Os testes cruzados são uma técnica de pesquisa utilizada para avaliar a eficácia de um determinado tratamento ou intervenção. Esses testes são realizados comparando os resultados de dois ou mais grupos de indivíduos que recebem diferentes tratamentos ou intervenções. A fundação dos testes cruzados está na concepção de estudos controlados, onde a aleatorização dos participantes é essencial para garantir a validade dos resultados.
As fases dos testes cruzados geralmente incluem a seleção dos participantes, a randomização dos grupos, a administração dos tratamentos/intervenções, a coleta de dados e a análise estatística dos resultados. Essa técnica é amplamente utilizada em diversos campos, como medicina, psicologia, educação, entre outros, para avaliar a eficácia de novas abordagens terapêuticas ou educacionais.
Entenda a definição de teste cruzado e sua importância na pesquisa científica.
Testes cruzados são experimentos nos quais os participantes são expostos a diferentes condições ou tratamentos em momentos diferentes. Essa técnica é amplamente utilizada na pesquisa científica para comparar a eficácia de diferentes intervenções, medicamentos ou procedimentos.
Um teste cruzado é realizado dividindo os participantes em dois grupos, sendo que um grupo recebe o tratamento A primeiro e o tratamento B depois, enquanto o outro grupo recebe os tratamentos na ordem inversa. Isso permite que os pesquisadores controlem variáveis como idade, sexo e condições de saúde dos participantes, garantindo resultados mais precisos e confiáveis.
A fundação dos testes cruzados está na ideia de que cada participante serve como seu próprio controle, eliminando assim possíveis viéses causados por diferenças individuais. Isso torna os resultados mais robustos e generalizáveis, pois os efeitos de cada tratamento são comparados dentro do mesmo indivíduo.
Os testes cruzados geralmente passam por três fases: a fase de planejamento, na qual os pesquisadores definem as condições de teste e os critérios de avaliação; a fase de implementação, na qual os participantes são submetidos aos tratamentos de acordo com o protocolo estabelecido; e a fase de análise dos resultados, na qual os dados são coletados, analisados e interpretados.
Sua importância está em fornecer resultados mais confiáveis e precisos, contribuindo para o avanço do conhecimento científico em diversas áreas.
A importância da fase teste: por que ela é essencial para o desenvolvimento de produtos.
Os testes são uma etapa fundamental no desenvolvimento de produtos, pois garantem a qualidade e a eficácia do produto final. A fase de testes permite identificar possíveis falhas, bugs e problemas de funcionamento que podem comprometer a experiência do usuário. Além disso, os testes ajudam a validar se o produto atende aos requisitos e expectativas dos clientes.
Uma das técnicas de teste mais importantes é o teste cruzado, que consiste em testar o produto em diferentes ambientes, dispositivos e sistemas operacionais. Isso garante que o produto funcione corretamente em diversas situações e minimiza o risco de problemas de compatibilidade.
A fundação do teste cruzado é a diversidade de cenários de teste, que incluem diferentes combinações de dispositivos, sistemas operacionais e navegadores. Essa variedade de testes ajuda a identificar possíveis problemas de compatibilidade e garantir uma experiência consistente para todos os usuários.
As fases do teste cruzado incluem a preparação do ambiente de teste, a execução dos testes e a análise dos resultados. Durante a execução dos testes, é importante registrar e documentar todas as falhas encontradas para que possam ser corrigidas pela equipe de desenvolvimento.
Investir tempo e recursos na fase de testes é fundamental para o sucesso de um produto no mercado.
Testes cruzados: para que servem, técnica, fundação, fases
A reacção cruzada são um número de estudos laboratoriais são realizados para determinar se os produtos de sangue de um dador (principalmente sangue total e globular embalado) são compatíveis com o sangue do receptor.
Este é um teste complementar adicional à compatibilidade com o ABO e ao fator Rh. A razão do teste cruzado é que, às vezes, dois indivíduos (doador-receptor) podem ter o mesmo grupo ABO e Rh, mas ainda assim seu sangue é incompatível.
Essa incompatibilidade se deve à presença de anticorpos contra uma série de proteínas dos glóbulos vermelhos conhecidas como antígenos menores. Esses antígenos não são avaliados rotineiramente, como é feito com o grupo sanguíneo (ABO) e o fator Rh.
