Ágar verde brilhante: fundação, preparação e usos

O ágar verde brilhante é um meio de cultura sólido com elevado grau de selectividade. É utilizado exclusivamente para o isolamento de linhagens do gênero Salmonella, porém existem algumas exceções, como as espécies typhi e paratyphi que não crescem nesse ambiente.

A busca pelo gênero Salmonella é frequente em amostras de fezes, água ou alimentos. Nesse sentido, esse meio pode ser muito útil.Este ágar foi criado em 1925 por Kristensen, Lester e Jurgens, posteriormente modificado por Kauffmann.

Ágar verde brilhante: fundação, preparação e usos 1

Ágar verde brilhante. Colônias de fermentação e não fermentação, respectivamente. Fonte: Exposição MJ Richardson / Invisible Worlds – 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

É composto de pluripeptonas de tecido animal digerido péptico e caseína pancreática digerida, também contém extrato de levedura, cloreto de sódio , lactose, sacarose, vermelho de fenol, verde brilhante e ágar-ágar.

Caracteriza-se por ser um ambiente bastante hostil para a maioria das bactérias , favorecendo o crescimento de Salmonella, porém alguns coliformes são capazes de subsistir, desenvolvendo-se fracamente.

É importante notar que, neste ambiente, o gênero Shigella não cresce e nem Salmonella typhimurium , nem Salmonella paratyphi.Portanto, se desejar isolar esses microrganismos, outros meios, como o ágar XLD, devem ser utilizados, entre outros.

Fundação

Ágar verde brilhante

Cada um dos componentes que compõem o meio cumpre uma função específica que determina as características e propriedades do ágar.

As pluripeptonas e o extrato de levedura são a fonte de nutrientes de onde os microrganismos retiram o nitrogênio e os minerais necessários ao seu desenvolvimento.A lactose e a sacarose são fontes de energia para os microorganismos capazes de fermentá-los.

Verde brilhante é a substância inibidora que impede o desenvolvimento de bactérias Gram-positivas e um grande número de microrganismos Gram-negativos.

O cloreto de sódio fornece estabilidade osmótica ao meio ambiente. Embora o vermelho de fenol seja o indicador de pH, ele muda de cor quando detecta a produção de ácidos da fermentação de carboidratos.

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As colônias não fermentativas de lactose e sacarose crescem neste meio com uma cor branca rosada ou transparente, sobre um fundo vermelho. Por exemplo, bactérias do gênero Salmonella.

Enquanto as bactérias fermentadoras de lactose ou sacarose capazes de crescer neste meio, desenvolvem colônias verde-amarelo ou verde-amarelo sobre fundo amarelo-esverdeado. Por exemplo, Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae .

Variantes de agar verde brilhante (BGA)

Existem outras variantes de ágar verde brilhante; ágar novobiocina de glicose verde brilhante (NBG) e ágar lactose glicerol novobiocina verde brilhante (NBGL).

Agar de glicose verde brilhante de Novobiocin (NBG)

Contém ágar tripticase de soja, citrato férrico de amônio, tiossulfato de sódio pentahidratado, vermelho de fenol, glicose, verde brilhante, novobiocina e água destilada.

É usado para isolar colônias de Salmonella de amostras de fezes.

Nesse caso, o verde brilhante e a novobiocina são as substâncias inibidoras que impedem o crescimento de bactérias Gram-positivas e alguns microorganismos Gram-negativos.

O tiossulfato de sódio é a fonte de sulfeto e o citrato férrico é a fonte de ferro, ambos necessários para revelar a produção de sulfeto de hidrogênio através da formação de um precipitado preto de sulfeto férrico.

A glicose é o carboidrato fermentável e o vermelho de fenol é o indicador de pH.

Nesse ambiente, as colônias de Salmonella desenvolvem-se grandes, com centro preto cercado por um halo avermelhado e seguido por uma área visível e clara. Algumas cepas de Citrobacter freundii produzem colônias idênticas às Salmonella.

Agar novobiocina verde-ágar glicerol lactose (NBGL)

Este meio contém ágar triptase de soja, citrato férrico de amônio, tiossulfato de sódio, lactose, glicerol, verde claro, novobiocina e água destilada .

A diferença entre este meio e o anterior é que a glicose é substituída por lactose e glicerol e o vermelho de fenol não é usado.

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O meio também é usado para isolar espécies de Salmonella, as colônias se desenvolvem negras, pela produção de sulfeto de hidrogênio.

Somente colônias que não produzem ácido a partir de glicerol ou lactose atingem produção suficiente de H2S, porque o pH baixo interfere na formação de H2S . Isso resulta em colônias incolores para a maioria das espécies de H 2 S. Proteus e Citrobacter.

Preparação

-Peso 58 gramas de meio desidratado obtido comercialmente. Adicione em um litro de água destilada dupla. Misture, deixe repousar alguns minutos e submeta a preparação a uma fonte de calor até dissolver completamente.

-Autoclave a 121 ° C por 15 minutos, não exceda o tempo de esterilização.

-Deixe repousar e ainda sirva quente em placas de Petri estéreis. O pH final deve ser 6,9 ± 0,2.

– Deixe solidificar e guarde na geladeira até o uso. Antes da semeadura, as placas devem ter temperatura ambiente.

-O meio em pó é verde e preparado para assumir uma cor laranja-marrom ou esverdeada avermelhada, dependendo do pH e da casa comercial. Uma cor muito marrom é indicativa de que o ágar estava superaquecido.

-Depois que o ágar estiver solidificado, não é recomendável reformulá-lo, pois o meio se deteriora.

Usos / Aplicações

Este meio é usado para pesquisar cepas do gênero Salmonella a partir de amostras de fezes e laticínios, entre outros.

Sendo um meio bastante inóspito, é aconselhável semear um inóculo abundante se a amostra direta for usada. Caso contrário, um pré-enriquecimento e enriquecimento das amostras devem ser feitos antes da semeadura neste meio.

Como algumas cepas de Salmonella são inibidas ou crescem com dificuldade, é aconselhável acompanhar este meio com outros ágares seletivos para Salmonella.

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Toda colônia com uma característica típica de Salmonella deve ser submetida a testes bioquímicos para sua identificação definitiva.

Controle de qualidade

Para testar o bom funcionamento do meio de agar verde-claro, as cepas de ATCC podem ser usadas para observar seu desenvolvimento.

As cepas mais freqüentes utilizadas para controle de qualidade são: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Os três primeiros devem fornecer colônias brancas rosadas ou transparentes, sobre fundo vermelho. Salmonella com bom desenvolvimento e Proteus com crescimento pequeno ou regular.

Para Klebsiella e Escherichia, são esperadas colônias amarelas esverdeadas com fundo amarelo e, no caso de Shigella e Staphylococcus, elas devem ser inibidas.

O meio desidratado deve ser armazenado em temperatura ambiente, em local seco, pois o meio é muito higroscópico.

Referências

  1. Laboratório Difco Francisco Soria Melguizo SA Ágar Verde Brilhante. 2009
  2. Laboratório Britânico Ágar verde brilhante. 2015
  3. Laboratório BD. BD Agar Verde Brilhante. 2013
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA

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