Coloração de May Grünwald-Giemsa: fundamento, técnica e usos

A coloração de May Grunwald-Giemsa ou Pappenheim é uma técnica de coloração diferencial de Giemsa e misturando os reagentes May Grunwald. É utilizado para a diferenciação de células sanguíneas normais e anormais em exames periféricos de sangue e medula óssea, bem como para a coloração de cortes histológicos e amostras citológicas.

Ambos os reagentes – Giemsa e May Grünwald – são derivados da coloração de Romanowsky, uma técnica baseada na combinação de corantes ácidos e básicos.

Coloração de May Grünwald-Giemsa: fundamento, técnica e usos 1

Esfregaço mostrando um neutrófilo segmentado e um milênio em um caso de leucemia mielóide crônica, corada com a coloração de May Grünwald Giemsa. Dr. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/File:LMC-1.JPG) através do Wikipedia.org.

Giemsa melhorou a técnica estabilizando a mistura de eosina, azul de metileno e seus derivados, com glicerol. Em vez disso, May Grünwald usa eosina e azul de metileno, usando metanol como solvente. Essa combinação estratégica deu excelentes resultados.

Enquanto a observação da morfologia celular atua de maneira semelhante às colorações de Giemsa e Wright, essa técnica aprimora as anteriores, refinando a coloração dos parasitas causadores de malária, doença de Chagas, leishmaniose e tricomoníase.

Além disso, provou ser uma técnica muito útil para o estudo citológico do líquido espermático. Destacou-se não apenas por mostrar as características morfológicas dos espermatozóides, mas também permite diferenciar leucócitos, células epiteliais e espermatogênicas com grande eficiência .

Fundação

A técnica segue a base das manchas de Romanowsky, nas quais os corantes ácidos têm afinidade seletiva pelos componentes básicos celulares e os componentes ácidos atraem os corantes básicos.

Em outras palavras, as estruturas celulares e os corantes têm cargas elétricas positivas ou negativas; encargos iguais repelem e encargos diferentes atraem.

Por exemplo, corantes básicos como o azul de metileno são carregados positivamente e atraídos por estruturas carregadas negativamente. É por isso que esse corante mancha núcleos ricos em DNA e RNA que carregam negativamente grupos fosfato.

Os grânulos dos basófilos segmentados e citoplasmas dos glóbulos brancos mononucleares contendo RNA também são corados.

Da mesma forma, o corante ácido carrega uma carga negativa, por isso se liga a estruturas carregadas positivamente, como eritrócitos e grânulos dos eosinófilos segmentados. Quanto aos grânulos dos neutrófilos segmentados, estes fixam os dois corantes.

Relacionado:  Saltacionismo: características, evidências e exemplos

Variedade de corantes

Nesta técnica coexiste uma combinação de reações entre corantes orto- cromáticos e metacromáticos. Os ortocromáticos (eosina e azul de metileno) são fixados à estrutura celular à qual estão relacionados e fornecem uma cor estável que não varia.

Por outro lado, os metacromáticos (aqueles derivados do azul de metileno azul A e azul B) variam sua cor original uma vez anexada à estrutura específica, e pode até haver uma variedade de nuances.

Finalmente, o passo dado pela solução de May Grünwald requer a presença de água, pois sem ela o corante penetrará nas estruturas, mas não será corrigido. Para que isso aconteça, o corante deve tornar-se polar ou ionizado e, assim, ser capaz de precipitar e se ligar a estruturas relacionadas.

Técnica

Materiais

– Slides.

– Pontes para colorir.

– Solução de May-Grünwald.

– coloração de Giemsa.

– Água destilada.

Solução de corante concentrado May Grünwald

0,25 g de azul de eosina-metileno (corante de acordo com May Grünwald) devem ser pesados ​​e dissolvidos em 100 ml de metanol. Em seguida, a preparação é misturada por 1 hora e deixada em repouso por 24 horas. Depois que o tempo termina, ele é filtrado.

Para aplicar a técnica, o corante May Grünwald deve ser diluído da seguinte forma: para 200 ml de corante diluído, são medidos 30 ml da solução concentrada, 20 ml de solução tampão e 150 ml de água destilada ajustados para pH7.2-7.3. . É posteriormente misturado e filtrado.

Coloração Giemsa Concentrada

0,5 g de azul de azur-eosina-metileno (corante de acordo com Giemsa) devem ser pesados, dissolvidos em 50 ml de metanol e colocados na mistura 50 ml de glicerina.

Para executar a técnica, dilua 1:10 com solução tampão e deixe repousar por 10 minutos. Pode ser filtrado, se necessário.

Preparação da solução tampão a pH 7,2

Eles devem ser pesados:

– 40 mg de di-hidrogenofosfato de potássio (KH2PO4).

– 151 mg de hidrogenofosfato dissódico 12-hidrato (Na2HPO4).

Ambos os compostos são dissolvidos em 100 ml de água.

Procedimento de esfregaço de sangue ou coloração da medula óssea

Existem duas modalidades: uma clássica e uma rápida.

