Agar Thayer Martin é um meio de cultura seletivo utilizado para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis. Foi desenvolvido por Thayer e Martin em 1964 e é uma variação do agar chocolate enriquecido com antibióticos para inibir o crescimento de bactérias indesejadas. Sua preparação envolve a adição de antibióticos como anfotericina B, colistina, ácido nalidíxico e vancomicina. Este meio é frequentemente utilizado em laboratórios de microbiologia para diagnóstico de infecções causadas por essas bactérias, devido à sua seletividade e eficácia no isolamento desses patógenos.
Finalidade do meio de cultura Agar Thayer Martin na microbiologia clínica.
O meio de cultura Agar Thayer Martin é amplamente utilizado na microbiologia clínica devido à sua capacidade de seletivamente isolar bactérias Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis. Este meio especializado foi desenvolvido por Thayer e Martin na década de 1960 para superar as limitações dos meios de cultura convencionais na detecção dessas bactérias patogênicas.
A finalidade principal do meio de cultura Agar Thayer Martin é fornecer um ambiente adequado para o crescimento seletivo dessas espécies de Neisseria, inibindo o crescimento de outras bactérias presentes na amostra clínica. Isso é possível devido à adição de antibióticos no meio, como vancomicina, colistina e anfotericina B, que atuam inibindo o crescimento de bactérias gram-positivas, gram-negativas e fungos, permitindo assim o crescimento das Neisserias.
Além disso, o meio de cultura Agar Thayer Martin contém fatores de crescimento e nutrientes específicos que favorecem o desenvolvimento saudável das Neisserias, permitindo sua fácil identificação e caracterização. O uso deste meio especializado é fundamental para o diagnóstico preciso e rápido de infecções causadas por Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis, contribuindo para o tratamento adequado dos pacientes.
Em resumo, o meio de cultura Agar Thayer Martin desempenha um papel crucial na microbiologia clínica, permitindo a detecção seletiva e o crescimento das bactérias Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis, facilitando o diagnóstico e tratamento de infecções causadas por esses patógenos.
Melhor meio de cultura para semeadura de Neisseria gonorrhoeae: qual escolher?
Neisseria gonorrhoeae é uma bactéria patogênica que causa a doença sexualmente transmissível conhecida como gonorreia. Para o crescimento e isolamento dessa bactéria em laboratório, é fundamental utilizar um meio de cultura adequado. O meio de cultura mais recomendado para a semeadura de Neisseria gonorrhoeae é o Agar Thayer Martin.
O Agar Thayer Martin é um meio seletivo e diferencial que foi desenvolvido especificamente para o cultivo de Neisseria gonorrhoeae e Neisseria meningitidis. Ele contém antibióticos que inibem o crescimento de bactérias indesejadas, permitindo que apenas as Neisserias cresçam. Além disso, o meio de cultura é enriquecido com fatores de crescimento que favorecem o desenvolvimento dessas bactérias.
Para preparar o Agar Thayer Martin, é necessário seguir um protocolo específico que envolve a adição dos antibióticos e dos fatores de crescimento na base do meio de cultura. Após a preparação, o meio é esterilizado e distribuído em placas de Petri para a semeadura das amostras clínicas.
O Agar Thayer Martin é amplamente utilizado em laboratórios de microbiologia clínica para o diagnóstico de infecções causadas por Neisseria gonorrhoeae. Ele permite o crescimento seletivo dessas bactérias, facilitando a identificação e o teste de sensibilidade aos antibióticos. Portanto, se você está procurando o melhor meio de cultura para semear Neisseria gonorrhoeae, escolha o Agar Thayer Martin.
Agar Thayer Martin: fundação, preparação e usos
O ágar Thayer Martin é um meio selectivo altamente nutritivo e sólido para o isolamento de Neisseria meningitidis e Neisseria gonorrhoeae; ambos conhecidos como Neisserias patogênicas ou clinicamente importantes.
