Coloração com hematoxilina-eosina: características, usos, técnicas

A hematoxilina – eosina é uma técnica de coloração com a combinação de corantes hematoxilina e eosina. Esse par de corantes é perfeito, pois a hematoxilina atua como corante básico e a eosina é um corante ácido.

A designação de corantes básicos ou ácidos não se refere ao pH que eles obtêm em solução, mas fala da proporção que prevalece em termos das cargas aniônicas ou catiônicas que eles possuem ou por causa da localização do grupo cromóforo.

Coloração com hematoxilina-eosina: características, usos, técnicas 1

Epitélio cilíndrico ciliado corado com hematoxilina – eosina (HE) Fonte: Todd Straus e Vladimir Osipov [CC BY 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/3.0)]

Nesse sentido, a hematoxilina é considerada um corante básico (catiônico) e, portanto, possui uma afinidade por estruturas ácidas, como o núcleo das células. Enquanto a eosina, sendo um corante ácido (aniônico), tem uma afinidade por estruturas alcalinas ou básicas, como o citoplasma celular.

Por esse motivo, essa combinação de corantes é amplamente utilizada na coloração de tecidos, pois permite distinguir claramente núcleos e citoplasmas. Os núcleos colorem azul escuro ou roxo e o citoplasma rosa.

A coloração com hematoxilina-eosina é uma das técnicas de coloração mais utilizadas na área de histologia e citologia, devido ao seu fácil manuseio e baixo custo.É utilizado para a visualização de células, fibras nervosas espessas e presença de certos microorganismos nos tecidos, como: parasitas, fungos e bactérias, entre outros.

Caracteristicas

Hematoxilina

A hematoxilina é um corante neutro. No entanto, o componente que fornece a cor (cromóforo) está localizado no centro catiônico ou básico da molécula. Daí sua afinidade por estruturas ácidas. Sua fórmula química é C 16 H 14 O 6 e seu nome científico 7,11b-di-hidroindeno [ 2,1- c ] cromeno-3, 4,6a, 9,10 (6 H ) -pentol.

Mancha principalmente os núcleos das células, uma vez que são muito ricos em ácidos nucléicos. Também pode manchar inclusões citoplasmáticas de origem viral.

Para que a hematoxilina manche, ela deve estar oxidada e ligada a um metal. Este último servirá para ser fixado ao tecido, ou seja, atuará como mordente.

Quando a hematoxilina oxida, chama-se hemateína. A oxidação é obtida pela exposição ao oxigênio (envelhecimento) do reagente ou por substâncias que auxiliam na sua oxidação (oxidação química).

Eosina

A eosina é um corante que tinge de vermelho ou rosa. É insolúvel em água, embora exista uma versão solúvel em água. Geralmente, a eosina é preparada dissolvendo-se em álcool (etanol a 95 °).

Mancha citoplasmas, fibras musculares, organelas citoplasmáticas e colágeno, mas não mancha os núcleos celulares. Isso ocorre porque é carregado negativamente, portanto, possui uma afinidade por estruturas com carga positiva.

Existem dois tipos de eosina, o “Y” e o “B”. A eosina “Y” é conhecida como eosina amarela. Seu nome científico é tetrabromofluoresceína e sua fórmula química é C 20 H 8 Br 4 O 5 .

Por outro lado, a eosina “B” é às vezes chamada de eritrosina azulada B. Seu nome científico é dibromodinitrofluoresceína e a fórmula é C 20 H 8 Br 2 N 2 O 9 . Ambos são muito semelhantes e a diferença de usar um ou outro não é realmente perceptível. No entanto, o mais popular é o eosin “Y”.

A eosina tem a propriedade de distinguir entre uma célula viva e uma célula morta, pois só é capaz de atravessar a membrana para manchar seu citoplasma quando as células estão mortas, deixando o citoplasma incolor da célula se permanecer vivo.

Usos

Coloração de fibras nervosas

Com hematoxilina-eosina, fibras nervosas espessas podem ser coradas e identificadas. No entanto, não é útil colorir fibras nervosas finas, porque para visualizar as últimas é necessária uma coloração prateada.

Coloração de cortes histológicos da pele

Nas manchas da camada corneana da pele, o corante que atua é a eosina, pois nesse nível as células não têm núcleo.

Na camada granular da pele, a hematoxilina mancha fortemente os grânulos de querato-hialina encontrados no interior das células granulares. Pelo contrário, a camada espinhosa da pele é tingida fracamente com hematoxilina, enquanto a camada basal ou germinativa está manchada o suficiente.

A eosina mancha o citoplasma de todas as células e a intensidade da cor pode variar entre as camadas.

Coloração de amostras de fezes com hematoxilina-eosina

Gomez et al., Em 2005, demonstraram que a coloração com hematoxilina-eosina foi mais eficaz na identificação de casos de amebíase devido a Entamoeba histolytica e Entamoeba díspares do que o método de visão recente (solução salina e lugol) em pacientes com doença diarréica aguda.

