Agar de chocolate: fundação, usos e preparação

O ágar de chocolate é um meio de cultura sólido, enriquecido, não – selectivo e não – diferencial. É utilizado principalmente para o isolamento de microrganismos exigentes do ponto de vista nutricional, embora nele possa crescer qualquer tipo de bactéria .

É por isso que sua utilidade aumenta especialmente na semeadura de amostras normalmente estéreis, como LCR e líquido articular. Embora também esteja incluído nos meios escolhidos para o plantio de amostras polimicrobianas, mas nesses casos é necessário adicionar antibióticos que inibam a flora concomitante.

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Agar de chocolate com crescimento bacteriano

Este meio possui uma cor marrom característica muito semelhante ao chocolate, daí seu nome.A preparação é muito semelhante à do ágar-sangue , somente neste caso o sangue deve ser aquecido para que os glóbulos vermelhos se rompam.

Sua preparação, como o ágar-sangue, é muito delicada, pois é facilmente contaminável. Portanto, muitos laboratórios preferem adquirir esse meio já preparado por casas comerciais que garantem sua qualidade.

Fundação

Este meio é composto por uma base de ágar rica em nutrientes e sangue aquecido. A hemólise dos glóbulos vermelhos fornece ao meio fator X (hemina) e fator V (NAD), necessários para o crescimento de alguns microrganismos, como o gênero Haemophilus .Também é muito útil para o isolamento de Neisserias sp.

Como o ágar-sangue, diferentes meios podem ser usados ​​como ágar-base, dependendo da necessidade. Entre os meios utilizados estão a infusão cerebral do coração e o ágar tripticase de soja, embora os mais recomendados sejam o ágar Columbia, o Müeller Hinton, o ágar GC e o ágar Thayer Martin.

Algumas variantes do agar de chocolate incluem um suplemento fortificado disponível comercialmente chamado Isovitalex ou Polivitex.

Esses suplementos contêm vitamina B 12 , L-glutamina, adenina, cloridrato de guanina, ácido p-aminobenzóico, nicotinamida adenina dinucleotídeo (NAD), pirofosfato de tiamina, nitrato férrico, cloridrato de tiamina, cloridrato de cisteína, L-cistina e glicose.

É importante notar que o ágar-chocolate é mais enriquecido que o ágar-sangue, mas não permite a observação dos padrões de hemólise.

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Usos

Agar de chocolate: fundação, usos e preparação 2

Fonte: pixnio.com Autor:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Agar de chocolate preparado com ágar Columbia

Este meio contém caseína pancreática e digerida pelo coração, carne digerida péptica, cloreto de sódio, ágar, extrato de levedura e amido de milho. Também é rico em vitaminas, minerais e aminoácidos essenciais.

Esta base com sangue aquecido é ideal para o isolamento de bactérias do gênero Neisseria.Por outro lado, se um suplemento de Brucella for adicionado ao meio, ele poderá ser isolado do referido microorganismo. Os resultados são melhorados usando sangue de cavalo.

Agar de chocolate preparado com agar à base de GC (para gonococos)

Este meio contém peptonas, amido de milho, tampões monobásicos e dibásicos, cloreto de sódio e ágar.

A maioria das apresentações de agar de chocolate preparadas comercialmente vêm com essa base e não contêm sangue aquecido, mas uma mistura sintética de hemina e um complemento químico de fatores de crescimento, vitaminas, minerais, aminoácidos, fator V e glicose.

Agar de chocolate preparado com ágar Müeller Hinton

É usado para realizar o teste de suscetibilidade antimicrobiana de microrganismos exigentes, como Streptococcus pneumoniae, utilizando sangue de ovelha aquecido a 5%.

Serve também para o isolamento primário de Neisserias e Haemophilus, mas no caso particular do isolamento de Haemophilus , o uso de sangue de cavalo é preferido, pois é uma fonte rica em fator X e V.

Por outro lado, se a amostra a ser semeada vier de uma área não esterilizada, é aconselhável adicionar antibióticos para inibir a flora normal da área.

