A coloração com hematoxilina-eosina é uma técnica frequentemente utilizada em histologia e patologia para a coloração de tecidos biológicos, permitindo a visualização de diferentes estruturas celulares e teciduais. A hematoxilina é um corante básico que se liga a componentes ácidos das células, como o núcleo celular, enquanto a eosina é um corante ácido que se liga a componentes básicos das células, como o citoplasma. Essa técnica permite uma melhor visualização das células, permitindo a identificação de diferentes tipos celulares e a análise de possíveis anormalidades. É uma técnica amplamente utilizada em laboratórios de anatomia patológica, pesquisa científica e diagnóstico de doenças.
Principais características dos corantes hematoxilina e eosina utilizados em histologia e patologia.
Os corantes hematoxilina e eosina são amplamente utilizados em histologia e patologia devido às suas características únicas e versatilidade na coloração de tecidos biológicos. A hematoxilina é um corante básico que se liga a estruturas ácidas, como o núcleo das células, corando-os em tons de azul a roxo. Já a eosina é um corante ácido que se liga a estruturas básicas, como o citoplasma das células, corando-os em tons de rosa a vermelho.
Uma das principais características da coloração com hematoxilina-eosina é a capacidade de diferenciar diferentes tipos de tecidos e estruturas celulares com base na afinidade dos corantes. A hematoxilina destaca o núcleo das células, permitindo a visualização de detalhes como tamanho, forma e organização nuclear. Enquanto isso, a eosina destaca o citoplasma e outras estruturas celulares, auxiliando na identificação de componentes como proteínas e fibras.
Além disso, a coloração com hematoxilina-eosina é altamente eficaz na diferenciação de tecidos normais e patológicos, permitindo a identificação de alterações morfológicas associadas a doenças. A combinação dos dois corantes proporciona contraste e nitidez nas imagens microscópicas, facilitando a análise e interpretação dos tecidos examinados.
Por fim, a técnica de coloração com hematoxilina-eosina é relativamente simples e amplamente utilizada em laboratórios de histologia e patologia. O processo envolve a desidratação, clarificação, inclusão em parafina, corte em micrótomo e coloração dos cortes de tecido com os corantes hematoxilina e eosina. Essa técnica é essencial para a realização de diagnósticos precisos e contribui significativamente para o avanço da medicina e da pesquisa científica.
Tudo sobre as técnicas de coloração: como funcionam e quais os resultados esperados.
As técnicas de coloração são fundamentais em diversas áreas, como a medicina, a biologia e a histologia. Uma das técnicas mais comuns é a coloração com hematoxilina-eosina, que consiste em corar as células para facilitar a sua visualização ao microscópio. A hematoxilina é uma substância básica que se liga ao material nuclear das células, enquanto o eosina é uma substância ácida que se liga ao citoplasma. Essa combinação de corantes permite uma melhor distinção entre os diferentes componentes celulares.
Para realizar a coloração com hematoxilina-eosina, as amostras são fixadas, desidratadas, incluídas em parafina, cortadas em lâminas finas e, finalmente, coradas com os corantes. A hematoxilina cora o núcleo das células em tonalidades de azul a roxo, enquanto o eosina cora o citoplasma em tonalidades de rosa a vermelho. O resultado esperado é a visualização clara e detalhada das células e de suas estruturas, o que auxilia no diagnóstico de diversas doenças e na pesquisa científica.
A coloração com hematoxilina-eosina é amplamente utilizada em laboratórios de anatomia patológica, histologia e citologia. Ela permite identificar alterações celulares, como inflamação, necrose, metaplasia e neoplasias. Além disso, essa técnica também é útil para estudar a morfologia e a organização dos tecidos em diferentes órgãos e sistemas do corpo humano.
Ao corar as células de forma diferencial, ela permite a identificação de diversas estruturas e alterações celulares, contribuindo para o avanço da medicina e da ciência.
Qual a função da hematoxilina em processos de coloração de amostras histológicas?