Isso ocorre porque os antígenos menores são muito menos frequentes e têm uma expressão variável em cada indivíduo; portanto, é praticamente impossível agrupá-los em categorias, como é feito com o grupo e o fator Rh.
Em vez disso, os glóbulos vermelhos do doador são misturados com o soro do paciente (teste de compatibilidade maior) e os glóbulos vermelhos do paciente com o soro do doador (teste de compatibilidade menor) para detectar a presença de reações antígeno-anticorpo.
Quando há anticorpos contra antígenos menores, no soro do paciente ou do doador, o teste é considerado positivo; portanto, na maioria dos casos, essa unidade específica de sangue não pode ser transfundida.
Grupo ABO
Para entender bem quais reações cruzadas são tratadas primeiro, é necessário conhecer o básico dos grupos sanguíneos.
Nesse sentido, o mais importante é saber que o sangue pode ser classificado em quatro grupos: A, B, AB e O.
Cada um desses grupos expressa na superfície dos glóbulos vermelhos uma proteína específica (antígeno), que é identificada como um elemento estranho pelos anticorpos de um potencial receptor de um grupo diferente.
O aspecto mais marcante das reações antígeno-anticorpo na compatibilidade sanguínea é que nenhuma exposição prévia ao antígeno é necessária para a existência de anticorpos. Isso é conhecido como anticorpos naturais.
Anticorpos naturais
Geralmente, para a existência de anticorpos no organismo de um indivíduo, é necessário que os glóbulos brancos do indivíduo tenham sido previamente expostos ao antígeno.
Isso significa que no primeiro contato entre o antígeno estranho e o organismo não há anticorpos, pois estes são gerados posteriormente, após o contato inicial.Portanto, é impossível para o sistema imunológico ter anticorpos contra, por exemplo, um vírus em particular, se não tiver sido exposto a ele no passado.
A única exceção ao acima é antígenos anti AB. Nesses casos, a pessoa possui anticorpos contra o antígeno que seus glóbulos vermelhos não possuem, mesmo quando nunca estiveram em contato com os glóbulos vermelhos de outra pessoa. Isso é conhecido como anticorpos naturais.
Antígenos e anticorpos relacionados ao grupo sanguíneo
Os grupos sanguíneos são determinados no caso do sistema ABO pela presença de antígenos específicos (A ou B) na membrana dos glóbulos vermelhos e, por outro lado, anticorpos contra o antígeno ausente na membrana eritrocitária.
Assim, uma pessoa com o grupo sanguíneo A expressa o antígeno A na superfície de seus glóbulos vermelhos, enquanto no soro existem anticorpos anti-B.
Pelo contrário, nos pacientes do grupo B, o antígeno B é encontrado enquanto os anticorpos são anti-A.
No entanto, pacientes com sangue AB têm antígenos A e B. Portanto, não há anticorpos, pois isso destruiria os glóbulos vermelhos dessa pessoa.
O oposto ocorre no grupo O, onde a membrana dos eritrócitos não possui antígeno (nem A nem B), enquanto no soro existem anticorpos anti-A e anti-B.
Incompatibilidade do grupo ABO
Pelo exposto, a compatibilidade dos grupos sanguíneos ABO pode ser facilmente deduzida, uma vez que conhecer o antígeno da membrana eritrocitária conhece automaticamente os anticorpos no soro. Assim pois:
– O sangue A é compatível com o grupo A e o grupo O.
– O grupo sanguíneo B é compatível com o sangue B e O.
– As pessoas do grupo O só podem receber sangue O (uma vez que possuem anticorpos anti-A e anti-B), embora o sangue seja recebido por todos os outros grupos sem problemas, pois não possui antígenos.
– finalmente aqueles que possuem o grupo sanguíneo AB podem receber sangue de todos os outros grupos (A, B, O e, claro, AB), pois não possuem anticorpos contra nenhum dos antígenos. No entanto, apenas pessoas do grupo AB podem receber sangue AB, uma vez que todos os outros grupos têm anticorpos que destruiriam esses glóbulos vermelhos.
