Ágar cetrimida: fundação, preparação, usos

O ágar cetrimida ou cetrimida é um meio de cultura sólido selectivo concebido para o isolamento de Pseudomonas aeruginosa. Ele é baseado na demonstração da produção de pigmentos característicos dessa espécie e foi feito a partir da modificação do agar Tech, criado por King, Ward e Raney.

A fórmula original continha sais de cloreto de magnésio, sulfato de potássio, digestão pancreática de gelatina e ágar-ágar. A modificação da fórmula consistiu na adição de cetrimida (brometo de cetil trimetil amônio) e glicerol.

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Agar de cetrimida semeado com Pseudomonas aeruginosa Fonte: BiotechMichael [Domínio público], de Wikimedia Commons

O ágar cetrimida é útil no estudo microbiológico de amostras em que se suspeita da presença de Pseudomonas aeruginosa .Deve-se notar que essa bactéria é de extrema importância, porque, embora faça parte da microbiota ambiental normal, ela geralmente se comporta como um patógeno oportunista.

Portanto, um dos problemas mais comuns causados ​​por esse germe são as infecções hospitalares, ou seja, aquelas que ocorrem no ambiente hospitalar, atacando pacientes com um sistema imunológico deprimido.

Por outro lado, devido à afinidade deste microrganismo com a umidade, os alvos de contaminação mais vulneráveis ​​são: equipamento respiratório assistido, medicamentos, nebulizadores, fontes de água, condicionadores de ar, desinfetantes, soluções com sabão, soluções injetáveis, feridas abertas , cateteres, tubos urinários, entre outros.

Nesse sentido, o ágar cetrimida é útil para a realização de controles microbiológicos e culturas para os elementos previamente nomeados.

Fundação

O ágar cetrimida baseia-se na capacidade do meio de favorecer o crescimento de P. aeruginosa , estimular a produção de seus pigmentos e, por sua vez, inibir o crescimento de outros microorganismos.

Essas propriedades são devidas à função que cada um de seus componentes cumpre. A peptona de gelatina presente serve como fonte de nitrogênio, vitaminas e minerais. Glicerol ou glicerina funciona como uma fonte de carbono.

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Por seu lado, a cetrimida (brometo de cetil trimetil amônio) é a substância que inibe o crescimento de outras bactérias além de P. aeruginosa , incluindo outras espécies pertencentes ao mesmo gênero.

A inibição ocorre porque a cetramida atua como detergente catiônico, conseguindo desestabilizar a membrana plasmática da maioria das bactérias, com exceção de P. aeruginosa e algumas outras que conseguem sobreviver.

Por outro lado, contém cloreto de magnésio e sulfato de potássio. Esses compostos estimulam a expressão fenotípica relacionada à capacidade de Pseudomonas aeruginosa de produzir vários pigmentos, entre eles: pyocyanin, pioverdine, piorubin, pyomelanin e fluorescein. Finalmente, contém ágar-ágar, o que lhe confere a consistência sólida.

Interpretação

A interpretação do crescimento obtido neste ágar é realizada da seguinte forma:

A observação de colônias redondas, lisas e de bordas regulares, com produção de pigmentos azul esverdeado, verde, marrom ou avermelhado, mais a emissão de odor frutado (aminoacetofenona), é um resultado presuntivo da presença dessa bactéria na referida amostra.

Por outro lado, é indicativo de P. aeruginosa a observação de um pigmento verde-amarelo brilhante nas colônias quando a placa é exposta à luz ultravioleta.

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Fluorescência de colônias de P. aeruginosa em ágar cetrimida sob luz ultravioleta.

Note-se que cada cor observada se deve à produção de um pigmento específico. O pigmento azul esverdeado corresponde à produção de piocianina, verde a poverdina, avermelhada a piorubina, marrom a pomelanina e fluorescência verde-amarela brilhante sob luz ultravioleta a fluoresceína.

Preparação

Pesar 43 g do meio desidratado e dissolver em água destilada. Adicione 10 ml de glicerol. Traga a mistura para uma fonte de calor. Ferva por alguns minutos até a dissolução completa.

Autoclave a 121 ° C por 15 minutos. Deixe repousar e sirva em placas de Petri estéreis quando a temperatura for de aproximadamente 50 ° C.

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Deixe solidificar, inverter, pedir as plaquetas e guardar na geladeira até o uso. Para semear as placas de ágar cetrimida, elas devem ser removidas da geladeira com antecedência e deixar a temperatura ambiente.

O pH final do meio deve ser 7,2 ± 0,2.

A cor do meio desidratado é bege e a preparação é branca opaca.

Usos

O ágar cetrimida pode ser semeado em todos os tipos de amostras nas quais se suspeita da presença de Pseudomonas aeruginosa. Portanto, é útil em todas as áreas da microbiologia (ambiental, industrial, clínica, água e alimentos).

É de grande importância analisar o ambiente hospitalar e, assim, poder aplicar medidas corretivas, uma vez que esse microrganismo chega ao paciente através de equipamentos, medicamentos, soluções e suprimentos contaminados utilizados pelo paciente.

Dessa forma, o microorganismo pode infectar o trato respiratório inferior, o trato urinário e as feridas de pacientes imunossuprimidos.

A contagem de colônias de P. aeruginosa também pode ser realizada em testes de limite microbiano.

Semeado

O ágar cetrimida pode ser usado como uma cultura primária. A placa é inoculada em uma de suas bordas e a partir daí é distribuída por exaustão no restante da placa. As amostras líquidas podem ser semeadas na superfície com uma espátula drigalski.

As placas são incubadas em aerobiose a 37 ° C por 24 horas de incubação.

Limitações

-Uma pequena porcentagem de cepas de Pseudomonas aeruginosas não produzem piocianina; portanto, um falso negativo pode ser interpretado.

-Algumas espécies de Pseudomonas de importância clínica são inibidas neste ambiente.

Apesar de observar as características descritas para Pseudomonas aeruginosa , elas devem ser corroboradas com testes de identificação adicionais. Um teste que não deve faltar é o teste da oxidase, deve ser positivo.

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-Algumas enterobactérias podem crescer neste meio e desenvolver um pigmento amarelo, mas difere de Pseudomonas aeruginosa , pois quando a placa é submetida à luz ultravioleta, não há fluorescência.

Serratia marcescens desenvolve e produz um pigmento rosa.

-Se as placas revestidas de ágar cetrimida são expostas por um tempo à temperatura ambiente, as cepas de P. aeruginosa podem perder a fluorescência observada sob luz ultravioleta; no entanto, a propriedade é recuperada se for incubada novamente a 37 ° C.

Controle de qualidade

Para controlar o bom funcionamento do ágar cetrimida, podem ser utilizadas cepas de controle, como: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 e Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Os resultados esperados são:

  • Para P. aeruginosa bom crescimento, com pigmento azul esverdeado e fluoresceína positiva.
  • S. maltophilia e S. aureus serão parcial ou completamente inibidos.
  • Espera- se que Escherichia coli seja completamente inibida.

Referências

  1. Callicó A, Cedré B, Siphon S, Torres V, Pinheiro Y, Callís A, Esnard S. Caracterização fenotípica e sorológica de isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratórios Conda Pronadisa. Base de ágar cetrimida. 2014. Disponível em: condalab.com
  3. Laboratórios britânicos. Ágar cetrimida. 2015. Disponível em: britanialab.com
  4. Laboratórios BD Agar BD Pseudosel (ágar cetrimida). 2013. Disponível em: bd.com
  5. Laboratório Francisco Soria Melguizo, ágar CA Cetrimide. 2009. Disponível em: http://f-soria.es

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