Ágar endo: fundação, preparação e uso

A Endo agar médio ou Endo é um meio sólido, diferencial e com um certo grau de selectividade. A fórmula original foi criada por Endo em 1904 para diferenciar a lactose das bactérias lactose não fermentativas.Inicialmente, foi projetado para o isolamento de Salmonella typhi , mas posteriormente o objetivo do meio voltou-se para a busca de coliformes.

O princípio do agar Endo foi mantido, mas sua formulação sofreu inúmeras alterações ao longo dos anos. Atualmente, o meio é composto de tecido animal digerido péptico, lactose, fosfato de hidrogênio dipotássico, sulfito de sódio, fucsina básica e ágar.

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A: Agar Endo virgem B: Agar Endo semeado, no meio do agar pode ser observado o brilho metálico de uma cepa de E. coli. Fonte: A: Strolch1983 [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/)[/B: LenkaM [CC BY-SA 1.0 (https://creativecommons.org/licenses) /by-sa/1.0)]

O principal uso do meio tem sido associado ao isolamento e diferenciação de bacilos Gram-negativos pertencentes à família Enterobacteriaceae e outras famílias próximas.

Durante muito tempo, foi utilizado na detecção de coliformes em amostras de água, laticínios e alimentos, mas hoje o uso desse meio foi substituído por outros de funções semelhantes. No entanto, alguns laboratórios de microbiologia usam esse ágar para o isolamento de enterobactérias de amostras de origem clínica.

Fundação

O ágar endo contém peptonas que servem como fonte de aminoácidos, nitrogênio, carbono e energia, necessários para o crescimento de microorganismos pouco exigentes.

Por outro lado, o caráter levemente seletivo do ágar é fornecido pela adição de sulfito de sódio e fucsina básica; ambos os componentes inibem parcial ou totalmente o desenvolvimento da maioria das bactérias Gram-positivas.

O caráter diferencial é dado pela presença do carboidrato fermentável, que neste caso é a lactose e a fucsina básica, que também serve como indicador de pH.

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As bactérias gram-negativas que crescem neste ágar e são capazes de fermentar a lactose formarão fortes colônias rosadas; sendo patognomônico de Escherichia coli, a formação de colônias vermelhas escuras com um brilho metálico iridescente esverdeado. Isto é devido à alta produção de ácidos da fermentação de carboidratos.

Note-se que o meio em torno das colônias também fica com uma cor rosa forte. Enquanto os bacilos Gram-negativos de lactose não fermentativos formam colônias de cor rosa pálido semelhantes a médias ou incolores.

O hidrogenofosfato dipotássico equilibra o pH do meio e o ágar é o componente que fornece a consistência sólida.

Preparação

Endo agar

Pesar 41,5 g do meio desidratado e dissolver em 1 litro de água destilada . Aqueça a mistura, mexendo sempre, até a dissolução total do meio. Esterilize em autoclave a 121 ° C, a 15 lb de pressão, por 15 minutos.

Ao remover da autoclave, deixe esfriar até uma temperatura aproximada de 45-50 ° C, agite a mistura para homogeneizar antes de servir. Despeje 20 ml em placas de Petri estéreis.

Deixe as placas solidificar, inverter e armazenar em um fabricante de placas ou embrulhar com papel escuro antes de guardar na geladeira. É muito importante proteger o meio preparado da luz direta. Uma prática recomendada é preparar a quantidade exata que será necessária.

Se armazenadas na geladeira, os pratos devem temperar antes de serem utilizados.

O pH do meio deve estar entre 7,2 e 7,6 e a cor do meio preparado é rosa pálido.

Variante de ágar M-Endo

Existe outra versão do ágar Endo (m-Endo) que segue a fórmula de McCarthy, Delaney e Grasso, que contém mais compostos e varia na forma de preparação.

Esta variante contém: lactose, triptose, digestão enzimática de caseína, digestão enzimática de tecido animal, cloreto de sódio, fosfato dibásico de potássio, sulfito de sódio, extrato de levedura, fosfato monobásico de potássio, fucsina básica, desoxicolato de sódio, lauril sulfato de sódio e ágar.

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Neste caso, 51 g do meio desidratado são pesados ​​e suspensos em 1 litro de água destilada contendo 20 ml de etanol.

Aqueça levemente enquanto mexe até que o meio se dissolva completamente. Não superaqueça e esterilize na autoclave. Quando a mistura estiver homogênea, sirva em placas de Petri estéreis e deixe solidificar.

Use

Em alguns países, ainda é utilizado para a contagem de coliformes totais e fecais em amostras de água e alimentos, especialmente a presença de Escherichia coli é procurada como o principal indicador de contaminação fecal.

O ágar m-Endo é recomendado pela American Public Health Association (APHA) para o monitoramento e controle dos programas de desinfecção e tratamento de águas residuais, bem como para a avaliação da qualidade da água potável.

O método mais comumente usado é a filtração por membrana, após enriquecimento da amostra com caldo de Lauril sulfato por 2 a 4 horas.

Também pode ser utilizado como substituto do ágar EMB na análise microbiológica de alimentos e água pela técnica do número mais provável (MPN), especificamente na fase confirmatória completa para corroborar a presença de E. coli de caldos CE turvos.

Controle de qualidade

Para avaliar a qualidade do lote de agar Endo preparado, são semeadas cepas de controle conhecidas ou certificadas.

Entre as estirpes que podem ser utilizadas para este fim são: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 e Enterococcus faecalis ATCC 11700 .

As cepas são semeadas por depleção e incubadas a 37 ° C por 24 horas em aerobiose.

Os resultados esperados são:

  • Para Escherichia coli: colônias vermelhas fortes, com brilho metálico.
  • Para E. cloacae e K. pneumoniae, as colônias devem ser mucoóides rosa.
  • No caso de S. typhimurium, S. flexneri e P. mirabilis, as colônias geralmente são rosa pálidas ou incolores.
  • Finalmente, espera-se que E. faecalis seja parcialmente inibido, portanto seu crescimento deve ser fraco com colônias rosa muito pequenas e brilhantes.
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Limitações

-O meio Endo tem baixo poder seletivo, portanto, é possível que alguns microorganismos Gram-positivos, como Staphylococcus, Enterococcus e até leveduras, possam crescer.

-Outros bacilos não pertencentes à família Enterobacteriaceae podem se desenvolver nesse ambiente, como Pseudomonas sp e Aeromonas sp . As características dessas cepas são colônias irregulares incolores.

-Este meio preparado é muito sensível à luz, portanto, a exposição prolongada a ele deteriora o sistema indicador, danificando irreversivelmente o meio.

-Os componentes do meio são considerados cancerígenos, portanto, o contato direto deve ser evitado.

-O meio desidratado é muito higroscópico e deve ser mantido em seu recipiente original à temperatura ambiente, bem fechado e em ambiente seco.

Referências

  1. Laboratórios BD Endo Hagar. 2013. Disponível em: bd.com
  2. Laboratórios Neogen Endo Agar. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  3. «Egar agar.» Wikipedia, a enciclopédia livre . 7 de setembro de 2017 às 08:27 UTC. 28 de fevereiro de 2019 às 22:55 Disponível em: en.wikipedia.
  4. Laboratório MercK. Endo ágar. 2019. Disponível em: merckmillipore.com
  5. Folha técnica de laboratórios. M – Agar traseiro LES. 2015. Disponível em: liofilchem.net

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