A hematoxilina é um corante básico utilizado em processos de coloração de amostras histológicas. Sua principal função é corar o núcleo das células, tornando-os azulados ou roxos, dependendo da técnica utilizada. Esse corante tem afinidade pela estrutura do DNA presente no núcleo das células, o que facilita a visualização e a análise das características morfológicas das células.
Além disso, a hematoxilina também pode ser utilizada em combinação com o corante eosina, que cora o citoplasma das células em tons de rosa ou vermelho. Essa combinação de corantes, conhecida como coloração hematoxilina-eosina, é amplamente utilizada em laboratórios de patologia para a análise de tecidos e diagnóstico de diversas doenças.
Portanto, a hematoxilina desempenha um papel fundamental na coloração de amostras histológicas, proporcionando uma melhor visualização e análise das estruturas celulares. Sua afinidade pelo núcleo das células permite uma identificação mais precisa das características morfológicas, auxiliando no diagnóstico de doenças e na pesquisa científica.
A relevância das técnicas de coloração na microscopia para análises mais precisas e detalhadas.
A coloração com hematoxilina-eosina é uma técnica amplamente utilizada na microscopia para análises mais precisas e detalhadas de amostras biológicas. A coloração é um processo fundamental que permite a visualização de estruturas celulares e teciduais que, de outra forma, seriam difíceis de distinguir.
A hematoxilina é um corante básico que se liga a componentes ácidos das células, como o núcleo, enquanto o eosina é um corante ácido que se liga a componentes básicos, como as proteínas do citoplasma. Essa combinação de corantes permite a diferenciação das estruturas celulares e a visualização de detalhes importantes.
Com a coloração com hematoxilina-eosina, é possível observar a morfologia das células, identificar alterações patológicas, avaliar a presença de inflamação, fibrose, necrose e outras condições. Essa técnica é amplamente utilizada em histologia, anatomia patológica e pesquisa científica.
Além disso, a coloração com hematoxilina-eosina permite uma melhor compreensão das relações espaciais entre as diferentes estruturas presentes na amostra, facilitando a interpretação dos resultados e auxiliando no diagnóstico de doenças. Com a utilização adequada dessa técnica, é possível obter análises mais precisas e detalhadas, contribuindo para avanços significativos na área da saúde.
Coloração com hematoxilina-eosina: características, usos, técnicas
A hematoxilina – eosina é uma técnica de coloração com a combinação de corantes hematoxilina e eosina. Esse par de corantes é perfeito, pois a hematoxilina atua como corante básico e a eosina é um corante ácido.
A designação de corantes básicos ou ácidos não se refere ao pH que eles obtêm em solução, mas fala da proporção que prevalece em termos das cargas aniônicas ou catiônicas que eles possuem ou por causa da localização do grupo cromóforo.
Nesse sentido, a hematoxilina é considerada um corante básico (catiônico) e, portanto, possui uma afinidade por estruturas ácidas, como o núcleo das células. Enquanto a eosina, sendo um corante ácido (aniônico), tem uma afinidade por estruturas alcalinas ou básicas, como o citoplasma celular.
Por esse motivo, essa combinação de corantes é amplamente utilizada na coloração de tecidos, pois permite distinguir claramente núcleos e citoplasmas. Os núcleos colorem azul escuro ou roxo e o citoplasma rosa.
A coloração com hematoxilina-eosina é uma das técnicas de coloração mais utilizadas na área de histologia e citologia, devido ao seu fácil manuseio e baixo custo.É utilizado para a visualização de células, fibras nervosas espessas e presença de certos microorganismos nos tecidos, como: parasitas, fungos e bactérias, entre outros.
Caracteristicas
Hematoxilina
A hematoxilina é um corante neutro. No entanto, o componente que fornece a cor (cromóforo) está localizado no centro catiônico ou básico da molécula. Daí sua afinidade por estruturas ácidas. Sua fórmula química é C 16 H 14 O 6 e seu nome científico 7,11b-di-hidroindeno [ 2,1- c ] cromeno-3, 4,6a, 9,10 (6 H ) -pentol.
