a fórmula de agar XLD é obtida.

Usos

O ágar XLD é utilizado para a recuperação de enteropatógenos, principalmente do gênero Shigella e secundariamente do gênero Salmonella. É útil para avaliar amostras de fezes, água e alimentos.

Tipos de amostras

Tamborete

As amostras de fezes podem ser semeadas diretamente no ágar XLD, fazendo uma boa distribuição do material para obter colônias isoladas.

Para melhorar a recuperação de Salmonella, o ágar XLD pode ser semeado a partir de meios de enriquecimento para Salmonella.

Alimento

No caso de alimentos, caldos de enriquecimento podem ser usados ​​para Salmonella e Shigella.Para Salmonella, você pode usar caldo de selenita cistina, caldo de tetrationato verde-claro, entre outros.

No caso de Shigella, pode ser enriquecido com caldo de Shigella com 0,5 µ / ml de novobiocina, incubado a 42 ° ± 1 ° C por 16-20 horas.

Agua

Na análise da água, recomenda-se a técnica de filtração por membrana e o uso de ágar XLD, entre outros.

Condições de sementeira e identificação

O meio semeado é incubado em aerobiose a 35 ° C por 24 a 48 horas.

Observam-se colônias típicas de cada gênero, colônias suspeitas devem ser testes bioquímicos para identificação.

Controle de qualidade

As seguintes cepas bacterianas podem ser usadas para avaliar o controle de qualidade do meio: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224 , Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

O gênero Salmonella é caracterizado por apresentar, neste meio, colônias vermelhas com centro preto ou colônias completamente negras. Enquanto, no gênero Shigella, as colônias devem ser vermelhas, ou seja, a cor do meio.

No caso de Escherichia coli, espera-se que seja total ou parcialmente inibido; Se cresce, as colônias são amarelas. Para Proteus mirabilis pequenas colônias crescimento rosa com ou sem centro preto é esperado. Finalmente, o gênero Klebsiella crescerá como colônias amarelas.

Considerações finais

O ágar XLD é amplamente utilizado em laboratórios de bacteriologia por sua alta eficiência na recuperação de Shigella e também possui uma boa recuperação do gênero Salmonella.

Rall et al. (2005), em seu trabalho intitulado “Avaliação de três caldos de enriquecimento e cinco meios sólidos para a detecção de Salmonella em aves”, demonstraram que das três médias clássicas testadas (ágar verde brilhante, ágar SS e ágar XLD) , o ágar XLD obteve a melhor taxa de recuperação.

As porcentagens de recuperação foram as seguintes: 13,8% para ágar verde brilhante, 27,6% para SS e 34,5% para XLD. Somente foi superado pelo ágar-ágar cromogênico Rambach com recuperação de 48% e o CHROMagar com 79,3%.

Referências

  1. Doenças transmitidas por alimentos. Shigelose Disponível em: anmat.gov.ar
  2. «XLD agar.» Wikipedia, a enciclopédia livre . 9 de fev de 2019 às 11:46 UTC. 10 abr 2019, 19:25 wikipedia.org
  3. Laboratórios BBL. Ágar CHROMagar Salmonella / BD XLD (biplaca) .2013 Disponível em: bd.com
  4. Lab. Neogen. Ágar XLD. Disponível em: foodsafety.neogen
  5. Laboratório Francisco Soria Melguizo. Agar XLD. Disponível em: http://f-soria.es/Inform
  6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Avaliação de três caldos de enriquecimento e cinco meios de revestimento para detecção de Salmonella em aves. Braz J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Disponível em: scielo.br
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

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