Caldo de tripticaseína de soja: justificativa, preparação e usos

O caldo de soja triptona é um meio de cultura líquido, altamente nutritivo, não selectivo. Devido à sua grande versatilidade, é um dos meios de cultura líquidos mais amplamente utilizados no laboratório de microbiologia.

Também é conhecido pelo nome de caldo de soja tripticasa ou caseína-soja digerida, cuja abreviação é TSB para seu acrônimo Tryptic Soy Broth ou CST para seu acrônimo em espanhol. Seus usos são muito variados devido à sua composição. É composto de triptein, peptona de soja, cloreto de sódio , fosfato dipotássico e glicose.

Caldo de tripticaseína de soja: justificativa, preparação e usos 1

Caldo de triptase da soja semeado com uma cepa de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, onde é observada a produção de pigmentos. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

É capaz de reproduzir bactérias patogênicas clinicamente importantes, incluindo aquelas que são exigentes em termos nutricionais e bactérias anaeróbicas. Alguns fungos e contaminantes oportunistas também podem se desenvolver nesse ambiente.

Devido ao seu alto poder nutricional, possui alta sensibilidade para detectar contaminação microbiana; por esse motivo, foi escolhido pelo Serviço de Inspeção de Sanidade Animal e Vegetal do USDA para análise de vacinas microbiológicas.

Da mesma forma, o caldo de soja triptysein atende aos requisitos de diferentes farmacopeias (EP europeu, JP japonês e norte-americano da USP) para o estudo microbiológico de produtos em nível industrial, como cosméticos e alimentos.

Por outro lado, vale ressaltar que, apesar de sua grande utilidade, esse meio é relativamente econômico, por isso é acessível para a maioria dos laboratórios de microbiologia. Também é muito fácil de preparar.

Fundação

Triptein, peptona e glicose fornecem as propriedades nutricionais essenciais para torná-lo um meio ideal para o rápido desenvolvimento microbiano.

Em aproximadamente 6 a 8 horas de incubação, o crescimento já pode ser visto na maioria dos microorganismos. No entanto, existem cepas de crescimento lento que podem durar dias para crescer.

O cloreto de sódio e o fosfato dipotássico atuam como equilíbrio osmótico e regulador de pH, respectivamente.A presença de crescimento é evidenciada pelo aparecimento de turbidez no meio; se não houver crescimento, o meio permanecerá translúcido.

Devido à sua cor clara, é possível observar a produção de pigmentos, como o mostrado na imagem localizada no início do artigo, que corresponde ao pigmento produzido por Pseudomonas aeruginosa.

Preparação

– Caldo de soja Tryticasein

Para preparar o caldo de soja tripticasa, 30 gramas do meio comercial seco devem ser pesados ​​em balança digital. É então dissolvido em um litro de água destilada contida em uma fiola.

A mistura é deixada repousar por 5 minutos e depois é levada a uma fonte de calor para ajudar a dissolver o meio. Mexa frequentemente enquanto ferve por 1 minuto.

Uma vez dissolvido, é distribuído em tubos de tamanho apropriado, conforme necessário. Podem ser utilizados tubos com um tampão de algodão ou com tampas de baquelite. Posteriormente, os tubos são esterilizados com o meio na autoclave a 121 ° C por 15 minutos.

O pH do meio deve ser 7,3 ± 0,2

Deve-se levar em consideração que a cor do meio de cultura desidratado é bege claro e deve ser armazenada entre 10 e 35 ° C, em local seco. Enquanto o caldo preparado é âmbar claro e deve ser armazenado em uma geladeira (2 a 8 ° C).

-Variantes de caldo de soja triptysein

O caldo de soja triptysein modificado pode ser preparado pela adição de sais biliares e novobiocina, a fim de torná-lo seletivo para o isolamento de E. coli.Outra opção para o mesmo objetivo é preparar o caldo de soja tripticase suplementado com vancomicina, cefixima e telurita (2,5 µg / ml).

Por outro lado, mais glicose (0,25%) pode ser adicionada ao caldo de soja triptysein quando o objetivo é estimular a formação de biofilmes.

Use

É nutritivo o suficiente para permitir o crescimento de bactérias exigentes ou exigentes, como Streptococcus pneumoniae , Streptococcus sp e Brucella sp, sem a necessidade de suplementar com sangue ou soro.

Além disso, alguns fungos podem se desenvolver nesse caldo, como o Candida albicans Complex , Aspergillus sp e Histoplasma capsulatum.

Além disso, este meio em condições anaeróbicas é ideal para recuperar bactérias pertencentes ao gênero Clostridium, bem como bactérias anaeróbias não esporuladas de importância clínica.

Se for adicionado cloreto de sódio a 6,5%, pode ser utilizado para o crescimento de Enterococcus e outros estreptococos do Grupo D.

Ao nível da investigação tem sido muito útil em vários protocolos, especialmente no estudo de bactérias que formam biofilmes ou biofilmes.Também é usado para preparar a suspensão bacteriana a 0,5% de Mac Farland necessária para realizar o antibiograma pelo método de Kirby e Bauer.

Nesse caso, 3 a 5 colônias de aparência semelhante são colhidas e emulsionadas em 4-5 ml de caldo de soja tripticaseína. É então incubado por 2 a 6 horas a 35-37 ° C e subsequentemente ajustado à concentração desejada usando solução salina estéril. Os caldos de soja com tripticaseína não devem ser utilizados por 18 a 24 horas de incubação.

Semeado

A amostra pode ser semeada diretamente ou colônias puras retiradas de meio seletivo podem ser subcultivadas.O inóculo deve ser pequeno para não embaçar o meio antes da incubação.

Geralmente é incubado a 37 ° C em aerobiose por 24 horas, mas essas condições podem variar dependendo do microrganismo procurado. Também pode ser incubado em condições anaeróbicas a 37 ° C por vários dias, se necessário.Por exemplo, em microrganismos exigentes ou de crescimento lento, ele pode ser incubado por até 7 dias.

Na análise microbiológica de substâncias farmacêuticas – como vacinas – os protocolos são mais rigorosos. Nestes casos, o caldo sem crescimento não é descartado até atingir 14 dias de incubação contínua.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, 1 ou 2 tubos devem ser incubados sem inoculação para demonstrar sua esterilidade. Ele deve permanecer inalterado.

Você também pode semear cepas conhecidas para avaliar seu comportamento. Entre as cepas que podem ser usadas estão:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Cândida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ou 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Em todos os casos, o crescimento deve ser satisfatório sob as condições de atmosfera e temperatura adequadas para cada microrganismo.

Limitações

-A fermentação da glicose faz com que o pH do meio diminua devido à produção de ácido. Isso pode ser desfavorável para a sobrevivência de alguns microorganismos sensíveis à acidez.

-Não é recomendado para a manutenção de cepas, pois além de acidez, as bactérias, após alguns dias, esgotam os nutrientes com o consequente acúmulo de substâncias tóxicas que tornam o ambiente inóspito.

-Você deve trabalhar cuidando de todos os protocolos de esterilidade, pois os caldos são facilmente contamináveis.

-Depois de preparados, os caldos de soja triptysein não devem tentar transferir o caldo para outro tubo estéril, porque esse tipo de manobra é muito vulnerável à contaminação.

Referências

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