Mancha principalmente os núcleos das células, uma vez que são muito ricos em ácidos nucléicos. Também pode manchar inclusões citoplasmáticas de origem viral.
Para que a hematoxilina manche, ela deve estar oxidada e ligada a um metal. Este último servirá para ser fixado ao tecido, ou seja, atuará como mordente.
Quando a hematoxilina oxida, chama-se hemateína. A oxidação é obtida pela exposição ao oxigênio (envelhecimento) do reagente ou por substâncias que auxiliam na sua oxidação (oxidação química).
Eosina
A eosina é um corante que tinge de vermelho ou rosa. É insolúvel em água, embora exista uma versão solúvel em água. Geralmente, a eosina é preparada dissolvendo-se em álcool (etanol a 95 °).
Mancha citoplasmas, fibras musculares, organelas citoplasmáticas e colágeno, mas não mancha os núcleos celulares. Isso ocorre porque é carregado negativamente, portanto, possui uma afinidade por estruturas com carga positiva.
Existem dois tipos de eosina, o “Y” e o “B”. A eosina “Y” é conhecida como eosina amarela. Seu nome científico é tetrabromofluoresceína e sua fórmula química é C 20 H 8 Br 4 O 5 .
Por outro lado, a eosina “B” é às vezes chamada de eritrosina azulada B. Seu nome científico é dibromodinitrofluoresceína e a fórmula é C 20 H 8 Br 2 N 2 O 9 . Ambos são muito semelhantes e a diferença de usar um ou outro não é realmente perceptível. No entanto, o mais popular é o eosin “Y”.
A eosina tem a propriedade de distinguir entre uma célula viva e uma célula morta, pois só é capaz de atravessar a membrana para manchar seu citoplasma quando as células estão mortas, deixando o citoplasma incolor da célula se permanecer vivo.
Usos
Coloração de fibras nervosas
Com hematoxilina-eosina, fibras nervosas espessas podem ser coradas e identificadas. No entanto, não é útil colorir fibras nervosas finas, porque para visualizar as últimas é necessária uma coloração prateada.
Coloração de cortes histológicos da pele
Nas manchas da camada corneana da pele, o corante que atua é a eosina, pois nesse nível as células não têm núcleo.
Na camada granular da pele, a hematoxilina mancha fortemente os grânulos de querato-hialina encontrados no interior das células granulares. Pelo contrário, a camada espinhosa da pele é tingida fracamente com hematoxilina, enquanto a camada basal ou germinativa está manchada o suficiente.
A eosina mancha o citoplasma de todas as células e a intensidade da cor pode variar entre as camadas.
Coloração de amostras de fezes com hematoxilina-eosina
Gomez et al., Em 2005, demonstraram que a coloração com hematoxilina-eosina foi mais eficaz na identificação de casos de amebíase devido a Entamoeba histolytica e Entamoeba díspares do que o método de visão recente (solução salina e lugol) em pacientes com doença diarréica aguda.
Também foi demonstrado que ele possui grande sensibilidade para detectar eritrofagocitose (amebas que possuem eritrócitos fagocitados).
Coloração de cortes histológicos para o diagnóstico de infecção
Walwyn et al., Em 2004, propuseram o uso de manchas histológicas para detectar microorganismos que causam infecções.
Usando a coloração de hematoxilina-eosina, eles conseguiram visualizar infecções causadas por Clostridium , Actinomyces , espirais ou Candida . Eles também conseguiram observar a presença do parasita Sarcoptes escabiei em cortes de pele e inclusões virais por citomegalovírus e herpes em cortes de vários tecidos.
Técnicas
Para amostras histológicas
A coloração dos cortes histológicos passa por uma série de etapas. O primeiro é obter a seção histológica. Isso deve ser parafinado e, em seguida, obter os cortes (ultrafinos) com um micrótomo. A técnica consiste nas seguintes etapas:
1-Eliminação do excesso de parafina : para isso, você pode usar xilol ou Hemo – D, submergir por 3-5 minutos.
