Coloração negativa: fundamento, técnica, vantagens e desvantagens

A coloração negativa é um método de coloração especial para destacar a presença da cápsula, em alguns microrganismos , principalmente de Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae e Cryptococcus neoformans -, a partir de amostras clínicas ou de culturas puras.

A amostra direta comumente usada para aplicar coloração negativa é o líquido cefalorraquidiano . Essa técnica representa uma alternativa rápida para o diagnóstico presuntivo de meningite , especialmente Cryptococcus neoformans .

Coloração negativa: fundamento, técnica, vantagens e desvantagens 1

A. Tártaro dentário corado com tinta chinesa, B. Cryptococcus neoformans var gatti fracamente encapsulado como aparece na natureza, usando nigrosina. C. Cryptococcus neoformans var gatti com uma cápsula espessa encontrada em sua forma parasitária, usando nigrosina. D. Cryptococcus neoformans com tinta chinesa ligeiramente diluída. Gisell Quinde [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], do Wikimedia Commons / CDC [Domínio público ou domínio público], via Wikimedia Commons / Crédito da foto: Content Providers ( s): CDC / Dr. Leanor Haley [Domínio público], via Wikimedia Commons

Do mesmo modo, esta coloração pode ser aplicada a expectoração e líquidos estéreis em geral, bem como a estirpes obtidas de culturas jovens puras. Essa técnica usa nigrosina ou tinta chinesa para sua execução; portanto, é uma metodologia muito simples e econômica de aplicar que fornece informações de grande valor diagnóstico em pouco tempo.

Nesse sentido, qualquer laboratório é capaz de fazer essa cor. Obviamente, o laboratório deve ter uma equipe competente, capaz de reconhecer as leveduras de Cryptococcus neoformans isoladas ou em brotamento e diferenciá-las dos leucócitos e artefatos que a amostra possa apresentar.

Fundação

Nigrosine e tinta chinesa agem de maneira semelhante; Portanto, qualquer substância pode ser usada de forma intercambiável.

Essa técnica é chamada de coloração negativa porque age contrariamente ao restante das técnicas de coloração. Nisso, o que permanece sem mancha é a estrutura que está sendo procurada ou que se deseja ver; isto é, microorganismos.

Portanto, a coloração é baseada no tingimento da parte inferior do esfregaço em uma cor escura. Nesse cenário, as estruturas niveladas se destacam em cores claras ou incolores.

Em geral, as leveduras são vistas como refratárias, cercadas por um halo claro que corresponde à cápsula. Isso ocorre porque a tinta e a nigrosina chinesas são substâncias incapazes de penetrar no polissacarídeo que compõe a cápsula dos microrganismos vivos.

Note-se que outras estruturas que podem estar presentes na amostra direta, como leucócitos ou glóbulos vermelhos, também não penetram.

No entanto, se os microrganismos estão mortos, a tintura pode penetrar neles, de modo que essa coloração também é útil para avaliar a viabilidade dos microrganismos.

Técnica

Materiais

Nigrosine

Nigrosine deve seu nome à cor preta que possui. É uma substância sintética obtida por aquecimento da mistura de compostos orgânicos – como nitrobenzina, anilina e cloridrato de anilina -, utilizando nesta reação um catalisador (ferro ou cobre).

Tinta chinesa

A tinta chinesa é uma substância usada principalmente pelos asiáticos para escrever, trabalhos de arte e pintura monocromática. É muito popular na cultura chinesa.

É obtido a partir da tinta da lula misturada ao carvão pulverizado, produto da queima de pequenas árvores resinosas.

Também é possível prepará-lo a partir da fuligem a partir da incineração de hidrocarbonetos (óleos vegetais), juntamente com uma gelatina protéica que fornece a consistência adequada para evitar a precipitação de partículas de carbono.

Especificações para amostragem

– Não requer jejum.

– A amostra de LCR, escarro ou líquido estéril deve conter pelo menos 1 ml de volume e deve ser transferida à temperatura ambiente para o laboratório imediatamente.

