Caldo de selenito: fundação, preparação e usos

O selenito é um meio de cultura líquido selectivo. Foi desenhado por Leifson para o enriquecimento de amostras em que se suspeita da presença de bactérias enteropatogênicas do gênero Salmonella.

Este meio atende aos requisitos da American Public Health Association (APHA) e, portanto, é aceito para a investigação da presença de Salmonella em amostras de fezes, urina, alimentos líquidos ou sólidos, água, entre outros.

Caldo de selenito: fundação, preparação e usos 1

Caldo Selenito. Fonte: Foto tirada pelo autor MSc. Marielsa Gil

Sua composição química favorece a recuperação desses microrganismos e, por sua vez, inibe o crescimento de outros. É principalmente tóxico para a maioria das bactérias pertencentes à família Enterobacteriaceae. No entanto, também permite a recuperação de cepas de Shigella e não inibe o crescimento de Pseudomonas e Proteus.

É composto de hidrogênio selenito de sódio anidro, fosfato de sódio anidro, peptonas e lactose. Há também uma variante à qual a cistina é adicionada, daí seu nome caldo selenito-cistina.

Atualmente, é preferível o uso de caldo de selenito-cistina, uma vez que é obtida uma porcentagem mais alta de recuperação de Salmonella equivalente à observada com outros meios seletivos para a mesma finalidade, como o caldo de tetrationato de sódio.

Fundação

As peptonas contidas no caldo servem como nutrientes para o bom desenvolvimento dos microrganismos. As cepas de Salmonella usam peptonas como fonte de nitrogênio, vitaminas e aminoácidos.

A lactose é o carboidrato fermentável, enquanto o selenito de sódio é a substância inibidora que retarda o crescimento de bactérias Gram-positivas e da maioria das bactérias presentes na flora intestinal, especialmente da família Enterobacteriaceae. O fosfato de sódio é o tampão que estabiliza o pH do meio.

No caso da variante do caldo de selenito contendo L-cistina, esse composto adicional é um agente redutor que minimiza a toxicidade do selenito, aumentando a recuperação de Salmonella.

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Preparação

-Caldo de selenita

Se você tem os componentes da mistura, pode pesar:

4 gr de selenito hidrogênio sódio anidro.

10 g de fosfato de sódio anidro.

5 g de peptonas.

4 gr de lactose.

Dissolver os compostos em 1 litro de água destilada estéril. Pode ser aquecido ligeiramente para se dissolver completamente.

Alguns laboratórios expõem o meio por 10 minutos em vapor fluente para esterilizá-lo, uma vez que a autoclave não deve ser usada. Se o meio for esterilizado, ele poderá ser armazenado na geladeira até ser utilizado.

Também pode ser preparado sem esterilizar e servir 10 a 15 ml diretamente a tubos de ensaio estéreis.

Nesse caso, deve-se deixar em pé e usar imediatamente. Como o meio não é estéril, ele não pode ser armazenado na geladeira para uso posterior.

Preparação do meio comercial

Se o meio comercial estiver disponível, 23 gramas do meio desidratado são pesados ​​e dissolvidos em um litro de água destilada estéril. Aqueça brevemente para terminar a dissolução. Não esterilize na autoclave. Servir 10 ou 15 ml assepticamente em tubos de ensaio estéreis.

O pH final do meio deve ser 7,0 ± 0,2.

Note-se que a cor do meio desidratado é bege e a preparação é âmbar clara e translúcida.

Selenita – variante de caldo de cistina

Ele contém os mesmos compostos de caldo de selenito, mas são adicionados 10 mg de cistina. O restante do procedimento é exatamente o mesmo descrito acima.

Usos

Esse meio é especial para ser utilizado em estudos epidemiológicos, nos casos em que a doença não se encontra em estágio agudo, em pacientes assintomáticos ou portadores saudáveis.

O isolamento do gênero Salmonella é geralmente difícil, pois geralmente contamina as amostras de maneira escassa. Estando em pequenas quantidades, é facilmente sobreposto pelo crescimento de outros gêneros bacterianos encontrados em maior quantidade.

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Por outro lado, a matéria-prima com a qual os alimentos processados ​​são feitos costuma ser exposta ao calor, processos de desidratação, uso de desinfetantes, radiação e conservantes, entre outros.

Portanto, as Salmonella presentes na matéria-prima são maltratadas submetendo o produto aos processos industriais acima mencionados. Da mesma forma, no caso de amostras clínicas, como fezes, as cepas podem ser fracas se vierem de pacientes que foram tratados com antibióticos.

Portanto, qualquer amostra em que se suspeite da presença de Salmonella deve ser pré-enriquecida em caldo de lactose e subsequentemente enriquecida em caldo de selenito para otimizar sua recuperação em meios seletivos, como ágar SS, ágar xilose, desoxicolato de lisina (XLD ), ágar Hektoen entérico (HE) e ágar verde brilhante, entre outros.

Semeado

Para amostras de fezes, tome 1 g de amostra e suspenda em um tubo com 10 a 15 ml de caldo de selenito. Se as fezes estiverem líquidas, tome 1 ml e suspenda no caldo. Para zaragatoas retais, descarregue o material da zaragatoa no caldo.

Em amostras de alimentos sólidos, tome 1 g e suspenda no caldo de selenito.

Nos alimentos líquidos, misture igualmente com o caldo de selenito em dupla concentração.

Para amostras de urina devem ser centrifugadas, descartar o sobrenadante, pegar todo o sedimento e suspendê-lo no caldo de selenito.

Os caldos são incubados a 37 ° C por 24 horas de incubação. O crescimento bacteriano é evidenciado pela turbidez. Um tubo adicional por amostra também pode ser incluído para incubação a 42 ° C. Posteriormente, semeie meios sólidos seletivos do caldo de selenito.

Controle de qualidade

Para controle da esterilidade, um caldo de selenito de cada lote sem incubação é incubado a 37 ° C por 24 horas. Espera-se que não haja turbidez, nem mudança de cor do meio.

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Para controlar o bom funcionamento do meio, podem ser usadas cepas conhecidas, como:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 e Proteus mirabilis ATCC 43071.

Os resultados esperados são:

  • Nas três primeiras cepas bacterianas, o crescimento deve ser satisfatório.
  • Para Escherichia coli inibição parcial.
  • Para Proteus crescimento moderado.

Limitações

O meio de caldo de selenito é tóxico para a pele humana, portanto, o contato direto deve ser evitado.

Referências

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Comparação entre meios de cultura de selenito de sódio e tetrationato de sódio, ambos incubados a 37 ° C e 42 ° C por o isolamento de Salmonella spp das fezes dos portadores. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Laboratórios britânicos. Caldo Selenito. 2015. Disponível em: britanialab.com
  3. Laboratórios Neogen Caldo Selenito. Disponível em: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Isolamento microbiológico de Salmonella spp . e ferramentas moleculares para detecção. Saúde, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Disponível em: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

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