Exemplo para amostras respiratórias em que se suspeita da presença de bactérias do gênero Haemophilus , a bacitracina é utilizada para inibir o crescimento de Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus e Neisserias saprophytes.

No caso de amostras de porcos genitais, nas quais há suspeita de Haemophilus ducreyi, foi utilizado com sucesso um ágar de chocolate preparado da seguinte maneira: ágar Müeller – Hinton com 5% de sangue de cavalo chocolatizado, 1% de enriquecimento de Isovitalex e 3 µg / ml de vancomicina

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Agar de chocolate preparado com agar de Thayer Martin

Este meio é especial para o isolamento de Neisseria gonorrhoeae . Ele deve conter antibióticos para inibir a flora associada. Sangue de cordeiro é usado.

Preparação

As instruções de preparação do ágar-base a ser utilizado devem ser observadas. Eles são encontrados na parte de trás do recipiente do meio desidratado. Eles geralmente descrevem quanto deve ser pesado para preparar um litro de meio de cultura.

No laboratório, você pode preparar a quantidade exata necessária, pode ser mais ou menos que um litro.

Cálculos

Uma regra de três é feita para calcular quanto deve ser pesado para preparar o volume desejado.Exemplo:

Se para 1 litro for necessário pesar 40 gr e o laboratório exigir 800 ml, diz:

1000 ml —-————————

800 ml ——————————— X

A fórmula será a seguinte:

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X = 32 g (quantidade de pesagem para 800 ml).

Pesar e dissolver

A quantidade necessária é pesada e colocada num frasco com água.

É aquecido em fogo moderado e gentilmente misturado com movimentos rotativos até que o meio desidratado esteja completamente dissolvido, fervendo por 1 minuto.

Esterilizar

A fiola é introduzida na autoclave para esterilizar o meio a 121 ° C por 20 minutos.

Agregado de sangue

Ao sair da autoclave, é permitido repousar até que a temperatura do meio esteja aproximadamente entre 56 a 70 ° C para colocar o sangue e misturar até que o meio fique marrom.

Se for necessário adicionar suplementos, é hora de fazê-lo. Em seguida, misture e sirva 20 ml para cada placa de Petri estéril.

Todo o procedimento deve ser realizado em uma capela de fluxo laminar ou ao redor do queimador de Bunsen.

Deixe repousar até solidificar e guardar invertido na geladeira.

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Outra maneira de preparar o ágar-chocolate sem usar sangue

O meio base é preparado como descrito acima, a hemoglobina desidratada obtida comercialmente é dissolvida e esterilizada na autoclave.

Ambas as soluções são deixadas esfriar a 50 ° C, ligam e o suplemento é adicionado. Misture em condições assépticas e depois sirva em placas de Petri estéreis.

Controle de qualidade

É importante que o sangue seja colocado na temperatura indicada, pois é ideal para lisar os glóbulos vermelhos e, ao mesmo tempo, manter o fator V sensível ao calor.

Nenhuma bolha deve permanecer na superfície do ágar. De cada lote de 100 placas, uma ou duas placas devem ser incubadas no forno a 37 ° C por 24 horas para verificar sua esterilidade.

Para melhores resultados, o ágar-chocolate deve ser usado logo após a sua preparação.

As cepas bacterianas de controle devem ser mantidas em laboratório para avaliar a eficácia do meio recém-preparado para o crescimento dos principais microorganismos exigentes e de importância clínica.

Referências

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clínica prática. Universidade de Cádiz, 2ª edição. Serviço de Publicações da UCA.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Viabilidade do uso do meio de cultura básico GC-Biocen Agar no Laboratório de Microbiologia. Rev Cubano Med Trop , 2004; 56 (3): 237-238. Disponível em: scielo.sld.
  5. Contribuidores da Wikipedia. Ágar de chocolate Wikipedia, A Enciclopédia Livre. 17 de dezembro de 2018, 19:54 UTC. Disponível em: en.wikipedia.org.

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