Uma das características especiais mais importantes apresentadas pelo ágar Thayer Martin é o seu alto teor em suplementos nutricionais. Essa propriedade é indispensável, pois as Neisserias são microorganismos muito exigentes do ponto de vista nutricional e, portanto, não crescem em meios comuns.
Por outro lado, como esses microrganismos são normalmente encontrados em áreas não estéreis, é necessária a adição de inibidores que impedem o crescimento da flora associada, sem afetar o desenvolvimento do gênero Neisseria.
Este ágar é composto por ágar à base de GC, hemoglobina, suplementos nutricionais adicionais e um complexo de substâncias inibidoras (antibióticos e antifúngicos). Casas comerciais vendem cada um dos suplementos separadamente.
A amostra a ser semeada neste meio dependerá do microrganismo que está sendo procurado. Para Neisseria gonorrhoeae, as amostras ideais são secreções vaginais e uretrais. Enquanto para Neisseria meningitidis as amostras mais utilizadas são LCR, exsudatos faríngeo e nasofaríngeo.
Fundação
Neisseries são microrganismos classificados como irritantes e, portanto, seu isolamento é difícil. Portanto, o Thayer Martín é um meio complexo e cada um de seus componentes cumpre uma função explicada abaixo:
Ágar-base GC
O ágar GC contém proteína peptona, amido de milho, cloreto de sódio, fosfato dipotássico, fosfato monopotássico e ágar ágar. Seus componentes fornecem os nutrientes básicos para o desenvolvimento microbiano, neutralizam os ácidos graxos tóxicos, contribuem para manter o equilíbrio osmótico, definem o pH e proporcionam consistência sólida ao meio ambiente.
Hemoglobina
A hemoglobina fornece os fatores V e X (nicotinamida adenina dinucleotídeo NAD e hemina, respectivamente). Por esse motivo, as espécies de Haemophilus também crescem nesse ambiente. A hemoglobina pode ser obtida comercialmente na forma desidratada ou o sangue bovino fresco desfibrinado pode ser adicionado ao meio.
Suplemento enriquecedor
Por outro lado, um complemento de enriquecimento também deve ser adicionado ao meio Thayer-Martin, uma vez que os nutrientes contidos no ágar-base não são suficientes para os requisitos do gênero Neisseria.
O suplemento de enriquecimento mais usado é chamado isovitalex. Contém glutamina, adenina, NAD, cocarboxilase, guanina, nitrato férrico, ácido p-amino benzóico, vitamina B12, tiamina e glicose. Todos esses compostos são necessários para o desenvolvimento adequado de Neisseries patogênicos.
Inibidores
Por ser um meio altamente nutritivo, devem ser utilizados inibidores que impeçam o crescimento de microrganismos da flora usual da região e, assim, favoreçam o isolamento do gênero Neisseria.
O complexo inibidor é composto por vancomicina, colistina e nistatina. A vancomicina inibe o crescimento de bactérias Gram-positivas, a colistina impede o desenvolvimento de bactérias Gram-negativas, como Pseudomonas e algumas Neisserias saprófitas, e a nistatina atua em leveduras como Candida albicans.
No entanto, o ágar Thayer Martin foi modificado; as alterações consistiram na adição de trimetoprim, no aumento da quantidade de ágar e na adição de glicose extra. Essas mudanças melhoraram significativamente a recuperação de espécies de Neisseria gonorrhoeae .
Deve-se notar que o trimetoprim inibe o crescimento do gênero Proteus e sua consequente formação de enxames.Nesse sentido, antibióticos são os que fornecem o caráter seletivo ao médium Thayer Martin.
Preparação
Agar original de Thayer Martin
-Agar GC
Pesar 8,2 g do meio GC desidratado e suspender em 100 ml. Misture e deixe ferver por 1 minuto com agitação frequente para dissolver completamente. Esterilize a mistura em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
-2% de hemoglobina
Suspenda 2 g de hemoglobina desidratada em 2 ou 3 ml de água destilada quente para formar uma mistura uniforme. Adicione mais água pouco a pouco até que um volume de 100 ml esteja completo. A suspensão deve ser homogênea antes da esterilização.
