MacConkey Agar: fundação, preparação e usos

O ágar de MacConkey é uma forma sólida, que permite o isolamento exclusivo de bactérias Gram-negativas. Por esse motivo, é um meio seletivo e também permite distinguir entre bacilos fermentativos e não fermentativos de lactose, o que o torna um meio diferencial. É um dos meios de cultura mais amplamente utilizados em um laboratório de microbiologia.

Este meio é usado principalmente para o isolamento de bacilos Gram-negativos pertencentes à família Enterobacteriaceae , incluindo espécies oportunistas e enteropatogênicas.

MacConkey Agar: fundação, preparação e usos 1

O ágar MacConkey semeado com dois tipos de bactérias. Colônias de fermentação de lactose do lado esquerdo, colônias de lactose não fermentadoras do lado direito.

Também pode ser utilizado para isolar outros bacilos entéricos que habitam o trato gastrointestinal, mas não pertencem a Enterobacteriaceae , como Aeromonas sp, Plesiomonas sp, entre outros.

Finalmente, pode isolar outros bacilos Gram-negativos, glicose não fermentativa, encontrados no ambiente, na água ou no solo, mas que às vezes podem ser patógenos oportunistas como Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaldades sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia , entre outros.

Fundação

Agar MacConkey

A base desse meio pode ser explicada através da descrição de seus componentes, uma vez que cada um tem um objetivo que determina sua propriedade.

Sais biliares e cristal violeta

Nesse sentido, o ágar MacConkey possui uma composição complexa. Antes de tudo, contém sais biliares e cristal violeta.

Esses elementos são responsáveis ​​por inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas e alguns bacilos Gram-negativos exigentes. Por sua vez, favorece o desenvolvimento de bacilos Gram-negativos que não são afetados por essas substâncias. Portanto, é um meio seletivo.

Diz-se que é ligeiramente seletivo em comparação com outros meios que também inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas e também da maioria das bactérias Gram-negativas.

É extremamente seletivo para um determinado gênero, como o ágar TCBS para isolamento de Vibrio cholerae e outras espécies halofílicas e alcalofílicas semelhantes.

Peptons, polipetonas e lactose

Contém substâncias que fornecem os nutrientes necessários aos microrganismos que se desenvolvem nesse ambiente, como peptonas, polipetonas e lactose.

A lactose é o ponto chave para o meio ser um meio diferencial, pois os microorganismos que têm a capacidade de fermentar a lactose desenvolverão colônias rosadas fortes.

Algumas bactérias podem fermentar a lactose lenta ou fracamente, desenvolvendo colônias rosa pálidas e permanecendo positivas à lactose.

Aqueles que não fermentam lactose usam peptonas como fonte de energia, produzindo amônia, alcalinizando o meio. Portanto, as colônias originárias são incolores ou transparentes.

Indicador PH

A mudança de cor é obtida através de outro composto essencial que possui o ágar MacConkey. Este composto é o indicador de pH, que neste caso é vermelho neutro.

A fermentação da lactose resulta em produção de ácidos mistos. Eles acidificam o meio a um pH abaixo de 6,8.

Isso faz com que o indicador de pH mude para um tom rosa intenso. A intensidade da cor pode variar dependendo do pH final.

Água destilada, cloreto de sódio e ágar

Por outro lado, contém água destilada e cloreto de sódio que proporcionam ao ambiente uma hidratação e equilíbrio osmóticos. Finalmente, o meio contém agar, que é a base que fornece a consistência do meio sólido.

O meio de ágar MacConkey preparado deve ter um pH final ajustado para 7,1 ± 0,2.

Preparação

Para um litro de ágar MacConkey, 50 gramas do meio desidratado devem ser pesados, depois colocados em um frasco e dissolvidos em um litro de água destilada. Após 10 minutos de descanso, é aquecido constantemente misturando até ferver por 1 minuto.

A fiola é então colocada na autoclave e esterilizada a 121 ° C por 20 minutos. Depois de decorrido o tempo, ele é removido da autoclave e deixado esfriar até atingir uma temperatura de 45 ° C e depois servido em placas de Petri estéreis dentro de um exaustor laminar ou em frente ao queimador de Bunsen.

Deixar solidificar e armazenar em um transportador invertido e refrigerar no refrigerador a 2-8 ° C até o uso.

