Agar BHI: fundação, preparação e usos

O BHI ágar ou infusão de cérebro e coração com ágar sólido é uma cultura nutritiva. Em espanhol, nos referimos a ele como um ágar-coração para infusão cerebral. É um meio de cultura não seletivo, o que significa que todos os tipos de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas podem se desenvolver, bem como alguns fungos filamentosos e leveduras.

É composto por infusão de cérebro e coração de vitela, hidrolisado péptico de tecidos animais, hidrolisado pancreático de caseína, cloreto de sódio, glicose, fosfato dissódico e ágar.

Agar BHI: fundação, preparação e usos 1

Placas BHI. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Cabe ressaltar que o ágar BHI é um dos meios de cultura mais freqüentes utilizados em laboratórios de bacteriologia. Pode ser utilizado sem suplementos como cultura primária, subcultura de colônias obtidas em outros meios seletivos ou para a manutenção de cepas em laboratório.

Por outro lado, é um meio ideal para ser usado como base na preparação de meios enriquecidos, como ágar-sangue e ágar – chocolate . Ambos são ideais para isolar microorganismos exigentes do ponto de vista nutricional. No entanto, deve-se ter em mente que, uma vez que contém glicose, não é adequado para observar padrões de hemólise.

Da mesma forma, o ágar BHI pode ser usado para a preparação de meios especiais para o isolamento de microrganismos patogênicos de difícil crescimento em meios comuns, incluindo: Haemophilus sp , Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae e Histoplasma capsulatum.

Com o aditivo antibiótico, o ágar BHI se torna um meio seletivo para o isolamento de fungos.

Fundação

É um meio de cultura nutritivo para isolar microorganismos moderadamente exigentes, podendo aumentar seu enriquecimento com a adição de sangue e outros suplementos nutricionais.

É um meio de cultura não seletivo, portanto, permite o crescimento da maioria das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, além de alguns fungos. No entanto, pode se tornar seletivo com a adição de antibióticos.

O meio contém infusão de cérebro e coração de vitela, hidrolisado péptico de tecidos animais e hidrolisado pancreático de caseína; Todos esses compostos atuam como fontes de vitaminas, aminoácidos, nitrogênio e carbono.

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A glicose é um carboidrato que fornece energia aos microorganismos depois que eles a fermentam. Enquanto isso, o cloreto de sódio e o fosfato dissódico mantêm o equilíbrio osmótico e fornecem um pH próximo da neutralidade. Finalmente, o ágar dá a consistência sólida ao meio.

Preparação

Pesar 52 gramas do meio desidratado e dissolver em um litro de água destilada. Leve a mistura a uma fonte de calor até ferver, mexendo sempre durante o processo de dissolução.

Calços ou placas de ágar BHI podem ser preparados sem aditivos.

Cunhas

Para preparar as fatias, prepare a preparação até encher metade de cada tubo, cubra e esterilize em uma autoclave a 121 ° C por 15 minutos, ao deitar em uma base até que solidifiquem. Guarde na geladeira até o uso.

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Cunhas BHI para bacteriotec. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Pratos

A mistura dissolvida é autoclavada a 121 ° C por 15 minutos, deixando-a esfriar até 50 ° C e 20 ml do meio são servidos em placas de Petri estéreis. Eles podem solidificar, inverter e guardar na geladeira até o uso. Deixe as placas atingirem a temperatura ambiente antes da semeadura.

O pH do meio deve ser 7,4 ± 0,2.

O meio despreparado é bege e preparado é âmbar claro.

Preparação de ágar-sangue

Após a esterilização do meio, esfrie a uma temperatura aproximada de 45 a 50 ° C, adicione sangue (50 ml), misture delicadamente para homogeneizar e sirva assepticamente 20 ml em cada placa de Petri. Se formar bolhas na placa, a chama mais clara deve passar rapidamente sobre as bolhas para eliminá-las.

Da mesma forma, meios especiais podem ser preparados adicionando os aditivos correspondentes quando a mistura atinge uma temperatura de 45 a 50 ° C.

O meio é vermelho cereja.

Usos

Use sem suplementos

O ágar BHI sem aditivos é útil como cultura primária e na semeadura de cepas puras de microrganismos que são pouco ou moderadamente exigentes para identificação posterior.