Esterilize em autoclave por 15 minutos.
Suplemento-enriquecimento
Reconstitua o frasco comercial com o diluente fornecido pela mesma casa comercial. Misture bem. A quantidade de diluente a ser usada será especificada nas instruções do kit.
Suplemento de inibição de CNV (vancomicina, colistina, nistatina)
Reconstitua o frasco com o diluente fornecido pela casa comercial. Misture bem. A quantidade de diluente a ser usada será especificada nas instruções do kit.
-Preparado
Para cada 100 ml de ágar GC, proceda da seguinte forma:
Quando o ágar GC deixar a autoclave, deixe esfriar até uma temperatura aproximada de 50 ° C e adicione 2 ml da solução de hemoglobina preparada, 2 ml do suplemento de enriquecimento (isobitalex ou britalex) e 2 ml do suplemento de inibição. Misture e sirva em placas de Petri estéreis.
Deixe solidificar e guarde na geladeira até o uso.
A cor do meio preparado é vermelho cereja. O pH final do meio é 7,2 ± 0,2
Agar Thayer Martin modificado
Pesar 8,2 g do meio GC desidratado e suspender em 100 ml. Adicione 1 g de ágar-ágar e adicione 0,3 g de glicose. Misture e deixe ferver por 1 minuto com agitação frequente para dissolver completamente. Esterilize a mistura em autoclave a 121 ° C por 15 minutos.
Prepare hemoglobina e suplemento de enriquecimento como descrito acima.
O suplemento de inibição usado é o VCNT (vancomicina, colistina, nistatina, trimetoprim).
-Preparado
Prossiga da maneira descrita para o ágar Thayer Martin original.
Use
O ágar Thayer Martin deve ser temperado antes da semeadura das amostras. As amostras comumente usadas são exsudatos da faringe, exsudatos nasais, secreção vaginal, uretral e / ou retal e LCR.
Use amostras recém-colhidas e faça inóculos fortes no ágar. As amostras são semeadas diretamente por descarga de material e depois estriadas por depleção na superfície.
As placas são incubadas a 35-37 ° C durante 24 a 48 horas em ambiente microaerofilico frasco (5% CO 2 ). Após o período de incubação, as placas são examinadas em busca de pequenas colônias, cinza e às vezes com aparência de mucoide.
Realize Gram e testes bioquímicos confirmatórios para colônias suspeitas.
Controle de qualidade
As seguintes cepas microbianas podem ser usadas para realizar o controle de qualidade no ágar Thayer Martin.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 e Neisseria meningitidis ATCC 13090; Em ambas as linhagens, espera-se um desenvolvimento satisfatório.
As seguintes cepas também devem ser incluídas: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 e Candida albicans ATCC 10231. Em todas elas é esperada uma inibição total ou parcial neste meio.
Limitações
-Você deve ter em mente que as bactérias podem crescer no meio que são resistentes aos inibidores usados.
-Há cepas de Neisseria gonorrhoeae que podem ser sensíveis à concentração de vancomicina usada. Por esse motivo, recomenda-se o uso de agar de chocolate suplementado com isovitalex, mas sem inibidores.
-Há cepas de leveduras resistentes à nistatina que podem crescer nesse ambiente e interferir no isolamento de Neisseries patogênicos, especialmente gonococos.
Referências
- Laboratórios de diagnóstico Valtek. Agar Thayer-Martin, 2016 Disponível em: com
- Laboratórios britânicos. Thayer Martin Médio Modificado. 2010. Disponível em: britanialab.com
- Contribuidores da Wikipedia. Agar Thayer-Martin. Wikipedia, A Enciclopédia Livre. 26 de outubro de 2017 às 16:33 UTC. Disponível em: wikipedia.org4. Acessado em 28 de fevereiro de 2019.
- Laboratórios britânicos. Ágar GC. 2010. Disponível em: britanialab.com.
- Laboratórios BBL ™ Enriquecimento Médio para Microrganismos Excessivos. 1999. Disponível em: bd.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.