Para obter um ágar MacConkey que inibe o efeito de enxame produzido pelo gênero Proteus, é usado um ágar MacConkey com pouco sal.

Usos do ágar-ágar MacConkey convencional

O ágar MacConkey está incluído em todos os conjuntos de meios de cultura organizados para o plantio de amostras clínicas recebidas em laboratório. Também é útil em microbiologia de alimentos e microbiologia ambiental.

A variedade de bacilos Gram-negativos que crescem neste meio expressa características fenotípicas que ajudam no diagnóstico presuntivo das espécies em questão. Por exemplo, o tamanho, cor, consistência e cheiro das colônias, são algumas das características que podem orientar.

Nesse ambiente, as espécies de Escherichia coli , Klebsiella sp e Enterobacter sp produzem colônias rosadas fortes, cercadas por uma área de bile precipitada.

Enquanto isso, bactérias como Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp e Hafnia sp podem aparecer incolores após 24 horas ou rosa pálido em 24 a 48 horas.

Da mesma forma, os gêneros Proteus, Edwadsiella, Salmonella e Shigella produzem colônias incolores ou transparentes.

Outras variantes de ágar MacConkey

Existem outras variantes do ágar MacConkey que têm finalidades específicas. Abaixo são mencionados:

Agar MacConkey com sorbitol

Este meio foi projetado para distinguir a cepa enteropatogênica ( Escherichia coli enterohemorrhagic O157: H7) do restante das cepas de Escherichia coli.

Este meio altera o carboidrato da lactose para sorbitol. As estirpes enterohemorrágicas de E. coli O157: H7 diferem das demais porque não fermentam o sorbitol e, portanto, são obtidas colônias transparentes; no entanto, o restante das estirpes de E. coli fermenta o sorbitol e as colônias são fortes em rosa.

Agar MacConkey sem cristal violeta ou sal

Este ágar difere bastante do ágar clássico MacConkey, pois não possui cristal violeta, as bactérias Gram-positivas podem crescer.

Por outro lado, a ausência de sal inibe o aparecimento de enxames no ágar produzido por alguns bacilos entéricos, como os do gênero Proteus, facilitando assim o isolamento de todas as bactérias presentes, incluindo as bactérias Gram-positivas.

Agar MacConkey com cefoperazona

Esta variante de ágar MacConkey foi projetada para isolar inicialmente Laribacter hongkongensis e posteriormente percebeu que era útil para o isolamento de Arcobacter butzleri. Os mbos são bacilos Gram-negativos ligeiramente curvos, resistentes à cefoperazona.

Essas bactérias foram recentemente relacionadas como causas de gastroenterite e diarréia adquiridas em indivíduos asiáticos e europeus, apresentando como dois patógenos emergentes potentes.

O antibiótico permite inibir a flora acompanhante do trato gastrointestinal, o que favorece o desenvolvimento dessas bactérias, impedindo-as de passar despercebidas, pois necessitam de 72 horas para crescer.

Agar MacConkey preparado com 10% v / v de água do mar

Esta variante é útil para a avaliação de indicadores sanitários bacterianos de contaminação fecal, incluindo coliformes totais e coliformes fecais em água salgada recreativa (praias e baías).

Cortez et al em 2013 demonstraram que o meio preparado dessa maneira aumenta significativamente a recuperação desses microrganismos no ambiente salino, em comparação com o uso do ágar MacConkey preparado com água destilada.

Isso ocorre porque no meio modificado é estimulado o crescimento de bactérias fisiologicamente em um estado de latência “viável, mas não cultivável”; portanto, elas não são recuperáveis ​​em meios convencionais.

Referências

  1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Uso do ágar cefoperazona MacConkey para isolamento seletivo de Laribacter hongkongensis .J Clin Microbiol . 2003; 41 (10): 4839-41.
  2. «MacConkey Agar.» Wikipedia, A Enciclopédia Livre . 4 de abr de 2018 às 18:16 UTC. 29 de dez de 2018 às 15:22 en.wikipedia.org
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnóstico microbiológico de Bailey & Scott. 12 ed. Argentina Editorial Panamericana SA
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
  5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Efeito de meios de cultura preparados com água do mar sobre indicadores sanitários em águas marinhas de spas de Chichiriviche, estado de Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologia clínica prática. Universidade de Cádiz, 2ª edição. Serviço de Publicações da UCA.

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