O MacConkey Agar é um meio de cultura seletivo e diferencial desenvolvido por Alfred Theodore MacConkey em 1900. Ele é amplamente utilizado na microbiologia para o isolamento e diferenciação de enterobactérias, especialmente Escherichia coli e Salmonella spp. Este meio é preparado com peptona, lactose, sais biliares, cristal violeta e vermelho de fenol, que inibem o crescimento de bactérias gram-positivas e permitem o crescimento de bactérias gram-negativas que fermentam lactose. O MacConkey Agar é utilizado em laboratórios clínicos para identificar patógenos entéricos em amostras clínicas, como fezes, urina e fluidos corporais. Ele é uma ferramenta importante para o diagnóstico de infecções bacterianas e pode ajudar os profissionais de saúde a escolher o tratamento mais adequado para os pacientes.
Preparação do meio de cultura MacConkey: passo a passo para resultados precisos.
O MacConkey Agar é um meio de cultura seletivo e diferencial amplamente utilizado em microbiologia para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas. Ele foi desenvolvido por Alfred Theodore MacConkey em 1900 e desde então se tornou um dos meios de cultura mais populares em laboratórios de microbiologia.
Para preparar o meio de cultura MacConkey, siga os seguintes passos:
1. Pesagem dos ingredientes: Pese os ingredientes necessários, como peptona, extrato de levedura, lactose, sais biliares, vermelho de neutro e ágar. Certifique-se de seguir as proporções corretas conforme as instruções de preparo.
2. Dissolução dos ingredientes: Dissolva os ingredientes em água destilada aquecida, mexendo bem para garantir que estejam completamente dissolvidos. Aqueça até ferver para garantir a esterilização do meio.
3. Ajuste do pH: O meio de cultura MacConkey deve ter um pH ácido, em torno de 7.1. Utilize ácido clorídrico ou hidróxido de sódio para ajustar o pH conforme necessário, utilizando um medidor de pH para garantir precisão.
4. Esterilização: Após ajustar o pH, esterilize o meio de cultura MacConkey em autoclave a 121°C por 15 minutos. Certifique-se de que o meio esteja bem esterilizado antes de utilizá-lo.
Após preparar o meio de cultura MacConkey, ele estará pronto para ser utilizado em placas de Petri para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas. Este meio permite a seleção de bactérias que fermentam lactose, além de diferenciar entre lactose-fermentadoras e não fermentadoras com base na cor das colônias.
O MacConkey Agar é uma ferramenta essencial em microbiologia, permitindo a identificação de patógenos intestinais, como Escherichia coli e Salmonella, de forma rápida e eficaz. Com a preparação correta do meio de cultura MacConkey, é possível obter resultados precisos e confiáveis em testes microbiológicos.
Finalidade do meio MacConkey na identificação de bactérias gram-negativas fermentadoras de lactose.
A finalidade do meio MacConkey na identificação de bactérias gram-negativas fermentadoras de lactose é devido à sua composição específica. O meio contém sais biliares e cristal violeta, que inibem o crescimento de bactérias gram-positivas, permitindo apenas o crescimento de bactérias gram-negativas. Além disso, a presença de lactose como fonte de carbono permite a identificação de bactérias capazes de fermentar esse açúcar.
As bactérias fermentadoras de lactose irão produzir ácido lático durante o processo de fermentação, o que resulta na diminuição do pH do meio. Isso leva à mudança de cor do indicador de pH presente no meio MacConkey, de vermelho para amarelo, indicando a fermentação da lactose. Bactérias como Escherichia coli e Salmonella são exemplos de bactérias gram-negativas que fermentam a lactose e são capazes de crescer neste meio.
Portanto, o meio MacConkey é uma ferramenta útil na identificação e diferenciação de bactérias gram-negativas fermentadoras de lactose, auxiliando na caracterização e no diagnóstico de infecções bacterianas. Sua utilização é comum em laboratórios de microbiologia clínica e de alimentos, onde a identificação precisa das bactérias presentes é essencial para a tomada de decisões terapêuticas e de segurança alimentar.
Para que serve o Ágar MacConkey na análise microbiológica de fezes?
O Ágar MacConkey é um meio de cultura seletivo e diferencial amplamente utilizado na microbiologia para o isolamento e identificação de bactérias intestinais, como a Escherichia coli, presentes nas fezes. Este meio foi desenvolvido por Alfred Theodore MacConkey no início do século XX e é uma ferramenta essencial na análise microbiológica de amostras fecais.
Na preparação do Ágar MacConkey, são adicionados sais biliares e cristal violeta, que inibem o crescimento de bactérias gram-positivas, permitindo a seleção de bactérias gram-negativas, como a E. coli. Além disso, o pH do meio é ajustado para favorecer o crescimento de certas bactérias, como aquelas capazes de fermentar lactose.