Também foi demonstrado que ele possui grande sensibilidade para detectar eritrofagocitose (amebas que possuem eritrócitos fagocitados).

Coloração de cortes histológicos para o diagnóstico de infecção

Walwyn et al., Em 2004, propuseram o uso de manchas histológicas para detectar microorganismos que causam infecções.

Usando a coloração de hematoxilina-eosina, eles conseguiram visualizar infecções causadas por Clostridium , Actinomyces , espirais ou Candida . Eles também conseguiram observar a presença do parasita Sarcoptes escabiei em cortes de pele e inclusões virais por citomegalovírus e herpes em cortes de vários tecidos.

Técnicas

Para amostras histológicas

A coloração dos cortes histológicos passa por uma série de etapas. O primeiro é obter a seção histológica. Isso deve ser parafinado e, em seguida, obter os cortes (ultrafinos) com um micrótomo. A técnica consiste nas seguintes etapas:

1-Eliminação do excesso de parafina : para isso, você pode usar xilol ou Hemo – D, submergir por 3-5 minutos.

2-Reidratação da amostra: isso é obtido submergindo a amostra em diferentes concentrações de álcoois (etanol) em ordem decrescente (100 °, 90 °, 70 °). Em todos os casos por 7 minutos.

3-Eliminação do excesso de álcool: para isso, é imerso em água por 7 minutos.

4-Coloração com hematoxilina: a amostra é imersa por 6 a 10 minutos em uma bandeja contendo hematoxilina. O tempo de exposição depende do tamanho e espessura da amostra.

5-Eliminação do excesso de hematoxilina: é lavado com água por 5 minutos e, em seguida, uma passagem rápida (10-20 segundos) é realizada com álcool ácido. Em seguida, lave com água novamente por 5 minutos. Em seguida, é imerso em etanol a 96 ° por 1 minuto.

6-Coloração com eosina: para isso, a amostra é imersa por 5 minutos na bandeja de eosina.

7-Desidratação da amostra : para isso, passa pelas bandejas de álcoois (etanol), mas desta vez em ordem crescente. (70 °, 90 °, 100 °). (Por 5 segundos, 5 segundos, 1 minuto, respectivamente).

8-Esclarecimento da amostra : para isso, é exposta ao xilol por 5 a 10 minutos e seca para selar permanentemente com bálsamo canadense ou outro material similar.

Para amostras de fezes em busca de E. histolytica

Em uma folha, uma extensão é feita com as fezes do paciente e fixada com álcool a 80% por 5 minutos. A folha é imersa em hematoxilina por 5 minutos e imediatamente lavada com água.

Posteriormente, é rapidamente imerso em álcool ácido e depois em água de amônia. É lavado com água. É colorido por 5 minutos em eosina. A amostra é desidratada como explicado na técnica anterior e finalmente enxaguada com xileno.

Preparação de reagentes

– Hematoxilina

Em um litro de água destilada, dissolva 50 gramas de sulfato de potássio e alumínio e amônio. Quando completamente dissolvido, adicione 1 grama de hematoxilina cristalizada. Quando dissolvido na sua totalidade, 1 g de ácido cítrico é adicionado juntamente com 50 g de hidrato de cloral e 0,2 g de iodato de sódio.

A mistura é fervida por 5 minutos, depois deixada esfriar e filtrada para remover as partículas sólidas restantes. O reagente assim preparado pode ser utilizado imediatamente.

– Eosina

Pode ser preparado com base alcoólica ou à base de água.

Eosina alcoólica

Em 100 ml de etanol a 95 ° dissolver 0,5 gramas de eosina “Y”. Em seguida, adicione algumas gotas de ácido acético glacial.

Eosina aquosa a 2%

Em 1250 ml de água destilada, dissolva 25 gramas de eosina “Y” solúvel em água. Em seguida, adicione algumas gotas de ácido acético glacial.

Álcool ácido

Meça 0,5 ml de ácido clorídrico concentrado e complete 100 ml com álcool absoluto.

Água amoniacal

Meça 0,5 mL de amônia concentrada e complete 100 mL com água destilada.

Referências

  1. Navarrete, G. Histologia da pele. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Disponível em: medigraphic.com
  2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
  3. Identificação de Entamoeba histolytica / E. atirar pela técnica amiba fresca vs sua coloração com hematoxilina-eosina na diarréia aguda. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Disponível em: medigraphic.com
  4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Utilidade de técnicas histológicas para o diagnóstico de infecção em peças anatômicas. Rev Cub Med Mil , 2004; 33 (2). Disponível em: scielo.sld
  5. Reagentes ITR PanReac AppliChem. Coloração com hematoxilina-eosina. 2017, Espanha. Disponível em: itwreagents.com
  6. «Eosina.» Wikipedia, a enciclopédia livre . 7 Nov 2018, 08:18 UTC. 4 de agosto de 2019 às 22:13 pt.wikipedia.org
  7. «Hematoxilina.» Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 3 de maio de 2019 às 11:23 UTC. 4 de agosto de 2019, 22:48 wikipedia.org

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