Antígenos menores
Assim como nos grupos ABO, uma série de proteínas que funcionam como antígenos pode ser encontrada na superfície dos eritrócitos, como é o caso dos antígenos do grupo ABO.
No entanto, esses antígenos não ocorrem em todos os indivíduos. Sua combinação é heterogênea e a penetrância (nível de expressão da proteína) é variável, portanto, é impossível classificar em grupos como o existente para ABO e Rh. Daí deriva seu nome de “antígenos menores”, também conhecidos como “antígenos de baixa incidência”.
Embora não sejam frequentes, pode haver anticorpos naturais contra antígenos menores. Entre eles, os mais comuns são Lewis, MNSs, anti N, Kell, Duffy, anti Fyb e Kidd. Todos eles responsáveis por reações hemolíticas e pós-transfusão muito graves.
Além disso, pode haver um caso de sensibilização contra antígenos menores por contato prévio, seja com as referidas proteínas antigênicas devido a transfusões anteriores ou devido à imunidade cruzada.
Imunidade cruzada
Diz-se que a imunidade cruzada existe quando dois antígenos de duas fontes diferentes (por exemplo, glóbulos vermelhos e bactérias) são muito semelhantes, a ponto de os anticorpos contra uma dessas proteínas antigênicas também reagirem com a outra porque são quase idênticos. .
Para entender melhor, tome o exemplo hipotético anterior (antígenos de um glóbulo vermelho e uma bactéria). Em nenhum dos casos existem anticorpos naturais, mas se uma pessoa é exposta à bactéria, ela gera anticorpos contra ela.
Tais anticorpos reagirão mais tarde contra um glóbulo vermelho se seus antígenos forem muito semelhantes aos das bactérias que induziram a formação dos anticorpos.
Se isso ocorrer, os glóbulos vermelhos com essa proteína antigênica específica não poderão ser administrados à pessoa que possui os anticorpos, pois haveria rejeição. Aqui reside a importância das reações cruzadas.
Para que servem os testes cruzados?
Como é impossível caracterizar em grupos o sangue de diferentes indivíduos com base nos antígenos menores, a única maneira de saber se há anticorpos contra os antígenos menores dos glóbulos vermelhos de outra pessoa é através de testes cruzados. .
Nos casos em que os anticorpos estão presentes, é desencadeada uma reação de hemólise ou aglutinação, concluindo-se que a reação foi positiva; isto é, existem anticorpos contra antígenos menores (embora não se saiba exatamente qual). Caso contrário, o teste é negativo.
Fundação
Os testes cruzados são baseados na reação antígeno-anticorpo. Portanto, com eles é possível detectar se no soro de um receptor existem anticorpos contra os antígenos dos glóbulos vermelhos do doador (ou vice-versa), induzindo uma reação antígeno-anticorpo.
Se não houver anticorpos, nenhuma reação é dada e o teste é relatado como negativo. Pelo contrário, se a reação for positiva (há hemólise ou aglutinação durante o teste), pode-se concluir que os anticorpos estão presentes.
Nesse sentido, é importante observar que pode haver anticorpos contra os glóbulos vermelhos no soro do doador e do receptor. É por isso que existem dois tipos de reações cruzadas.
Tipos de reações cruzadas
É possível que existam anticorpos contra os eritrócitos do doador no soro do paciente; mas o oposto também pode ser o caso, ou seja, anticorpos no soro do doador contra os glóbulos vermelhos do paciente.
É por isso que existem dois tipos de testes cruzados:
– Grande teste cruzado.
– Teste cruzado menor.
Ambos os tipos são realizados rotineiramente no banco de sangue antes da transfusão de produtos sangüíneos, pois se um dos testes for positivo, há um alto risco de reações transfusionais que podem comprometer a vida do paciente.
Grande teste cruzado
Este teste avalia se há anticorpos contra os glóbulos vermelhos do doador no soro do receptor.
Se isso ocorrer, os produtos sanguíneos não poderão ser administrados, pois um grande número de anticorpos presentes no plasma do paciente destruirá os glóbulos vermelhos do doador muito rapidamente, gerando reações catastróficas no corpo do receptor no processo. Essas reações são tão graves que podem ameaçar sua vida.
Teste cruzado menor
Nesse caso, é determinado se há anticorpos contra os glóbulos vermelhos do receptor no soro do doador.