Quando as fezes são inoculadas no Ágar MacConkey, as bactérias presentes na amostra irão crescer e formar colônias. Bactérias como a E. coli, que fermentam a lactose, produzem ácido lático como subproduto, o que resulta na acidificação do meio e em colônias de cor rosa. Já as bactérias que não fermentam a lactose formam colônias incolores.
Assim, o Ágar MacConkey permite a identificação e diferenciação de bactérias intestinais com base em sua capacidade de fermentar lactose e em suas características bioquímicas. Portanto, este meio de cultura desempenha um papel crucial na análise microbiológica de fezes, auxiliando no diagnóstico de infecções gastrointestinais e na monitorização da microbiota intestinal.
Importância da lactose como fonte de carbono no meio MacConkey para microbiologia.
A lactose é um açúcar presente no leite e é uma importante fonte de carbono no meio MacConkey para microbiologia. Este meio seletivo e diferencial é amplamente utilizado para o isolamento e identificação de bactérias Gram-negativas, especialmente aquelas da família Enterobacteriaceae.
A presença de lactose no meio MacConkey permite a diferenciação entre bactérias que são capazes de fermentar esse açúcar e aquelas que não possuem essa capacidade. As bactérias que fermentam a lactose produzem ácido lático como subproduto, o que leva a uma mudança no pH do meio. Isso resulta na formação de colônias rosadas ou avermelhadas, indicando a fermentação da lactose, enquanto as bactérias que não fermentam a lactose formam colônias incolores.
Além disso, a presença de sais biliares e cristal violeta no meio MacConkey inibe o crescimento de bactérias Gram-positivas, tornando-o seletivo para bactérias Gram-negativas. Isso é importante para isolar e identificar patógenos como Escherichia coli, Salmonella e Shigella, que são frequentemente associados a infecções intestinais.
MacConkey Agar: fundação, preparação e usos
O ágar de MacConkey é uma forma sólida, que permite o isolamento exclusivo de bactérias Gram-negativas. Por esse motivo, é um meio seletivo e também permite distinguir entre bacilos fermentativos e não fermentativos de lactose, o que o torna um meio diferencial. É um dos meios de cultura mais amplamente utilizados em um laboratório de microbiologia.
Este meio é usado principalmente para o isolamento de bacilos Gram-negativos pertencentes à família Enterobacteriaceae , incluindo espécies oportunistas e enteropatogênicas.
Também pode ser utilizado para isolar outros bacilos entéricos que habitam o trato gastrointestinal, mas não pertencem a Enterobacteriaceae , como Aeromonas sp, Plesiomonas sp, entre outros.
Finalmente, pode isolar outros bacilos Gram-negativos, glicose não fermentativa, encontrados no ambiente, na água ou no solo, mas que às vezes podem ser patógenos oportunistas como Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaldades sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia , entre outros.
Fundação
Agar MacConkey
A base desse meio pode ser explicada através da descrição de seus componentes, uma vez que cada um tem um objetivo que determina sua propriedade.
Sais biliares e cristal violeta
Nesse sentido, o ágar MacConkey possui uma composição complexa. Antes de tudo, contém sais biliares e cristal violeta.
Esses elementos são responsáveis por inibir o crescimento de bactérias Gram-positivas e alguns bacilos Gram-negativos exigentes. Por sua vez, favorece o desenvolvimento de bacilos Gram-negativos que não são afetados por essas substâncias. Portanto, é um meio seletivo.
Diz-se que é ligeiramente seletivo em comparação com outros meios que também inibem o crescimento de bactérias Gram-positivas e também da maioria das bactérias Gram-negativas.
É extremamente seletivo para um determinado gênero, como o ágar TCBS para isolamento de Vibrio cholerae e outras espécies halofílicas e alcalofílicas semelhantes.
Peptons, polipetonas e lactose
Contém substâncias que fornecem os nutrientes necessários aos microrganismos que se desenvolvem nesse ambiente, como peptonas, polipetonas e lactose.
A lactose é o ponto chave para o meio ser um meio diferencial, pois os microorganismos que têm a capacidade de fermentar a lactose desenvolverão colônias rosadas fortes.
Algumas bactérias podem fermentar a lactose lenta ou fracamente, desenvolvendo colônias rosa pálidas e permanecendo positivas à lactose.
Aqueles que não fermentam lactose usam peptonas como fonte de energia, produzindo amônia, alcalinizando o meio. Portanto, as colônias originárias são incolores ou transparentes.
Indicador PH
A mudança de cor é obtida através de outro composto essencial que possui o ágar MacConkey. Este composto é o indicador de pH, que neste caso é vermelho neutro.
A fermentação da lactose resulta em produção de ácidos mistos. Eles acidificam o meio a um pH abaixo de 6,8.
Isso faz com que o indicador de pH mude para um tom rosa intenso. A intensidade da cor pode variar dependendo do pH final.
