Óleo de imersão: composição, características, usos

O óleo de imersão é um líquido viscoso e transparente, possuindo um índice de refracção elevado. Por esse motivo, é amplamente utilizado em observações microscópicas, pois fornece a propriedade de concentrar a luz quando ela passa pelo objetivo de 100X do microscópio, aumentando seu poder de resolução.

Isso ocorre porque um filme viscoso é formado entre a lente e a mancha, impedindo a dispersão dos raios de luz ao atingir o ar, conseguindo concentrar os feixes de luz em direção à amostra.

Óleo de imersão: composição, características, usos 1

Conta-gotas com óleo de imersão e Microscópio focado com objetiva 100X usando óleo de imersão. Fonte: Pixabay.com

O óleo de imersão é usado apenas com o objetivo de 100X. É por isso que o objetivo 100X também é chamado de objetivo de imersão. O resto é conhecido como alvos secos. Este objetivo não pode ser utilizado sem o óleo de imersão, pois sem isso a exibição não seria satisfatória.

A principal função do óleo de imersão é fornecer imagens mais nítidas, mais nítidas e definidas, permitindo a observação de detalhes que com outros objetivos não seriam possíveis.

O primeiro óleo usado para esse fim foi o óleo de anis, usado em conjunto com a primeira lente de imersão criada por Giovanni Battista Amici. Isso apenas evitou a aberração cromática, mas não aumentou a abertura numérica do sistema de lentes.

Então, o óleo de cedro foi usado, mas apresentou muitas desvantagens que forçaram seu desuso. Entre eles, estava a alta acidez, que prejudicou os objetivos em curto prazo.

Posteriormente, outras substâncias, como água e glicerina, foram utilizadas até a criação de óleos de imersão sintéticos, que foram gradualmente aperfeiçoados até atingir o óleo de imersão atual, que é um composto complexo de substâncias orgânicas.

Composição do óleo de imersão

O óleo de imersão é constituído por uma mistura de compostos orgânicos, tais como: terfenil, terfenil hidrogenado, hidrocarbonetos naturais e polibutenos.

Características do óleo de imersão

óleo de imersão é um líquido de cor amarela clara, ligeiramente viscoso aparência, odor característico e densidade entre 0,92-0,99 g / cm 3 .

O óleo de imersão não é solúvel em água e tem um ponto de ebulição de 340 ° C. O índice de refração a (n 20 ° C / D): varia de 1.482 – 1.516. Enquanto isso, o índice de inflamação é de 110 ° C e a viscosidade varia de 100 a 120 mPa.s.

Este produto deve ser descartado adequadamente, pois é ecotóxico. Em outras palavras, é prejudicial ao meio ambiente, afetando principalmente animais aquáticos. Por outro lado, é irritante para a pele e as mucosas. Se ingerido, é nefrotóxico e cardiotóxico.

O óleo de imersão é estável de 15 a 25 ° C, a temperatura na qual deve ser armazenado.

Fundamentos do óleo de imersão

Ao usar alvos de maior ampliação, a intensidade da luz deve ser aumentada. No entanto, muitos dos feixes de luz são perdidos porque são dispersos quando atingem o ar (espaço entre a lamela e a lente), e até alguns raios sofrem uma reflexão total.

O óleo de imersão possui um índice de refração semelhante ao do vidro. Portanto, quando o óleo é contatado entre a lente 100X e a lamela, os feixes de luz são concentrados.

Os raios concentrados passam pela amostra e aumentam a nitidez da imagem, ou seja, aumentam a abertura numérica da lente e corrigem as aberrações cromáticas e esféricas.

Usos ou aplicativos

O uso de óleo de imersão é especialmente necessário quando é necessário observar uma imagem de maneira mais ampla, utilizando o objetivo de maior ampliação (objetiva 100X) e, assim, poder ver detalhes essenciais para estabelecer um diagnóstico.

Portanto, é amplamente utilizado em estudos microscópicos de diversas áreas, tais como: histologia, citologia, hematologia e bacteriologia. Por exemplo, é útil para estudar as características das células e tecidos de um paciente.