Relacionado:  Histologia: história, que estudos e métodos de estudo

Modo clássico

  1. Cubra as manchas por 2 ou 3 minutos com a solução diluída de May-Grünwald.
  2. Lave com água destilada tamponada para remover a solução anterior.
  3. Cubra com a mesma solução de lavagem tamponada e deixe por 1 minuto. A idéia é que o corante anterior seja fixado às estruturas e que, ao mesmo tempo, as células sejam hidratadas.
  4. Adicione 12 gotas de tintura de Giemsa diluída sobre a água tamponada e sopre para misturar e homogeneizar. Deixe descansar por 15 ou 20 minutos.
  5. Lave as manchas com água destilada tamponada e deixe-a secar ao ar.
  6. Focalize e observe as células sanguíneas manchadas em um microscópio óptico usando a objetiva 40X. Se necessário, 100X pode ser usado.

Modo rápido

  1. Cubra o esfregaço com o corante May Grünwald diluído por 1 minuto.
  2. Lave com água destilada tamponada.
  3. Cubra com água tamponada e deixe descansar por 1 minuto.
  4. Coloque o corante Giemsa diluído e deixe por 5 minutos.
  5. Lave com água destilada tamponada e deixe secar ao ar.

As técnicas descritas aqui são um guia, mas deve-se ter em mente que os procedimentos e os tempos de coloração variam de acordo com a empresa comercial que vende os reagentes. É aconselhável seguir os passos estritamente indicados por cada casa comercial.

Técnica alargada de coloração de líquido espermático

1- Cubra a pasta com uma fina camada da solução May Grünwald por 4 minutos.

2- Remova o corante e lave com água destilada.

3- Coloque uma camada de Giemsa diluído (1:10) em água destilada por 15 minutos.

4- Remova o corante e lave com água destilada.

5- Deixe secar e observe ao microscópio.

Coloração de May Grünwald-Giemsa: fundamento, técnica e usos 2

Cores esperadas com a coloração May Grünwald Giemsa

Especificações importantes

A técnica requer que os reagentes e as soluções de lavagem tenham um pH ajustado para 7,2 -7,3, para que as afinidades dos corantes pelas estruturas celulares não sejam distorcidas e a cor final esperada não varie.

Usos

Essa técnica é usada pelos laboratórios clínicos para manchar sangue periférico e esfregaços de medula óssea, cortes de tecidos e citologias.

No campo hematológico, essa técnica é de vital importância no estudo de anormalidades celulares em termos de forma, tamanho e número. É uma ferramenta muito valiosa para o diagnóstico de certas doenças, como leucemia e anemias.

Relacionado:  9 Características dos fungos surpreendentes

Além disso, possui uma excelente utilidade na busca de parasitas nas áreas hematológica ( Plasmodium sp e Trypanosoma cruzi ) ou histológica ( Leishmanias sp ).

Citologia vaginal

No que diz respeito à citologia vaginal, esta técnica é especialmente vantajosa para a observação de Trichomonas vaginalis. Esse é um achado importante, pois sua presença simula quadros in situ de carcinoma que desaparecem mais tarde quando o parasita é eliminado.

Amostra de esperma

Tem sido uma ferramenta ideal para o estudo de amostras de espermatozóides, pois fornece informações valiosas sobre a qualidade dos espermatozóides.

Os dados que ele oferece têm a ver principalmente com número e morfologia, bem como com células concomitantes que podem estar presentes e que são de importância vital, como células germinativas, leucócitos e células epiteliais.

Com esta análise, é possível descrever as anormalidades observadas no espermatozóide da cabeça, pescoço, peça do meio e peça principal.

Além disso, eles também podem ajudar a mostrar casos de hemosspermia (presença de glóbulos vermelhos no sêmen) e leucospermia ou piospermia (aumento do número de leucócitos no sêmen).

Referências

  1. Costamagna S, Prado M. Validação de teste fresco, manchas de Grünwald-Giemsa e Gram e meios de cultura para o diagnóstico de Trichomonas vaginalis . Parasitol 2001; 25 (1-2): 60-64. Disponível em: scielo.
  2. Laboratório Merck KGaA. Pode Grünwald eosina azul metileno para microscopia.
  3. «Coloração de May-Grünwald-Giemsa.» Wikipedia, A enciclopédia livre . 15 Nov 2018, 14:37 UTC. 8 de janeiro de 2019 às 04:29: en.wikipedia.org
  4. Laboratório de Produtos Químicos do Panreac. Reagentes para técnicas histológicas, hematologia e microbiologia. Disponível em: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Recomendação para a coloração de esfregaços de sangue para leitura de hemograma. Laboratório Nacional de Biomédica e Referência. Instituto de Saúde Pública do Chile.
  6. Espermograma de Sarabia L. de acordo com os critérios da OMS. Programa de Anatomia e Biologia do Desenvolvimento. Faculdade de Medicina. Universidade do Chile. Disponível em: pp.centramerica.com

Deixe um comentário

Este site usa cookies para lhe proporcionar a melhor experiência de usuário. política de cookies, clique no link para obter mais informações.

ACEPTAR
Aviso de cookies