Água destilada, cloreto de sódio e ágar
Por outro lado, contém água destilada e cloreto de sódio que proporcionam ao ambiente uma hidratação e equilíbrio osmóticos. Finalmente, o meio contém agar, que é a base que fornece a consistência do meio sólido.
O meio de ágar MacConkey preparado deve ter um pH final ajustado para 7,1 ± 0,2.
Preparação
Para um litro de ágar MacConkey, 50 gramas do meio desidratado devem ser pesados, depois colocados em um frasco e dissolvidos em um litro de água destilada. Após 10 minutos de descanso, é aquecido constantemente misturando até ferver por 1 minuto.
A fiola é então colocada na autoclave e esterilizada a 121 ° C por 20 minutos. Depois de decorrido o tempo, ele é removido da autoclave e deixado esfriar até atingir uma temperatura de 45 ° C e depois servido em placas de Petri estéreis dentro de um exaustor laminar ou em frente ao queimador de Bunsen.
Deixar solidificar e armazenar em um transportador invertido e refrigerar no refrigerador a 2-8 ° C até o uso.
Para obter um ágar MacConkey que inibe o efeito de enxame produzido pelo gênero Proteus, é usado um ágar MacConkey com pouco sal.
Usos do ágar-ágar MacConkey convencional
O ágar MacConkey está incluído em todos os conjuntos de meios de cultura organizados para o plantio de amostras clínicas recebidas em laboratório. Também é útil em microbiologia de alimentos e microbiologia ambiental.
A variedade de bacilos Gram-negativos que crescem neste meio expressa características fenotípicas que ajudam no diagnóstico presuntivo das espécies em questão. Por exemplo, o tamanho, cor, consistência e cheiro das colônias, são algumas das características que podem orientar.
Nesse ambiente, as espécies de Escherichia coli , Klebsiella sp e Enterobacter sp produzem colônias rosadas fortes, cercadas por uma área de bile precipitada.
Enquanto isso, bactérias como Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp e Hafnia sp podem aparecer incolores após 24 horas ou rosa pálido em 24 a 48 horas.
Da mesma forma, os gêneros Proteus, Edwadsiella, Salmonella e Shigella produzem colônias incolores ou transparentes.
Outras variantes de ágar MacConkey
Existem outras variantes do ágar MacConkey que têm finalidades específicas. Abaixo são mencionados:
Agar MacConkey com sorbitol
Este meio foi projetado para distinguir a cepa enteropatogênica ( Escherichia coli enterohemorrhagic O157: H7) do restante das cepas de Escherichia coli.
Este meio altera o carboidrato da lactose para sorbitol. As estirpes enterohemorrágicas de E. coli O157: H7 diferem das demais porque não fermentam o sorbitol e, portanto, são obtidas colônias transparentes; no entanto, o restante das estirpes de E. coli fermenta o sorbitol e as colônias são fortes em rosa.
Agar MacConkey sem cristal violeta ou sal
Este ágar difere bastante do ágar clássico MacConkey, pois não possui cristal violeta, as bactérias Gram-positivas podem crescer.
Por outro lado, a ausência de sal inibe o aparecimento de enxames no ágar produzido por alguns bacilos entéricos, como os do gênero Proteus, facilitando assim o isolamento de todas as bactérias presentes, incluindo as bactérias Gram-positivas.
Agar MacConkey com cefoperazona
Esta variante de ágar MacConkey foi projetada para isolar inicialmente Laribacter hongkongensis e posteriormente percebeu que era útil para o isolamento de Arcobacter butzleri. Os mbos são bacilos Gram-negativos ligeiramente curvos, resistentes à cefoperazona.
Essas bactérias foram recentemente relacionadas como causas de gastroenterite e diarréia adquiridas em indivíduos asiáticos e europeus, apresentando como dois patógenos emergentes potentes.
O antibiótico permite inibir a flora acompanhante do trato gastrointestinal, o que favorece o desenvolvimento dessas bactérias, impedindo-as de passar despercebidas, pois necessitam de 72 horas para crescer.
Agar MacConkey preparado com 10% v / v de água do mar
Esta variante é útil para a avaliação de indicadores sanitários bacterianos de contaminação fecal, incluindo coliformes totais e coliformes fecais em água salgada recreativa (praias e baías).
Cortez et al em 2013 demonstraram que o meio preparado dessa maneira aumenta significativamente a recuperação desses microrganismos no ambiente salino, em comparação com o uso do ágar MacConkey preparado com água destilada.
Isso ocorre porque no meio modificado é estimulado o crescimento de bactérias fisiologicamente em um estado de latência “viável, mas não cultivável”; portanto, elas não são recuperáveis em meios convencionais.
Referências
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- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnóstico microbiológico (5ª ed.). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Efeito de meios de cultura preparados com água do mar sobre indicadores sanitários em águas marinhas de spas de Chichiriviche, estado de Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
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