Serve também para a análise de esfregaços de sangue, onde você deseja detalhar características dos hemoparasitas dentro e fora dos eritrócitos, bem como nas preparações de Gram, para definir as características morfotetoriais dos microrganismos.

Geralmente é usado em preparações fixas, pois não é recomendado em preparações frescas. Isso ocorre porque a tensão superficial do óleo faz com que a lamela se mova, o que faz com que a amostra se mova durante sua observação e impede sua análise.

Por outro lado, o óleo de imersão não é útil apenas na microscopia óptica convencional: também é usado em microscópios de fluorescência de reflexão interna total (TIRFM) e em aplicações de fluorescência confocal.

Etapas para observar uma preparação usando óleo de imersão

Para ver uma preparação sob o microscópio, você deve primeiro se concentrar na preparação com o objetivo de aumentar a ampliação, geralmente 10X, com baixa intensidade de luz.

Em seguida, o objetivo de 40X é passado e o passo da luz é ligeiramente aumentado. Algumas análises podem ser realizadas com esse aumento, mas para ver detalhes estruturais, você precisa do aumento de 100X.

Antes de passar para a objetiva 100X, uma gota de óleo de imersão é colocada na lamela, exatamente onde você deseja observar e, em seguida, o revólver do microscópio é movido para localizar a objetiva 100x na preparação.

A intensidade da luz é regulada (aumentada) (movendo o condensador e abrindo o diafragma). Então, com pequenos movimentos que são dados ao parafuso do micrômetro (para frente ou para trás), ele deve estar perfeitamente focado se o microscópio usar lentes parafocais.

Se você tentar focar a preparação diretamente com o objetivo de imersão, pode haver problemas para encontrar o foco. Não é uma ação impossível, mas a dificuldade aumenta significativamente.

Cuidado

Para usar o óleo de imersão, certas condições devem ser levadas em consideração.

Quando uma preparação colorida é realizada, como um esfregaço manchado com Giemsa ou um Gram, deve-se esperar que o esfregue secar completamente antes de colocar o óleo de imersão. Caso contrário, o óleo e a água formarão micelas que não permitirão a visualização da preparação.

Por outro lado, depois de observar o lote de preparações, ou seja, no final do dia de trabalho, a objetiva 100X deve ser cuidadosamente limpa, usando um papel para lentes com etanol. Se a lente for deixada suja, o óleo secará e será muito difícil removê-la, danificando o campo de visão.

Além disso, lembre-se de que o óleo é inflamável e deve ser mantido longe de fontes de calor (isqueiros). É importante evitar aquecê-lo acima de 65 ° C.

Finalmente, o petróleo é um produto tóxico. Portanto, deve-se evitar o contato direto com a pele e as mucosas, onde pode ocorrer irritação leve. Para evitar acidentes, recomenda-se o uso de luvas e óculos de segurança.

Em caso de contato com o óleo, a área deve ser lavada com água em abundância. Se o óleo espirrar nos olhos, ele deve ser lavado da mesma maneira, mantendo os olhos abertos. Em caso de ingestão acidental, é importante beber água morna e provocar vômitos, além de procurar o médico mais próximo.

Referências

  1. «Microscópio de fluorescência de reflexão interna total.» Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 30 de dezembro de 2018 às 22:46 14 de maio de 2019, 01:54 <https://es.wikipedia.org/w
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  3. Biologia Ambiental e Microbiologia. Operação do microscópio óptico. Disponível em: eumed.net/books.
  4. Sánchez Lera Rita Maria, Oliva García Ninfa Rosa. História do microscópio e seu impacto na microbiologia. Rev Hum Med , 2015; 15 (2): 355-372. Disponível em: scielo.
  5. Herrero J. Practica Nº 1: Fundamentos e gerenciamento do microscópio óptico composto comum. Universitat d´Alacant Disponível em: rua.ua.es/dspace
  6. Scharlau – MSDS. Óleo de imersão, para microscopia. 2001. Disponível em: inputs-labcentral.

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