Ágar biliar de Sculin: fundação, preparação e usos

O agar de bílis esculina é uma cultura sólida meio selectivo e diferencial. É usado como um teste de diagnóstico para determinar a capacidade de um microrganismo específico crescer em um meio que contém bile e também decompor o glicósido esculino em esculetina e glicose.

Este teste de diagnóstico é usado para diferenciar espécies do gênero Streptococcus pertencentes ao grupo D (biliar sculptin positivo), de outros grupos de Streptococcus que reagem negativamente a esse teste.

Ágar biliar de Sculin: fundação, preparação e usos 1

Placa de ágar biliar de Sculin, semeada com uma cepa de Enterococcus (teste positivo). Fonte: Nenhum autor legível por máquina é fornecido. Philippinjl assumiu (com base em reivindicações de direitos autorais). [Domínio público]

Deve-se notar que alguns estreptococos do grupo viridans podem hidrolisar a escultura, mas não são capazes de crescer na presença de bílis na concentração de 40%, portanto, nesse meio, a reação para esse grupo é negativa.

Por outro lado, o meio biliar esculin também é útil para o diagnóstico de espécies de Listeria monocytogenes ou Aerococcus sp , uma vez que esses microrganismos são biliares esculpidos positivos.

O ágar biliar Sculin é composto de peptona, extrato de carne, bile de boi, esculpir, citrato de ferro, ágar e água destilada. Algumas casas comerciais incluem azida de sódio na composição do meio.

O meio pode ser preparado em laboratório se você tiver todos os compostos separadamente ou pode ser preparado a partir do meio comercial desidratado.

Fundação

O meio de bile sculptin contém peptonas e extrato de carne, ambos os compostos fornecem os nutrientes necessários para o crescimento de microrganismos.

Ele também contém esculpir; Este composto é um glicosídeo formado pela união de um monossacarídeo simples (glicose) com um composto chamado 6,7-di-hidroxicumarina ou esculetina (aglucona), unido por uma ligação acetal ou glicosídica.

O teste baseia-se em demonstrar se a bactéria é capaz de hidrolisar a escultura. Se isso ocorrer, a escultura se decompõe em esculetina e glicose. A esculetina reage com o ferro presente no meio, formando um composto marrom escuro, quase preto.

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Isso significa que o citrato férrico atua como um desenvolvedor de reação. Esta característica faz do ágar biliar esculin um meio diferencial.

Por seu lado, a bile é um inibidor que impede o crescimento de alguns microrganismos; portanto, as bactérias antes de desdobrar a escultura devem poder crescer na presença de bile. Portanto, este meio é considerado seletivo.

As bactérias que podem se desenvolver nesse ambiente são principalmente as que vivem no ambiente intestinal.

Nesse sentido, algumas casas comerciais são adicionadas ao meio de azida de sódio para inibir ainda mais o crescimento de bacilos Gram-negativos entéricos, aumentando a seletividade do meio para o crescimento de estreptococos.

Finalmente, o ágar dá ao meio uma consistência sólida e a água é o solvente dos compostos.

Preparação

Preparação de agar ágar biliar caseiro

Pesar:

5 g de peptonas

3 g de extrato de carne

40 g de bile de boi

1 g de esculpir

0,5 gr de citrato de ferro

Ágar de 15 g

1000 ml de água destilada

Se for adicionada azida de sódio, pesam-se 0,25 g / litro e adicionam-se à mistura.

Dissolva os componentes no litro de água destilada, aqueça até que os compostos estejam completamente dissolvidos. Distribua 5 ml em tubos de ensaio com tampa de rosca de 16 x 125 mm. Autoclave a 121 ° C, a 15 libras de pressão por 15 minutos.

Retire da autoclave e incline os tubos em um suporte, para que solidifique o ágar em um amplo pico de flauta.

Guarde na geladeira até o uso. Leve à temperatura ambiente antes da semeadura.