Por ser um meio de cor clara, é ideal para a observação de pigmentos e, além de não conter substâncias interferentes, alguns testes bioquímicos , como oxidase e catalase, podem ser realizados , ou outros testes bioquímicos podem ser montados a partir de colônias. ágar

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Da mesma forma, as cunhas de ágar BHI são amplamente utilizadas para a manutenção de cepas por um certo tempo em laboratório (bacterioteque).

As placas ou cunhas semeadas pela superfície com cepas bacterianas são incubadas a 37 ° C por 24 a 48 horas. Enquanto que, nos fungos, a temperatura e o tempo de incubação dependerão do tipo de fungo que é procurado.

Como ágar-base para a preparação de outros meios

Com essa base, meios ricos e seletivos podem ser preparados.

Enriquecido

Sua principal função é servir de base na preparação de agar sanguíneo de rotina em laboratórios de microbiologia. Especialmente, a base de IHB é propícia ao isolamento de cepas de Streptococcus sp. No entanto, tem a desvantagem de não ser adequado para a observação dos padrões de hemólise, pois contém glicose.

Também é utilizado na preparação de ágar de sangue de coelho ou cavalo para o isolamento de Haemophilus sp . Para melhores resultados, um suplemento de enriquecimento (IsoVitaleX) pode ser adicionado.

Se as amostras vierem do trato respiratório para o ágar, pode-se adicionar bacitracina para inibir a flora associada e aumentar a probabilidade de recuperação do Haemophilus sp .

Por outro lado, o ágar-sangue (cordeiro ou humano) pode ser preparado com telurito de cistina para isolar Corynebacterium diphtheriae.Também é útil na preparação de agar de sangue de coelho, com a adição de cistina e glicose para o isolamento de Francisella tularensis.

Sementeira de placas de agar de sangue é realizada por esgotamento e incubou-se a 35-37 ° C durante 24-48 horas sob microaerofílica (5-10% de CO 2 ).

Seletiva

Este meio com a adição de antibióticos pode substituir o ágar Sabouraud pelo isolamento de fungos.

A combinação de ágar BHI com cloranfenicol – gentamicina ou penicilina -, estreptomicina e sangue de cavalo é ideal para o isolamento de Histoplasma capsulatum .

Dependendo do microrganismo a ser isolado, recomenda-se a incubação a 35-37 ° C ou à temperatura ambiente em aerobiose. Às vezes, é necessária a incubação em ambas as faixas de temperatura, usando 2 placas para isso.

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Alguns cogumelos, como Trichophyton mentagrophytes, devem ser incubados em temperatura ambiente por até 7 dias.

Controle de qualidade

De cada lote preparado, recomenda-se incubar 1 placa ou cunha a 37 ° C por 24 horas e verificar se não há crescimento; É especialmente importante ao preparar o ágar-sangue, porque é um meio facilmente contaminável.

Por outro lado, a qualidade do meio pode ser avaliada inoculando cepas padrão conhecidas ou certificadas e observando seu desenvolvimento.

Nesse sentido, para avaliar o ágar BHI sem aditivos, podem ser utilizadas as cepas de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ou Candida albicans ATCC 10231, incubadas a 37 ° C em aerobiose por 24 a 48 horas. Em todos os casos, é esperado um crescimento satisfatório.

Para avaliar placas de ágar-sangue, podem ser semeadas estirpes de Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ou Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

As cepas bacterianas são incubadas a 37 ° C em microaerofilia por 24 horas, enquanto o fungo é incubado à temperatura ambiente em uma câmara úmida por até 7 dias. Em todos os casos, é esperado um crescimento satisfatório.

Referências

  1. Laboratórios britânicos. Agar de coração de infusão cerebral. 2015. Disponível em: britanialab.com.
  2. Laboratórios BD Agar de infusão de coração cerebral (BHI). 2013. Disponível em: bd.com.
  3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Agar de infusão de coração cerebral. 2009
  4. Laboratório de Neogênio Agar de infusão de coração cerebral. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Agar de sangue: fundação, usos e preparação. 2018. Disponível em: lifeder.com.
  6. Contribuidores da Wikipedia. Infusão de coração cerebral Wikipedia, A Enciclopédia Livre. 19 de setembro de 2018, 03:58 UTC. Disponível em: wikipedia.org. Acessado em 2 de março de 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

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