2-Reidratação da amostra: isso é obtido submergindo a amostra em diferentes concentrações de álcoois (etanol) em ordem decrescente (100 °, 90 °, 70 °). Em todos os casos por 7 minutos.
3-Eliminação do excesso de álcool: para isso, é imerso em água por 7 minutos.
4-Coloração com hematoxilina: a amostra é imersa por 6 a 10 minutos em uma bandeja contendo hematoxilina. O tempo de exposição depende do tamanho e espessura da amostra.
5-Eliminação do excesso de hematoxilina: é lavado com água por 5 minutos e, em seguida, uma passagem rápida (10-20 segundos) é realizada com álcool ácido. Em seguida, lave com água novamente por 5 minutos. Em seguida, é imerso em etanol a 96 ° por 1 minuto.
6-Coloração com eosina: para isso, a amostra é imersa por 5 minutos na bandeja de eosina.
7-Desidratação da amostra : para isso, passa pelas bandejas de álcoois (etanol), mas desta vez em ordem crescente. (70 °, 90 °, 100 °). (Por 5 segundos, 5 segundos, 1 minuto, respectivamente).
8-Esclarecimento da amostra : para isso, é exposta ao xilol por 5 a 10 minutos e seca para selar permanentemente com bálsamo canadense ou outro material similar.
Para amostras de fezes em busca de E. histolytica
Em uma folha, uma extensão é feita com as fezes do paciente e fixada com álcool a 80% por 5 minutos. A folha é imersa em hematoxilina por 5 minutos e imediatamente lavada com água.
Posteriormente, é rapidamente imerso em álcool ácido e depois em água de amônia. É lavado com água. É colorido por 5 minutos em eosina. A amostra é desidratada como explicado na técnica anterior e finalmente enxaguada com xileno.
Preparação de reagentes
– Hematoxilina
Em um litro de água destilada, dissolva 50 gramas de sulfato de potássio e alumínio e amônio. Quando completamente dissolvido, adicione 1 grama de hematoxilina cristalizada. Quando dissolvido na sua totalidade, 1 g de ácido cítrico é adicionado juntamente com 50 g de hidrato de cloral e 0,2 g de iodato de sódio.
A mistura é fervida por 5 minutos, depois deixada esfriar e filtrada para remover as partículas sólidas restantes. O reagente assim preparado pode ser utilizado imediatamente.
– Eosina
Pode ser preparado com base alcoólica ou à base de água.
Eosina alcoólica
Em 100 ml de etanol a 95 ° dissolver 0,5 gramas de eosina “Y”. Em seguida, adicione algumas gotas de ácido acético glacial.
Eosina aquosa a 2%
Em 1250 ml de água destilada, dissolva 25 gramas de eosina “Y” solúvel em água. Em seguida, adicione algumas gotas de ácido acético glacial.
Álcool ácido
Meça 0,5 ml de ácido clorídrico concentrado e complete 100 ml com álcool absoluto.
Água amoniacal
Meça 0,5 mL de amônia concentrada e complete 100 mL com água destilada.
Referências
- Navarrete, G. Histologia da pele. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Disponível em: medigraphic.com
- Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
- Identificação de Entamoeba histolytica / E. atirar pela técnica amiba fresca vs sua coloração com hematoxilina-eosina na diarréia aguda. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Disponível em: medigraphic.com
- Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Utilidade de técnicas histológicas para o diagnóstico de infecção em peças anatômicas. Rev Cub Med Mil , 2004; 33 (2). Disponível em: scielo.sld
- Reagentes ITR PanReac AppliChem. Coloração com hematoxilina-eosina. 2017, Espanha. Disponível em: itwreagents.com
- «Eosina.» Wikipedia, a enciclopédia livre . 7 Nov 2018, 08:18 UTC. 4 de agosto de 2019 às 22:13 pt.wikipedia.org
- «Hematoxilina.» Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 3 de maio de 2019 às 11:23 UTC. 4 de agosto de 2019, 22:48 wikipedia.org