Você também pode preparar pratos de escultura em ágar biliar; Nesse caso, toda a mistura é autoclavada em uma fiola e subsequentemente distribuída em placas de Petri estéreis. Eles são autorizados a solidificar e armazenados em uma geladeira.

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O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2.

Preparação de ágar esculin-biliar a partir de um meio comercial

Pese a quantidade especificada pela inserção. Isso pode variar de uma casa comercial para outra. Posteriormente, proceda da mesma forma que o procedimento explicado acima.

O pH do meio deve ser 6,6 ± 0,2. A cor do meio desidratado é bege claro e o meio preparado é âmbar escuro.

Ágar biliar de Sculin: fundação, preparação e usos 2

Sculin comercial da meia bilis. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil.

Usos

O meio de bile sculptin é usado principalmente para diferenciar Streptococcus do Grupo D (biliar sculptin positivo), do restante dos grupos Streptococcus (bile sculptin negativo).

Se o teste de crescimento no caldo hipersalato for combinado com o teste da esculina biliar, um Streptococcus do grupo D do grupo especial chamado Enterococcus pode ser identificado.

Este grupo especial de Streptococcus pertence ao grupo D do gênero mencionado e é capaz de hidrolisar a escultura na presença de bílis, assim como o restante dos membros do grupo D, mas também é capaz de se desenvolver em meio hipersalatado (BHI com cloreto de 6,5% de sódio), propriedade que faz a diferença.

Portanto, o estreptococo que hidrolisa a bile da esculina, mas não cresce no caldo hipersalato, é chamado de estreptococo do grupo D não enterocócico.

Semeado

Inocule o meio de preferência a partir de um caldo puro de 24 horas da Todd-Hewitt.

Adicione 2 gotas na superfície do meio com uma pipeta Pasteur e espalhe no meio com uma alça de platina.

Incubar a 35 ° C por 48 horas, enquanto o tempo de incubação estiver sendo cumprido, ele pode ser monitorado para verificar se há uma reação positiva. Se no final do tempo a reação permanecer negativa, ela poderá ser incubada até 72 horas.

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Interpretação

Reação positiva : aparecimento de uma cor marrom escura, quase preta no pico da flauta (no caso do teste de tubo) ou escurecimento do ágar ao redor das colônias (no caso do teste de placa).

Reação negativa : o escurecimento do meio não ocorre ou ocorre o aparecimento da cor preta em menos da metade do tubo após 72 horas de incubação. Por outro lado, o crescimento bacteriano no meio sem a aparência da cor preta deve ser considerado um teste negativo.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do meio, uma cepa de Enterococcus faecalis ATCC 29212 deve estar disponível como controle positivo e uma cepa de Streptocococus não pertencente ao grupo D como controle negativo.

Limitações

-Meios que não contêm azida de sódio permitem o crescimento de bacilos Gram-negativos entéricos. Alguns deles podem escurecer o meio.

– Algumas casas comerciais adicionam baixa concentração de bile (10%) e, por esse motivo, alguns estreptococos que não pertencem ao grupo D podem se desenvolver no meio e hidrolisar a escultura, o que pode levar a erros de interpretação.

Referências

  1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico 5a ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
  3. Mac Faddin J. (2003). Testes bioquímicos para a identificação de bactérias de importância clínica. 3rd ed. Editora Panamericana. Bons ares. Argentina
  4. Lab. Grã-Bretanha. Bile de Sculin com ágar azida. 2015. Disponível em: britanialab.com
  5. «Sculin bile agar.» Wikipedia, a enciclopédia livre . 22 de agosto de 2017 às 17:30 UTC. 22 de abr de 2019 às 17:35 en.wikipedia.org.
  6. Bd Laboratories Bile Esculin Agar Slants. 2015. Disponível em: bd.com
  7. Laboratórios Neogen Sculin ágar biliar. Disponível em: foodsafety.neogen.com

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