– As amostras de líquido cefalorraquidiano e líquidos estéreis devem ser coletadas por um médico especializado.

– Também pode ser uma cultura pura de uma cepa suspeita ligada aos patógenos mencionados acima.

Execução da técnica com amostras diretas

– As amostras devem ser centrifugadas, depois o sobrenadante é descartado e o sedimento é retirado.

– Uma gota do material centrifugado (sedimento) e uma gota de tinta chinesa ou nigrosina são colocadas em uma lâmina limpa.

– Deve ser bem misturado e coberto com uma folha de lamínula, permitindo que a gota se espalhe como uma película fina sem exceder as bordas.

– Posteriormente, a preparação é montada no microscópio.

– Se a preparação estiver muito escura, pode ser diluída com água.

Execução da técnica com linhagens de cultura

– Uma porção muito pequena de uma colheita jovem é retirada com uma agulha de semeadura e dissolvida em uma gota de tinta chinesa previamente colocada em uma lâmina limpa.

– Uma lamela é colocada em cima.

– É observado no microscópio em 10X e depois em 40X.

Uma parte da colônia também pode ser dissolvida em água destilada e, a partir daí, pegue uma gota e misture-a com a tinta chinesa. Dessa forma, a preparação não será tão espessa, possibilitando observar as estruturas isoladamente; se houver aglomerações, isso não será bem observado.

Outra metodologia é a seguinte:

– Coloque uma gota da cultura de suspensão em uma extremidade da lâmina.

– Coloque uma gota de nigrosina na mesma extremidade e misture.

– Com a ajuda de outra lâmina, estenda a amostra como se estivesse sendo feito um esfregaço hematológico.

– Deixe secar e observe ao microscópio.

Observação microscópica

Você deve primeiro se concentrar com um objetivo de 10X para ter uma visão ampla do campo. Posteriormente, você deve procurar espaços livres; se houver, foque com 40X para ver os detalhes.

Vantagens

– É fácil de executar.

– É uma técnica econômica.

– Este método não exige que o esfregaço seja fixado ao calor ou a produtos químicos; Portanto, os microorganismos são observados sem distorção.

– A preparação fresca não precisa ser seca, para que possa ser observada imediatamente, gerando resultados rapidamente.

Desvantagem

Uma vez montados, os preparados frescos devem ser observados imediatamente; se eles puderem secar, não será mais possível observá-los e um novo deverá ser montado.

Coloração de tecido com tinta chinesa

Outra função que a tinta chinesa pode cumprir é nos laboratórios de patologia. Isso é aplicado a amostras de tecido removidas cirurgicamente para marcar as margens da ressecção do tumor.

O tecido marcado é pulverizado com ácido acético. Isso age como mordente e evita que a tinta vaze quando o tecido é submetido a processamento de rotina para a preparação da biópsia.

O procedimento envolve banhar o tecido em álcool e xileno e depois embeber em parafina. Essa marcação orienta o patologista ao observar o tecido, indicando onde está a margem da ressecção cirúrgica ou outro ponto de interesse.

Referências

  1. “Nigrosine”.Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 11 de julho de 2017 às 22:46 UTC 6 de janeiro de 2019 às 16:56: en.wikipedia.org
  2. «Tinta chinesa».Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 1 de outubro de 2018 às 03:08 UTC. 6 de janeiro de 2019 às 18:20: en.wikipedia.org/
  3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J et al. (2006). Funcionários da comunidade autônoma da Extremadura. Agenda específica Volume IV. Editorial MAD. Sevilha-Espanha, pp 211-212.
  4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) Especialista em laboratório, do Serviço de Saúde da Galiza (SERGAS). Volume de agenda de assuntos específicos 2. Editorial MAD. Sevilha-Espanha, pp 79-80.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA

Deixe um comentário

Este site usa cookies para lhe proporcionar a melhor experiência de usuário. política de cookies, clique no link para obter mais informações.

ACEPTAR
Aviso de cookies