Caldo CE: justificativa, preparação e usos

O caldo EC ou caldo de Escherichia coli é um meio de cultura líquido selectivo. Esse meio é recomendado pelos Métodos Padrão para a contagem de coliformes totais e fecais, pela técnica do número mais provável (NMP) em amostras de água e alimentos, onde o principal agente envolvido é Escherichia coli.

O caldo CE é composto por triptina, lactose, sais biliares, fosfato dipotássico, fosfato monopotássico, cloreto de sódio e água. Sua fórmula é estrategicamente projetada para favorecer o crescimento de coliformes totais e fecais e impedir o desenvolvimento de outros microorganismos acompanhantes.

Caldo CE: justificativa, preparação e usos 1

Representação figurativa da preparação de caldo CE. Fonte: Pixabay.com

A bactéria Escherichia coli é o principal coliforme fecal presente como contaminante em alimentos e fontes de água, causando importantes efeitos gastrointestinais.

Deve-se notar que existem muitos sorotipos de Escherchia coli;Entre eles, podem ser mencionados os fatores enterohemorrágico (EHEC), enteroinvasivo (EIEC), enteropatogênico (EPEC), enterotoxigênico (ETEC) e enteroagregativo (EAEC).

Esse meio tem a capacidade de permitir o desenvolvimento de todos eles, mas sem poder diferenciá-los um do outro. Para isso, testes adicionais devem ser realizados.

O estudo microbiológico da água e dos alimentos pelo número mais provável (NMP) para a busca de coliformes totais e fecais é um protocolo composto de várias fases; fase presuntiva, fase confirmatória e fase de conclusão. O caldo CE é usado na fase de confirmação.

Fundação

Caldo CE

O meio EC é baseado no fornecimento dos elementos nutricionais necessários para o desenvolvimento ideal de coliformes totais e fecais, onde a bactéria Escherichia coli está incluída .

Esses elementos nutricionais são fornecidos pelo triptein, sendo uma excelente fonte de peptídeos e aminoácidos. Além disso, também contém lactose, um carboidrato fermentável que fornece energia e permite evidências de que as bactérias produzem gás.

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Por outro lado, o meio contém sais biliares que proporcionam caráter seletivo, pois inibe o crescimento de microrganismos Gram-positivos que podem estar presentes na amostra.

Da mesma forma, fosfato dipotássico e fosfato monopotássico atuam como um sistema de equilíbrio de pH. Esse sistema é necessário, porque a lactose contida no caldo tende a acidificar o meio quando é fermentada por microorganismos, mas isso é compensado por sais de fosfato.

Portanto, esses elementos são essenciais, pois a acidez descontrolada pode afetar o bom desenvolvimento dos microrganismos procurados.

Por outro lado, o cloreto de sódio estabiliza osmoticamente o meio, enquanto a água é o solvente dos solutos presentes e fornece a consistência líquida ao meio.

Caldo CE modificado com novobiocina

Okrend e Rose criaram uma variedade de caldo CE, chamado caldo CE modificado com novobiocina. A modificação consistiu em uma diminuição na concentração de sais biliares e na adição de 20 mg / dl de novobiocina.

Esta modificação favorece a recuperação de cepas enterohemorrágicas de Escherichia coli (O157: H7).

Este sorotipo bacteriano causa colite hemorrágica grave que pode causar síndrome urêmica hemolítica (SHU); que por sua vez pode gerar insuficiência renal aguda, com alta taxa de mortalidade que pode chegar a 50% em idosos.

Devido à morbimortalidade causada por esta bactéria anualmente devido ao consumo de alimentos contaminados, o Departamento de Agricultura dos Estados Unidos (USDA) recomenda fortemente o uso desse meio.

Preparação

Caldo CE

Pesar 37,4 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada. A mistura deve ficar em repouso por 5 minutos. Posteriormente, em uma fonte de calor, ele é dissolvido por agitação frequente.

Uma vez dissolvido, é distribuído em tubos de ensaio pré-condicionados com um tubo Durham dentro. Esterilizar em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

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O pH do meio deve ser 6,9 ± 0,2. A cor do meio desidratado é bege e o preparado é âmbar claro.

Os caldos são armazenados na geladeira até o uso. No momento do uso, os caldos devem estar à temperatura ambiente.

Por outro lado, o caldo CE também pode ser preparado em dupla concentração.

Caldo CE modificado com novobiocina

Pesar 36,7 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água. O restante da preparação é o mesmo descrito acima.

Use

Análise dos coliformes totais e fecais

O caldo CE é ideal para a fase confirmatória do estudo de coliformes pelo método NMP, tanto em amostras de água quanto em produtos farmacêuticos e alimentícios.

Os caldos de lactose sujos com produção de gás obtida na fase presuntiva devem ser semeados novamente em caldos verdes brilhantes 2% biliares e em caldo CE.

Para coliformes totais, os caldos CE são incubados em aerobiose por 24 a 48 horas a 37 ° C, e para coliformes fecais são incubados em aerobiose por 24 a 48 horas a 44 ° C.

Nos dois casos, é interpretado da seguinte forma: tubos turvos com produção de gás são considerados positivos. Se não houver produção de gás dentro de 24 horas, a incubação é continuada por até 48 horas.

Os caldos positivos da CE passam para a fase confirmatória completa, que consiste em reanimar em meios seletivos, como o ágar Mac Conkey, o ágar EMB ou o ágar Endo.

Se o caldo utilizado for modificado pela CE com novobiocina, recomenda-se a repetição dos tubos positivos no ágar Mac Conkey com sorbitol.

Controle de qualidade

O controle de qualidade deve ser realizado em cada lote de meio preparado. Primeiro, a esterilidade do meio deve ser avaliada. Nesse sentido, um ou dois caldos são incubados sem inocular na aerobiose por 24 horas a 37 ° C. O resultado esperado é um caldo transparente, sem turbidez ou alteração de cor.

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Em segundo lugar, o crescimento de cepas conhecidas deve ser avaliado, para isso podem ser utilizadas as seguintes bactérias: Escherichia coli , ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Em todos os casos, é esperado um desenvolvimento microbiano satisfatório, observando um caldo nublado com produção de gás para E. coli e sem gás para Salmonella.

Outras cepas que podem ser incluídas no controle são: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Essas cepas devem ser totalmente inibidas.

Recomendações

-A colocação de tubos de Durham é essencial para o estudo de coliformes.

-Distribua o meio nos tubos de ensaio antes da esterilização, nunca depois.

-Não use se o meio tiver mais de 3 meses de preparação.

-Não use se notar alguma alteração nas características usuais do meio.

Referências

  1. Laboratórios britânicos. CE médio 2015. Disponível em: britanialab.com
  2. E. coli enterohemorrágica. O Centro de segurança alimentar e saúde pública. 2010. Disponível em: cfsph.iastate.edu
  3. Neogen Corporation. Meio CE. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  4. Neogen Meio CE modificado com novobiocina. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Detecção, isolamento e caracterização de Escherichia coli produtora de toxina Shiga a partir de carne moída fresca de açougues em Concepción, província de Tucumán. Rev Arg de Microbiol;2010, 42 (4): 284-287. Disponível em: www.scielo.org.

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