Nesse caso, os anticorpos começarão a destruir os eritrócitos do receptor. No entanto, como a quantidade de anticorpos é limitada, a reação é de menor intensidade; Embora ainda seja perigoso.
Fases
Os testes cruzados principais e secundários são divididos em três fases:
Salina.
– Térmica ou incubação.
– Coombs.
Na primeira fase, os glóbulos vermelhos e o soro são misturados em solução salina. Posteriormente, é adicionada albumina e a amostra é incubada a 37 ° C por 30 minutos para finalmente prosseguir com a fase de mistura.
Técnica
A técnica do teste cruzado é relativamente simples, pois envolve a adição de glóbulos vermelhos do doador ao soro do paciente (teste cruzado principal), bem como eritrócitos do receptor ao soro do doador (teste cruzado menor).
Para induzir a reação antígeno-anticorpo em um tempo relativamente curto, uma série de etapas padronizadas deve ser realizada. Essas etapas são resumidas de uma maneira simplificada abaixo.
É importante ter em mente que a seção a seguir descreve o principal teste de compatibilidade, embora as etapas sejam as mesmas para o teste de menor compatibilidade, mas trocando a origem dos glóbulos vermelhos e soro.
Fase salina
– Adicione 2 gotas de soro receptor (do doador, se for o teste cruzado menor) a um tubo de ensaio.
– Colha uma amostra de glóbulos vermelhos do doador (do receptor, se for o teste cruzado menor).
– Lave e centrifugue os glóbulos vermelhos.
– Ressuspender em uma solução entre 3% e 5%.
– Coloque uma gota desta solução no tubo que contém o soro do destinatário.
– Misture delicadamente.
Centrífuga.
– Leia o resultado na lâmpada do visor.
Fase Térmica
– Adicione 2 gotas de 22% de albumina ao tubo onde a fase salina foi concluída.
– Incubar a 37 ° C por 30 minutos.
– Centrifugue por 15 segundos.
– Leia o resultado na lâmpada do visor.
Fase de Coombs
– Pegue as células do tubo e lave-as com solução salina.
– Remova o sobrenadante.
– Adicione duas gotas de reagente de Coombs.
– Misture delicadamente.
– Centrifugue por 15 a 30 segundos.
– Ressuspenda as células e avalie na lâmpada do visor se há aglutinação ou hemólise.
Se em qualquer uma das fases houver aglutinação ou hemólise, o resultado será considerado positivo.
Referências
- Hall, TC, Pattenden, C., Hollobone, C., Pollard, C. e Dennison, AR (2013). Políticas de transfusão de sangue em cirurgia geral eletiva: como otimizar as taxas de correspondência cruzada para transfusão.Transfusion Medicine and Hemotherapy , 40 (1), 27-31.
- Silvergleid, AJ, Wells, RF, Hafleigh, EB, Korn, G., Kellner, JJ e Grumet, FC (1978). Teste de compatibilidade com 51 glóbulos vermelhos marcados com cromo em pacientes positivos com correspondência cruzada.Transfusion , 18 (1), 8-14.
- Kulkarni, N., Ali, M., Haray, PN, Joseph, A. e Masoud, A. (2006). Sistema eletrônico de correspondência cruzada. A correspondência cruzada pré-operatória de rotina de sangue para ressecções colorretais é necessária mais?Endoscopy , 38 (11), Poster_50.
- Heal, JM, Blumberg, N., & Masel, D. (1987). Uma avaliação do cruzamento, HLA e correspondência de ABO para transfusões de plaquetas em pacientes refratários.Sangue , 70 (1), 23-30.
- Arslan, Ö. (2006). Crossmatching eletrônicoTransfusion medicine reviews , 20 (1), 75-79.
- Wu, KK, Hoak, JC, Koepke, JA e Thompson, JS (1977). Seleção de doadores de plaquetas compatíveis: uma avaliação prospectiva de três técnicas de cruzamento.Transfusion , 17 (6), 638-643.
- Schonewille, H., Zijl, AMV e Wijermans, PW (2003). A importância dos anticorpos contra antígenos RBC de baixa incidência na comparação cruzada completa e abreviada.Transfusion , 43 (7), 939-944.